"Государственная поверочная схема для средств измерений содержания копий последовательности ДНК"
(утв. Приказом Росстандарта от 31.10.2024 N 2614)

1.1. Настоящая государственная поверочная схема для средств измерений содержания копий последовательности ДНК (далее - ГПС) распространяется на средства измерений числа копий последовательности ДНК в диапазоне значений от 100 до 100000, концентрации копий последовательности ДНК <1> в диапазоне значений от 10 мм^-3 до 10000 мм^-3 и отношения числа копий последовательности ДНК <2> в диапазоне значений от 1:1000 до 1:1 (далее - содержания копий последовательности ДНК) и устанавливает порядок передачи <3> единицы числа копий последовательности ДНК, единицы концентрации копий последовательности ДНК и единицы отношения числа копий последовательности ДНК от государственного первичного эталона этим средствам измерений при помощи вторичных эталонов и рабочих эталонов с указанием показателей точности и методов передачи единицы величины.

--------------------------------

<1> Величина "концентрации копий последовательности ДНК" является связанной с величиной "число копий последовательности ДНК". Концентрацию копий последовательности ДНК T_seq рассчитывают как отношение числа копий последовательностей ДНК N_seq в образце к объему образца V_DNA: .

<2> Величина "отношение числа копий последовательностей ДНК" является связанной с величиной "число копий последовательности ДНК". Отношение числа копий последовательностей ДНК R_seq1/seq2 представляет отношение числа копий одной последовательности ДНК N_seq1 к числу копий другой последовательности ДНК N_seq2: .

<3> Воспроизведение и передачу единиц содержания копий последовательности ДНК выполняют с использованием ДНК в водных буферных растворах с низкой ионной силой (Буферы, используемые для хранения ДНК после выделения из матрицы биологического материала, такие как буферный раствор Трис/этилендиаминтетрауксусная кислота (буферный раствор TE, 1x или 0,1x) с установленным значением pH 8,0 по ГОСТ ISO 21571-2018 или аналогичные).

1.2. Графическая часть государственной поверочной схемы для средств измерений содержания копий последовательности ДНК представлена в приложении А к ГПС.

В ГПС применены следующие сокращения:

ВЭТ - вторичный эталон;

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота;

НСП - неисключенная систематическая погрешность;

ПЦР - полимеразная цепная реакция;

СКО - среднеквадратичное отклонение;

Трис - трис(гидроксиметил)аминометан.

3.1. Государственный первичный эталон единицы числа копий последовательности ДНК ГЭТ 220-2024 состоит из комплекса для воспроизведения и передачи единиц числа копий последовательности ДНК, концентрации копий последовательности ДНК, отношения числа копий последовательности ДНК, в состав которого входят:

установка на основе метода оптической (световой) микроскопии для измерений линейных размеров капель;

установка на основе метода цифровой полимеразной цепной реакции (цифровой ПЦР) для измерений числа копий последовательности ДНК, концентрации копий последовательности ДНК и отношения числа копий последовательности ДНК;

установка на основе метода направленного секвенирования (по Сэнгеру) для определения последовательности нуклеотидов в составе ДНК с помощью капиллярного электрофореза в линейном полимере.

3.2. Диапазон значений, в котором воспроизводится единица величины, составляет:

для числа копий последовательности ДНК - от 100 до 100000;

для концентрации копий последовательности ДНК - от 10 мм^-3 до 10000 мм^-3;

для отношения числа копий последовательности ДНК - от 1:1000 до 1:1.

3.3. Государственный первичный эталон обеспечивает <4>:

3.3.1. Воспроизведение единицы величины числа копий последовательности ДНК с относительным средним квадратическим отклонением результата измерений, S₀, при 5 (пяти) независимых измерениях:

от 13,0% до 4,6% в диапазоне от 100 до 1500;

от 4,6% до 2,0% в диапазоне свыше 1500 до 3000;

от 2,0% до 1,8% в диапазоне свыше 3000 до 100000.

--------------------------------

<4> Воспроизведение единиц числа копий последовательности ДНК, концентрации копий последовательности ДНК и отношения числа копий последовательности ДНК с использованием государственного первичного эталона базируется на применении метода цифровой ПЦР; для обеспечения функционирования государственного первичного эталона используют единицы величин длины [метр (м)] и массы [килограмм (кг)], заимствованные у эталонов из других поверочных схем и получаемые в процессе поверки (калибровки) соответствующих средств измерений, входящих в состав эталона.

