"Р 4.2.4020-24. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Изменения N 1 в Р 4.2.3676-20 "Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности". Руководство"
(утв. Роспотребнадзором 31.05.2024)

1. Разработаны ФБУН "ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (Демина Ю.В., Бидевкина М.В., , Комаров В.Ю., Еремеева Н.И., Новокшонова И.В., Мукабенов Ф.А., Матросенко М.В., Геворкян И.С., Скопин А.Ю.).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой "31" мая 2024 г.

3. Р 4.2.4020-24 введено взамен пунктов 3.2.11.2, 3.2.11.5, 3.2.11.7, 3.2.11.9, 3.2.12.2, 3.2.12.5, 3.2.12.7, 3.2.12.9, главы V, пункта 6.5.12 Р 4.2.3676-20 "Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности", утвержденного руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 18.12.2020.

1. В главе III:

1.1. Сноску 1 в пункте 3.2.11.2 изложить в следующей редакции:

"<1> Пункты 366 - 371 СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней", утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 4 (зарегистрировано Минюстом России 15.02.2021, регистрационный N 62500), с изменениями, внесенными постановлениями Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 11.02.2022 N 5 (зарегистрировано Минюстом России 01.03.2022, регистрационный N 67587); от 25.05.2022 N 16 (зарегистрировано Минюстом России 21.06.2022, регистрационный N 68934) (далее - СанПиН 3.3686-21).".

1.2. В абзаце втором пункта 3.2.11.5 слова "- устройство для отбора проб воздуха с производительностью 2 - 20 м³/мин" заменить словами "- устройство для отбора проб воздуха с производительностью 2 - 20 дм³/мин".

1.3. Пункт 3.2.11.7 изложить в следующей редакции:

"3.2.11.7. Подготовка к эксперименту осуществляется в соответствии с п. 3.2.11.3.

Порядок отбора проб воздуха:

- контроль обсемененности воздуха до начала распыления суспензии тест-микроорганизма;

- контроль обсемененности воздуха после распыления суспензии тест-микроорганизма;

- контроль эффективности обеззараживания воздуха осуществляют путем отбора проб через определенные промежутки времени в зависимости от предполагаемой эффективности средств.

Для исследования отбирается 50 дм³ воздуха (объем пробы). После отбора проб жидкость из 2 склянок по типу Дрекселя смешивают для формирования средней пробы, которую по 1 - 10 см³ вносят в стерильную чашку Петри, затем заливают предварительно растопленными и остуженными до плюс 45 °C питательными средами, пригодными для культивирования S. aureus. Посевы помещают в термостат и инкубируют при температуре t плюс (37 +/- 1) °C в течение 48 ч. После инкубации подсчитывают количество выросших колоний и рассчитывают обсемененность 1 м³ воздуха.

Пример (1):

где: 10 - количество колоний, выросших на чашке Петри, КОЕ;

1 - количество посеянного материала, см³;

30 - объем стерильной водопроводной воды, см³;

1000 - объем 1 м³ воздуха камеры, дм³;

50 - объем пробы воздуха, дм³;

X - КОЕ в 1 м³ воздуха".

1.4. Пункт 3.2.11.9 дополнить сноской 2 следующего содержания:

"<2> Приложение 6 к СанПиН 3.3686-21.".

1.5. Пункт 3.2.12.2 изложить в следующей редакции:

"3.2.12.2. При исследовании эффективности обеззараживания воздуха ультрафиолетовыми облучателями и иными, предназначенными для этих целей устройствами, в качестве тест-микроорганизмов используют S. aureus. Соблюдаются меры безопасности при работе с аэрозолями микроорганизмов, относящихся к ПБА I - IV групп патогенности в соответствии с п. 3.2.11.2.".

1.6. Пункт 3.2.12.5 изложить в следующей редакции:

"3.2.12.5. При определении эффективности дезинфекционных средств и технологий, предназначенных для обеззараживания воздуха, используют аспирационный метод, изложенный в п. 3.2.11.5".

1.7. Пункт 3.2.12.7 изложить в следующей редакции:

"3.2.12.7. Подготовка к эксперименту осуществляется в соответствии с п. 3.2.11.3.

Порядок отбора проб воздуха, исследование, подсчет количества выросших колоний, расчет обсемененности 1 м³ воздуха проводится в соответствии с п. 3.2.11.7.".

1.8. Пункт 3.2.12.9 изложить в следующей редакции:

"3.2.12.9. Критерии бактерицидной эффективности дезинфекционных средств и технологий, предназначенных для обеззараживания воздуха, изложены в п. 3.2.11.9.".

2. Главу V изложить в следующей редакции:

5.1.1. Дератизационные средства - это химические, механические и физические средства умерщвления или отпугивания грызунов, применяемые с целью снижения их численности.

Химические средства включают родентициды в различных формах применения (например, мягкие и твердые брикеты, гранулы), синергисты и роденторепелленты.

Механические средства - устройства, умерщвляющие грызунов (давилки, капканы, клеевые ловушки), а также средства отлова однократного и многократного действия, ограничивающие передвижение грызунов (живоловки).

Физические средства - отпугивающие устройства (ультразвуковые и электромагнитные излучатели, электрические барьеры).

Основными показателями, которые используются для оценки действия дератизационных средств на грызунов, являются целевая эффективность и биологическая активность. Целевая эффективность - максимальная величина реакции грызунов определенного вида на воздействие дератизационных средств, которая может быть достигнута при их использовании. Биологическая активность родентицида определяет период продолжительности жизни грызуна от момента воздействия на него дератизационным средством до его гибели.

5.1.2. Дератизационные средства и рекомендуемые способы их применения удовлетворяют следующим условиям:

- эффективны в отношении целевых видов грызунов;

- безопасны для человека и нецелевых видов животных, что предполагает наличие антидотов или соответствующих мер применения;

- не обладают репеллентными свойствами (за исключением репеллентов);

- средства дератизации внешне отличаются от пищевых продуктов, фуража, предметов домашнего обихода, лекарственных препаратов;

- родентицидные приманки для грызунов окрашиваются в яркий цвет во избежание несчастных случаев (отравление людей);

- в качестве пищевой основы приманок не используются недробленые семена подсолнуха и иные продукты, привлекательные для людей.

5.2.1. Требования к экспериментальным животным и условиям их содержания.

Дератизационные средства испытывают в лабораторных или естественных условиях местообитаниях грызунов. В лабораторных условиях оценивают эффективность дератизационных средств при одиночном или групповом содержании животных. В естественных условиях местообитания грызунов осуществляется уточнение режима применения и эффективности дератизационных средств.

В экспериментах используют лабораторные культуры потомков диких грызунов, выращенных в условиях вивария - серых крыс, домовых мышей и обыкновенных полевок.

Особей, отловленных в естественных местообитаниях, для опытов не используют, так как они могут быть заражены эктопаразитами, больны инфекционными болезнями или инвазиями, подвержены стрессам, могут содержать в организме антикоагулянт, а также плохо поедают предлагаемые корма и очень агрессивны, что окажет влияние на результаты экспериментов.

В случае необходимости лабораторную культуру грызунов получают от диких особей, отловленных в естественных местообитаниях. Грызунов обрабатывают от экто- и эндопаразитов. В течение месяца грызунов содержат поодиночке в карантине, наблюдают и отбирают внешне здоровых особей с блестящей шерстью, без повреждения конечностей или кожи, подвижных, с хорошим аппетитом. После карантина из оставшихся грызунов формируют пары для размножения и получения лабораторной культуры потомков диких грызунов.

Содержание и разведение целевых видов грызунов осуществляется в соответствии с подпунктами 4.2.2, 4.2.3 ГОСТ 33216-2014 и пунктом 4.1 ГОСТ 33215-2014. Обеспечивается полноценное и разнообразное кормление. Серых крыс и домовых мышей кормят гранулированным животным кормом, используют также зерновую смесь и овощи. Полевок, адаптированных к условиям лабораторного содержания, кормят гранулированными растительными и животными кормами, но обязательно добавляют к рациону зеленые корма, корнеплоды, фрукты, зерно.

5.2.2. Тест-объекты, используемые в экспериментах.

Тест-объекты, используемые в экспериментах, содержат в виварии или отлавливают в естественных условиях обитания (природные популяции). В зависимости от вида грызуна и количества единовременно доступных особей из природной популяции эксперименты проводятся непосредственно на собранном материале (в естественных условиях) или закладывают культуру для получения необходимого объема материала в следующих поколениях (например, для изучения чувствительности природных популяций к родентицидам различных химических групп).

Используют целевые виды (группы схожих по систематике и биологии видов) или модельные виды. Понятие модельного вида подразумевает возможность достоверного переноса результатов экспериментов на целевые виды.