Относительная неисключенная систематическая погрешность, , не превышает:

2,1% в диапазоне от 100 до 1500;

2,3% в диапазоне свыше 1500 до 3000;

2,4% в диапазоне свыше 3000 до 100000.

Относительная стандартная неопределенность, оцениваемая по типу A, u_A0, при 5 (пяти) независимых измерениях:

от 13,0% до 4,6% в диапазоне от 100 до 1500;

от 4,6% до 2,0% в диапазоне свыше 1500 до 3000;

от 2,0% до 1,8% в диапазоне свыше 3000 до 100000.

Относительная стандартная неопределенность, оцениваемая по типу B, u_B0, не превышает:

1,2% в диапазоне от 100 до 1500;

1,3% в диапазоне свыше 1500 до 3000;

1,4% в диапазоне свыше 3000 до 100000.

3.3.2. Воспроизведение единицы величины концентрации копий последовательности ДНК с относительным средним квадратическим отклонением результата измерений, S₀, при 5 (пяти) независимых измерениях:

от 13,0% до 4,6% в диапазоне от 10 до 150 мм^-3;

от 4,6% до 2,0% в диапазоне свыше 150 до 300 мм^-3;

от 2,0% до 1,8% в диапазоне свыше 300 до 10000 мм^-3.

Относительная неисключенная систематическая погрешность не превышает:

2,7% в диапазоне от 10 до 150 мм^-3;

2,8% в диапазоне свыше 150 до 300 мм^-3;

3,0% в диапазоне свыше 300 до 10000 мм^-3.

Относительная стандартная неопределенность, оцениваемая по типу A, u_A0, при 5 (пяти) независимых измерениях:

от 13,0% до 4,6% в диапазоне от 10 до 150 мм^-3;

от 4,6% до 2,0% в диапазоне свыше 150 до 300 мм^-3;

от 2,0% до 1,8% в диапазоне свыше 300 до 10000 мм^-3.

Относительная стандартная неопределенность, оцениваемая по типу B, u_B0, не превышает:

1,6% в диапазоне от 10 до 150 мм^-3;

1,6% в диапазоне свыше 150 до 300 мм^-3;

1,7% в диапазоне свыше 300 до 10000 мм^-3.

3.3.3. Воспроизведение единицы величины отношения числа копий последовательности ДНК с относительным средним квадратическим отклонением результата измерений, S₀, при 5 (пяти) независимых измерениях:

от 13,1% до 5,0% в диапазоне от 1:1000 до 1:67 (от 0,001 до 0,015);

от 5,0% до 2,8% в диапазоне свыше 1:67 до 1:33 (свыше 0,015 до 0,030);

от 2,7% до 2,5% в диапазоне свыше 1:33 до 1:1 (свыше 0,030 до 1,000).

Относительная неисключенная систематическая погрешность не превышает:

2,4% в диапазоне от 1:1000 до 1:67 (от 0,001 до 0,015);

2,4% в диапазоне свыше 1:67 до 1:33 (свыше 0,015 до 0,030);

2,1% в диапазоне свыше 1:33 до 1:1 (свыше 0,030 до 1,000).

Относительная стандартная неопределенность, оцениваемая по типу A, u_A0, при 5 (пяти) независимых измерениях:

от 13,1% до 5,0% в диапазоне от 1:1000 до 1:67 (от 0,001 до 0,015);

от 5,0% до 2,8% в диапазоне свыше 1:67 до 1:33 (свыше 0,015 до 0,030);

от 2,7% до 2,5% в диапазоне свыше 1:33 до 1:1 (свыше 0,030 до 1,000).

Относительная стандартная неопределенность, оцениваемая по типу B, u_B0, не превышает:

1,4% в диапазоне от 1:1000 до 1:67 (от 0,001 до 0,015);

1,4% в диапазоне свыше 1:67 до 1:33 (свыше 0,015 до 0,030);

1,2% в диапазоне свыше 1:33 до 1:1 (свыше 0,030 до 1,000).

3.4. Государственный первичный эталон применяют для передачи единиц величин вторичным и рабочим эталонам числа копий последовательности ДНК, концентрации копий последовательности ДНК и отношения числа копий последовательности ДНК <5>:

3.4.1 методом сличений при помощи эталонов сравнения, изготовленных на комплексе установок государственного первичного эталона с метрологическими характеристиками, приведенными в таблице 1;

3.4.2 методом прямых измерений с помощью комплекса установок государственного первичного эталона.

--------------------------------

<5> Государственный первичный эталон подлежит сличению с международными эталонами единиц величин Международного бюро мер и весов и национальными эталонами других государств - участников соглашения CIPM MRA (Договоренность о взаимном признании национальных эталонов, сертификатов калибровки и результатов измерений Национальных Метрологических Институтов).

3.5. При передаче единиц содержания копий последовательности ДНК должно быть обеспечено соотношение показателей точности между государственным первичным эталоном, вторичными эталонами, рабочими эталонами и средствами измерений не более ¹/₂.

4.1. В качестве вторичных эталонов применяют высокоточные измерительные установки и стандартные образцы концентрации копий последовательности ДНК и отношения числа копий последовательности ДНК.

4.2. Высокоточные измерительные установки, выполняющие функцию вторичных эталонов, предназначены для передачи единиц содержания копий последовательности ДНК рабочим эталонам методом прямых измерений в диапазонах измерений:

числа копий последовательности ДНК - от 100 до 100000;

концентрации копий последовательности ДНК - от 10 мм^-3 до 10000 мм^-3;

отношения числа копий последовательностей ДНК - от 1:1000 до 1:1.

Вторичные эталоны не предназначены для решения задачи идентификации неизвестных последовательностей ДНК и воспроизведения числа копий таких последовательностей.

4.3. Относительные средние квадратические отклонения суммарной погрешности (относительная суммарная стандартная неопределенность ) для ВЭТ - высокоточных измерительных установок при 5 (пяти) независимых измерениях, не должны превышать значения, указанные в таблице 2.

4.4. Высокоточные измерительные установки, выполняющие функцию вторичных эталонов, воспроизводят и передают единицы величин стандартным образцам, выполняющим функцию рабочих эталонов, методом прямых измерений.

4.5. Требования к метрологическим характеристикам стандартных образцов, выполняющим функцию вторичных эталонов, приведены в таблице 3.

4.6. Стандартные образцы, выполняющие функцию вторичных эталонов, применяют для передачи единиц величин концентрации копий последовательности ДНК и отношения числа копий последовательностей ДНК средствам измерений методом прямых измерений и методом косвенных измерений <6> с учетом требований пункта 3.6 ГПС.

--------------------------------

<6> Здесь и далее по тексту настоящей поверочной схемы методы прямых и косвенных измерений используются для передачи единиц величин от стандартных образцов измерительным установкам или от измерительных установок стандартным образцам, при этом метод прямых измерений подразумевает использование стандартных образцов и его аттестованного значения из паспорта как есть, без дополнительных процедур приготовления; метод косвенных измерений предполагает применение процедур разбавления стандартного образца и расчета аттестованного значения приготовленного раствора.

5.1. В качестве рабочих эталонов применяют стандартные образцы состава ДНК, аттестованные по содержанию копий последовательности ДНК в диапазонах значений:

концентрации копий последовательности ДНК - от 150 мм^-3 до 10000 мм^-3;

отношения числа копий последовательностей ДНК - от 1:111 до 1:1.

5.2. Доверительные границы относительных погрешностей , при доверительной вероятности 95%, должны находиться в диапазонах значений, указанных в таблице 4.

5.3. Стандартные образцы, выполняющие функцию рабочих эталонов, применяют для передачи единиц величин концентрации копий последовательности ДНК и отношения числа копий последовательностей ДНК средствам измерений методом прямых измерений и методом косвенных измерений с учетом требований пункта 3.6 ГПС.

5.4. Стандартные образцы, выполняющие функцию рабочих эталонов, применяют для поверки средств измерений содержания копий последовательности ДНК методом прямых измерений и методом косвенных измерений.

6.1. В качестве средств измерений содержания копий последовательности ДНК <7> применяют, в том числе, установки для цифровой ПЦР и установки для ПЦР в реальном времени.

--------------------------------

<7> Средства измерений содержания копий последовательности ДНК применяют в клинической лабораторной диагностике, медико-генетических исследованиях, при установлении соответствия продукции санитарно-эпидемиологическим и гигиеническим требованиям, фитосанитарном контроле, контроле безопасности пищевой продукции, кормов, агропромышленного сырья, ветеринарном контроле, контроле технологических процессов в биотехнологических производствах и т.д.

6.2. Средства измерений получают единицы величин от стандартных образцов, выполняющих функцию вторичных эталонов методом прямых измерений и методом косвенных измерений или от стандартных образцов, выполняющих функцию рабочих эталонов методом прямых измерений и методом косвенных измерений.

6.3. Доверительные границы относительных погрешностей , при доверительной вероятности 95% должны не превышать значений, указанных в таблице 5.