Класс Млекопитающие Mammalia, отряд Грызуны Rodentia:

- семейство мышиные, или мыши (Muridae): домовая мышь Mus musculus (L.), серая крыса Rattus norvegicus (Berk.). В опытах используют здоровых грызунов, примерно одного возраста (2 - 6 месяцев) и массы тела (серые крысы от 150 до 280 г, домовые мыши от 20 до 30 г);

- семейство хомяковые (Cricetidae): полевка обыкновенная Microtus arvalis (Pall.). В опытах используют здоровых животных, примерно одного возраста (2 - 6 месяцев) и массы тела от 20 до 40 г.

В опытах не используют беременных или лактирующих самок, если это не предусмотрено исследованием.

5.2.3. Оборудование, приборы, материалы, используемые при проведении экспериментов.

При проведении экспериментов используют поверенное оборудование и приборы, с действующим свидетельством о поверке. В группу средств измерений входят: весы лабораторные I и II класса точности в соответствии с ГОСТ Р 53228-2008 для определения массы; термогигрометр для измерения температуры и влажности в помещении, линейка в соответствии с ГОСТ 427-75, секундомер.

Допускается применение других аппаратов, реактивов и материалов, с аналогичными или лучшими метрологическими и техническими характеристиками.

5.2.4. Условия проведения экспериментов.

Эксперименты проводят при соблюдении гигротермического режима, соответствующего физиологическому оптимуму подопытных грызунов. Лабораторное помещение, где проводят эксперименты, изолируется от других помещений вивария.

5.2.5. Принципы приготовления рабочих растворов и приманок для проведения экспериментов.

5.2.5.1. Концентрации рабочих растворов подбирают в зависимости от вида грызунов, массы тела и целей экспериментов. При расчетах концентраций и доз соблюдается размерность единиц измерения (например, %, г/л, мг/л, мг/мл). Навеску субстанции взвешивают с точностью до четвертого десятичного знака.

5.2.5.2. Для приготовления отравленной приманки применяют в качестве пищевой основы очищенную пшеничную по ГОСТ 276-2021, овсяную по ГОСТ 3034-2021 или ячменную по ГОСТ 5784-2022 крупы. Приманку с определенной концентрацией ДВ готовят, смешивая зерновую основу с концентратом действующего вещества.

Необходимое количество концентрата (К) в приманке рассчитывают по формуле (5.1):

где: К - количество концентрата (г);

П - количество приманки (г);

ДВ₁ - содержание ДВ в концентрате (%);

ДВ₂ - заданное содержание ДВ в приманке (%).

5.2.6. Расчеты показателей активности субстанций и препаративных форм

5.2.6.1. Родентицидная активность определяется по формуле (5.2):

где: Р - родентицидная активность;

К - количество погибших животных в опыте;

Н - количество животных в начале опыта.

5.2.6.2. Коэффициент репеллентного действия (далее - КРД, %) родентицидных средств рассчитывается по формуле (5.3):

где: Т_Р - съедено корма с содержанием репеллента (г);

Е - съедено корма без репеллента (г);

5.2.6.3. Поедаемость приманки X определяется по формуле (5.4):

где: X - поедаемость приманки (%);

- суммарная масса съеденной зерновой приманки (г);

- суммарная масса съеденного альтернативного корма (г).

5.3.1. Метод одиночного содержания грызунов.

5.3.1.1. Пищевые приманки.

Подготавливают десять модулей для содержания грызунов (рекомендуемая конструкция приведена на рис. 5.1). В каждый модуль помещают по 1 грызуну (в опыте используют 5 самок, 5 самцов). В первом отсеке устанавливают 2 кормушки, а во втором - располагают поилку. Грызунам дают привыкнуть в течение 3 суток к новым условиям содержания и кормления.

Кормушки ежедневно меняют местами, чтобы исключить привыкание грызунов к одному месту. Во время эксперимента в одну из кормушек помещают исследуемую приманку, а в другую - альтернативный корм (очищенная пшеничная, овсяная или ячменная крупа). Крысам дают по 100 г приманки и альтернативного корма, мышам по - 50 г.

Поедаемость определяют по количеству съеденного корма грызуном в течение эксперимента (формула 5.4). С этой целью ежедневно взвешивают остаток корма в кормушке и определяют разницу между первоначальным весом корма и весом остатка. Корм взвешивают с точностью до первого десятичного знака с помощью лабораторных весов (II) класса точности.

Полного съедания кормов не допускают; при съедании 2/3 корма в кормушку добавляют новый, до первоначальной массы корма. В качестве дополнительных параметров определяют количество поглощенного грызуном ДВ в миллиграммах и количество ДВ в пересчете на единицу массы тела (мг/кг). Массу грызуна и ее изменение определяют в начале опыта и по его окончании. Грызунов взвешивают с точностью до первого десятичного знака с помощью лабораторных весов (II) класса точности.

Определение количества ДВ, поглощенного грызуном в мг, проводят по формуле (5.5):

где: ДВ_мг - количество ДВ, поглощенного грызуном в мг;

- количество приманки, съеденной грызуном в опыте (мг);

C - концентрация ДВ в приманке (%).

Определение количества ДВ, поглощенного грызуном в перерасчете на килограмм массы, проводят по формуле (5.6):

где: ДВ_мг/кг - количество ДВ, поглощенного грызуном в мг/кг;

М_ср - среднее значение массы грызуна.

5.3.1.2. Родентицидные покрытия, клей и клеевые ловушки.

Подготавливают десять модулей (рекомендуемая конструкция приведена на рис. 5.1). В каждый модуль помещают по 1 грызуну (в опыте используют 5 самок, 5 самцов). Устанавливают кормушку с кормом и поилку. Грызунам дают привыкнуть в течение 3 суток к новым условиям содержания и кормления.

5.3.2. Метод группового содержания грызунов.

Эксперименты на семье или искусственно созданной группировке грызунов позволяют имитировать их поведенческие реакции по отношению к родентицидным средствам, характерные для естественных условий, и более точно оценить эффективность испытываемых средств.

5.3.2.1. Пищевые приманки.

Для серых крыс используют модуль, состоящий из 2 отсеков, соединенных между собой переходом (рекомендуемая конструкция приведена на рис. 5.1). Для исследования в модуль помещают 2 самок и 3 самцов. В первом отсеке устанавливают 2 кормушки, а во втором - располагают поилку. Грызунам дают привыкнуть в течение 3 суток к новым условиям содержания и кормления. Кормушки ежедневно меняют местами для того, чтобы исключить привыкание грызунов к одному месту. Во время эксперимента в каждую кормушку помещается по 100 г корма, при этом в одну из кормушек кладется исследуемая приманка, в другую - альтернативный корм.

Для домовых мышей используют модуль, состоящий из 2 отсеков, соединенных между собой переходом (рекомендуемая конструкция приведена на рис. 5.1). В модуль помещают 5 самок и 5 самцов. В первом отсеке устанавливают 2 кормушки, а во втором - располагают поилку. Грызунам дают привыкнуть в течение 3 суток к новым условиям содержания и кормления. Кормушки ежедневно меняют местами для того, чтобы исключить привыкание грызунов к одному месту. Во время эксперимента в каждую кормушку помещается по 50 г корма, при этом в одну из кормушек помещают кладется исследуемая приманка, в другую - альтернативный корм.

Поедаемость определяют по количеству корма, съеденного грызунами в течение эксперимента (формула 5.4). С этой целью ежедневно взвешивают остаток корма в кормушке и определяют разницу между первоначальным весом корма и весом остатка. Корм взвешивают с точностью до первого десятичного знака с помощью лабораторных весов (II) класса точности.

Полного съедания кормов не допускают, при съедании 2/3 корма в кормушку добавляют новый, до первоначальной массы корма. Массу грызуна и его изменение определяют в начале опыта и по его окончании, взвешивая с точностью до первого десятичного знака с помощью лабораторных весов (II) класса точности.

5.3.2.2. Родентицидные покрытия, клей и клеевые ловушки

Для серых крыс используют модуль, состоящий из 2 отсеков, соединенные между собой переходом (рекомендуемая конструкция приведена на рис. 5.1). Для исследования в модуль помещают 2 самок и 3 самцов. В каждый модуль устанавливают кормушку с кормом и поилку. Грызунам дают привыкнуть в течение 3 суток к новым условиям содержания и кормления.

Для домовых мышей используют модуль, состоящий из 2 отсеков, соединенных между собой переходом (рекомендуемая конструкция приведена на рис. 5.1). В модуль помещают 5 самок и 5 самцов. В каждый модуль устанавливают кормушку с кормом и поилку. Грызунам дают привыкнуть в течение 3 суток к новым условиям содержания и кормления.

5.4.1. Метод оценки эффективности родентицидных пищевых приманок при альтернативном кормлении.

В опытах могут использоваться приманки в готовой препаративной форме или зерновые приманки, приготовленные из концентрата ДВ по формуле 5.1.

Исследования проводят в соответствии с подпунктами 5.3.1.1, 5.3.2.1.

В рамках эксперимента по изучению эффективности родентицидных средств наблюдения проводят до момента гибели грызуна: не более 3 суток для родентицидов острого действия, не более 10 суток - для антикоагулянтов второго поколения и родентицидов смешанного действия (витаминов D₂ и D₃) и не более 14 суток - для антикоагулянтов первого поколения.

Определяемые показатели эффективности:

- поедаемость приманки (% от суточного рациона);

- гибель (%);

- время гибели (сутки).

Поедаемость приманки определяют по формуле 5.4.

Показатели эффективности родентицидных приманок приведены в табл. 5.1.

5.4.2. Метод оценки эффективности родентицидных концентратов ДВ (субстанций) при альтернативном кормлении.

Оценку эффективности концентратов ДВ (субстанций) проводят на модельной зерновой приманке, приготовленной из концентрата ДВ (субстанции) по формуле 5.1, по методам и критериям, изложенным в подпункте 5.4.1, и определяют поедаемость приманки по формуле 5.4.

5.5.1. Метод оценки эффективности липких родентицидных покрытий.

Липкие родентицидные покрытия (далее - покрытие) оцениваются методом одиночного или группового содержания животных (подпункты 5.3.1.2, 5.3.2.2). После адаптации грызуна к условиям содержания на 1 дорожку или туннель длиной 0,25 м по всей длине наносят покрытие слоем в 1 - 2 мм. Другая дорожка или туннель остаются чистыми. Регистрируют сроки и процент гибели грызунов в зависимости от контакта с покрытием.

Отмечают возможные поведенческие реакции грызуна на покрытие (привлекательность или наоборот наличие боязни (неофобия) и отталкивающее действие (репеллентность), количество проходов грызуна к корму по каждой дорожке за сутки. Наблюдения проводят визуально в период максимальной активности грызуна или при помощи установленных автоматических датчиков.

Если в течение первых 2 дней грызуны используют только дорожки или туннель без покрытия, то это реакция неофобии на покрытие. При сохранении реакции неофобии до конца экспозиции покрытия - репеллентность.

Покрытие устанавливается таким образом, чтобы оно оставалось на кожном покрове грызуна при прохождении по нему грызуна. При очистке поверхности тела и умывании грызуна средство попадает в пищеварительный тракт, вызывая гибель. Время гибели зависит от количества проходов грызуна по покрытию.

Грызун контактирует с покрытием не более 10 суток. Если в течение 10 суток грызун не погиб, его отсаживают в клетку для определения времени гибели. Покрытие считается эффективным, если не менее 80% грызунов погибает в течение 10 суток.

Возможна оценка эффективности покрытий при отсутствии альтернативного пути перемещения в условиях принудительного пропускания грызуна по туннелю, обработанному липким родентицидным покрытием, что позволяет определить количество проходов, необходимых для его гибели.

5.5.1.1. Показатель эффективности липких родентицидных покрытий: гибель грызунов (%) на 10 сутки составляет не менее 80%.

5.5.2. Метод оценки эффективности родентицидной пены.

Родентицидную пену оценивают методом одиночного или группового содержания животных (подпункты 5.3.1.2, 5.3.2.2). После адаптации грызунов к условиям содержания родентицидную пену наносят на подложку (дорожку) или проводят закупорку туннеля порцией родентицидной пены, которая рассчитывается с учетом вида грызуна и полноты заполнения канала родентицидной пеной. Родентицидная пена наносится таким образом, чтобы она прилипала к кожному и волосяному покрову грызуна при его прохождении по обработанным поверхностям или путям перемещения. При очистке поверхности тела и умывании грызуна родентицидная пена попадает в его пищеварительный тракт.

Наблюдения за экспериментом проводят не более 10 суток.

5.5.2.1. Показатель эффективности пены: гибель грызунов (%) на 10 сутки составляет не менее 80%.

5.5.3. Метод оценки эффективности родентицидных порошков (дустов).

Родентицидные порошки (дусты) оценивают методом одиночного или группового содержания животных (подпункты 5.3.1.2, 5.3.2.2). После адаптации грызунов к условиям содержания, на подложку (дорожку) или в туннель длиной 0,25 м по всей длине наносят тонким ровным слоем родентицидный порошок (дуст). При перемещении по опыленным поверхностям родентицидный порошок (дуст) попадает на покровы тела грызуна и при последующей чистке - в пищеварительный тракт.

5.5.3.1. Показатель эффективности родентицидных порошков (дустов): гибель грызунов (%) на 10 сутки составляет не менее 80%.

5.6.1. Оценка эффективности репеллента по поедаемости корма при альтернативном кормлении.

Репеллент изучают в форме стандартной зерновой приманки, приготовленной по формуле 5.1. Опыты проводят методом одиночного или группового содержания грызунов (подпункты 5.3.1.1, 5.3.2.1). Учет поедаемости ведут в течение 4 суток. Поедаемость приманки с репеллентом и альтернативного корма определяют по формуле 5.4. Репеллентную активность определяют по формуле 5.3.

Определяемые показатели эффективности:

- поедаемость приманки с репеллентом (% от суточного рациона);

- КРД.

Поедаемость приманки с репеллентом оценивают по следующим критериям (%):

- КРД = 0 - 79 - низкая репеллентная активность;

- КРД = 80 - 89 - средняя репеллентная активность;

- КРД = 90 - 100 - высокая репеллентная активность;

Длительность репеллентной активности химического вещества определяют по КРД корма с добавкой репеллента.

5.6.2. Оценка эффективности репеллента по выбору пути перемещения к пище.

Эксперимент проводят в модуле, состоящем из 2 отсеков, соединенных между собой 2 переходами. В первом отсеке ставят воду и укрытие (гнездовой отсек), в втором - кормушку с кормом. В гнездовой отсек помещают грызуна. Опыты проводят методом одиночного содержания.

Грызун из гнездовой половины клетки стремится через одно из двух отверстий проникнуть в половину, где находится корм. Через час одно из отверстий закрывают экраном из фильтровальной бумаги, обработанной раствором репеллента, другое - закрывают необработанным экраном из фильтровальной бумаги. В исследованиях используют фильтровальную бумагу ФОБ-I, ФОБ-II или ФОБ-III по ГОСТ 12026-76. После перехода грызуна через экран поврежденный экран заменяют новым и меняют экраны местами. Наблюдения за поведением грызуна проводят ежедневно по 2 часа в течение 4 суток в период активности грызуна. Учитывают количество поврежденных экранов каждого отверстия при переходе грызуна в кормовую половину.

Экраны готовят ежедневно в количестве не менее 10 штук в течение всего периода эксперимента. Эффективность репеллента оценивают по "коэффициенту повреждения" (далее - КП). Коэффициент определяют по отношению (5.7) числа поврежденных грызуном преград, обработанных репеллентом (П_р), к числу поврежденных грызуном преград, не обработанных репеллентом (П_с):

где: КП - коэффициент повреждения;

П_р - число поврежденных грызуном преград, обработанных репеллентом;

П_с - число поврежденных грызуном преград, не обработанных репеллентом.

Показатель эффективности:

КП = 0 - высокая репеллентная активность;

КП = 0 - 0,9 - средняя репеллентная активность;

КП > 1 - не обладает репеллентной активностью.

5.6.3. Оценка эффективности аттрактанта по поедаемости корма при альтернативном кормлении.

Аттрактанты изучают в виде модельной зерновой приманки, приготовленной по формуле 5.1. Опыты проводят методом одиночного или группового содержания грызунов (подпункты 5.3.1.1, 5.3.2.1). Учет поедаемости ведут в течение 4 суток. Поедаемость приманки с аттрактантом и альтернативного корма определяют по формуле 5.4.

Определяемые показатели эффективности:

- поедаемость приманки с репеллентом (% от суточного рациона);

- аттрактивное действие.

Поедаемость приманки с аттрактантом оценивают по следующим критериям (%):

- 0 - 15 - низкая активность;

- 15 - 50 - средняя активность;

- 50 - 100 - высокая активность.

5.7.1. Определение эффективности ультразвукового излучателя (УЗИ) проводят в полигоне площадью 50 м², разделенном на опытную и контрольную половины металлическим барьером-экраном. В каждой половине выставляют равное количество домиков-укрытий и кормушек таким образом, чтобы одна половина полигона являлась зеркальным отражением другой. Обеспечивается постоянный доступ к корму в кормушках.

В опытной половине помещают устройство УЗИ так, чтобы кормушки попадали под действие ультразвукового излучения. Затем в опытную и контрольную половины полигона запускают равные группы грызунов по 3 - 5 особей в каждой группе. В течение суток грызунам дают привыкнуть к новым условиям.

Опыт состоит из двух этапов.

Первый этап - предварительный. Грызунов в течение 3 суток содержат в условиях с минимальным воздействием стресса. Ежедневно отмечают количество съеденного ими корма в каждой половине полигона.

Второй этап - непосредственно опыт. По окончании первого этапа в опытной половине полигона включают устройство УЗИ. Устройство остается включенным 3 суток, в течение которых в опытной и контрольной половинах полигона также определяют ежедневную поедаемость корма грызунами. По окончании опыта высчитывают поедаемость опытной половины полигона и контрольной. Поедаемость определяют по формуле 5.4.

Эффективность действия УЗИ на грызунов оценивают по поедаемости корма. Сравнивают количество съеденного корма в опытной контрольной и группах. Устройство УЗИ оценивают как эффективное, если во время его действия поедаемость корма грызунами опытной группы составила не более 10%, а разница в поедаемости корма с контрольной группой составляет не менее 40%.

Радиус действия УЗИ определяют опытным путем, устанавливая кормушки на различном расстоянии от источника излучения.

5.8.1. Оценка эффективности механических средств уничтожения (давилки, капканы).

К механическим средствам отлова и умерщвления грызунов относятся пружинные дуговые капканы (N 0 и N 1) и давилки "Геро".

Давилки "Геро" - деревянные плашки или металлические пластины, к которым прикреплена на пружине стальная дужка. Срабатывание механизма заряженной давилки "Геро" и придавливание грызуна дужкой к деревянному или металлическому основанию происходит при сдергивании грызуном приманки с крючка или при надавливании на трапик, соединенный со сторожком ловушки. Срабатывание дугового капкана происходит под тяжестью грызуна, при надавливании на диск устройства.

Оценку эффективности механических средств дератизации проводят в вольере на группах грызунов тех видов, для которых они предназначены.

Площадь вольера должна быть не менее 0,6 м².

Используют не менее 5 особей одного вида грызунов и такое же количество ловушек. В начале эксперимента незаряженные устройства помещают в вольер для привыкания грызунов к ним. Затем устройства приводят в рабочее состояние и оценивают их эффективность по количеству срабатываний запорного или убивающего механизма при контакте с ним грызуна и количеству грызунов, попавших в устройство.

Изучение эффективности осуществляют не более 10 суток.

Показателем эффективности механического устройства при контактах с ним грызунов является его эффективное срабатывание не менее чем в 80% случаев.

5.8.2. Метод оценки эффективности живоловок.

Живоловки для крыс и мышей бывают изготовленными целиком из металлической сетки, оцинкованного железа с отверстиями, из металлической сетки, закрепленной на деревянной доске, или из пластмассы.

Одноразовые живоловки имеют дверцу, которая захлопывается при сдергивании грызуном приманки с крючка или надавливании на трапик. Балансирующая одноразовая живоловка состоит из пластмассовой трубки квадратного сечения, изогнутой под определенным углом, и дверцы, захлопывающейся при нарушении баланса. Грызун входит внутрь живоловки по горизонтально расположенной части трубки и при переходе в другую ее половину нарушает баланс живоловки, от чего дверца приподнимается и захлопывается.

Многоразовые живоловки (типа верш) изготовлены из металлической сетки. Грызуны попадают внутрь по сужающемуся проходу или через отверстие с трапиком. Трапик срабатывает под тяжестью грызуна, который попадает в вершу, а трапик под действием пружины принимает первоначальное положение и закрывает выход грызуну. Оценку эффективности живоловок проводят по методике, описанной в п. 5.7.1.

Изучение эффективности осуществляют не более 10 суток.

Показателем эффективности живоловки при контактах с ним грызунов является эффективное срабатывание живоловки не менее чем в 80% случаев.

5.9.1. Испытание проводят в модуле при одиночном или групповом содержании грызунов. Определение эффективности клейких масс осуществляют с помощью клеевых пластин, выполненных из материала, не впитывающего клей.

Клеевая масса должна удерживать грызуна при контакте с клеевой поверхностью пластины. Для домовых мышей и полевок используют пластины размером 12x20 см, для опытов с крысами - пластины размером 20x25 см. Клеевую массу на поверхность пластины наносят сплошным слоем толщиной не более 1 мм. Пластины с клеевой массой помещают перед кормушкой, либо в другом месте, в центр клеевой поверхности приклеивают в качестве приманки небольшой кусочек хлеба с растительным маслом.

Изучение эффективности осуществляют не более 10 суток.

Показателем эффективности клейкой массы является удерживание не менее 80% грызунов весом не более 100 г.

5.10.1. Требования к проведению испытаний дератизационных средств в натурных условиях.

Биологическую активность и целевую эффективность дератизационных средств изучают на объектах, заселенных грызунами. Для проведения экспериментов выбирают объекты с высокой или средней численностью грызунов.

Наличие и количество грызунов первоначально устанавливают на основании опроса работников объекта и визуального его обследования по следам жизнедеятельности грызунов. Уточнение степени заселенности объекта проводят с помощью контрольно-пылевых (следовых) площадок или пищевых приманок без токсиканта, то есть методами, которые не изменяют состав и количество грызунов на объекте. Видовой состав определяют при отлове грызунов давилками или живоловками.

Изучение эффективности дератизационных средств на объекте осуществляют не более 10 суток для родентицидов острого действия, витаминов D₂ и D₃, механических средств (ловушек, живоловок, клеевых устройств) и ультразвуковых излучателей (УЗИ), 25 суток для антикоагулянтов второго поколения и 35 суток для антикоагулянтов первого поколения.

Эффективность действия отравленной приманки на грызунов определяют по следующим основным параметрам:

- поедаемость приманки;

- время появления трупов;

- изменение относительной численности грызунов;

- скорость освобождения объекта от грызунов.

На объекте отравленную приманку помещают в кормушки (точки прикорма) в количестве от 20 до 100 г в зависимости от численности грызунов. На объекте менее 100 м² расставляют не более 5 кормушек. Одновременно оборудуют не более 10 контрольно-пылевых (следовых) площадок.

На объектах более 100 м² кормушки расставляют из расчета не менее 8 г приманки на 1 м². При этом в одну кормушку помещается не менее 50 г отравленной приманки.

Поедаемость определяют по количеству корма, съеденного грызунами на объекте в течение 1 или 2 суток. С этой целью взвешивают остаток корма в кормушках и определяют разницу между первоначальным весом корма и весом остатка. Частота контрольных взвешиваний зависит от численности грызунов на объекте. При высокой численности взвешивание корма следует проводить 1 раз в сутки. В качестве кормушек могут использоваться пластиковые одноразовые тарелки, картонные подложки 10x10 см, приманочные контейнеры.

Одновременно методом контрольно-пылевых (следовых) площадок определяют относительную численность грызунов на объекте. Контроль численности грызунов проводят до и после эксперимента.

Скорость освобождения объекта определяют по увеличению количества не заслеженных контрольно-пылевых (следовых) площадок по дням.

В процессе испытаний дератизационных средств оценивают также безопасность и удобство их применения в естественных местах обитания грызунов и определяют соответствие правилам охраны труда и техники безопасности.

5.10.2. Методы исследований эффективности дератизационных средств.

5.10.2.1. Методика контрольно-пылевых (следовых) площадок.

Данная методика позволяет обнаружить грызунов на объекте, оценить заселенность его грызунами и пути их передвижения. Контрольно-пылевые (следовые) площадки - это подложки размером 10x20 см, покрытые слоем муки, талька или другого пылевидного материала, которые размещают в местах вероятного передвижения грызунов по объекту (например, в углах, вдоль стен, перегородок, вблизи дверей и окон). Количество площадок на объекте зависит от его площади. На объектах или помещениях менее 100 м² оборудуют не более 10 площадок. При этом площадки располагают вдоль плинтусов по бокам дверного проема (2), в углах комнаты (4), под окном (1) и по середине основания боковых стен (2). На объектах площадью более 100 м² контрольно-пылевые (следовые) площадки оборудуют из расчета: 1 площадка на 5 - 10 м².

По следам, оставленным грызунами на контрольно-пылевых (следовых) площадках, рассчитывают процент (К) заслеженных площадок по формуле:

где: К - число заслеженных площадок в %;

Б - всего площадок на объекте (штук);

А - количество заслеженных площадок (штук).

При обнаружении на площадках следов крыс, мышей или полевок, их относительное количество определяют, рассчитывая процент заслеженных площадок по каждому виду. После каждого учета поверхность пылевидного материала выравнивают.

5.10.2.2. Исследование биологической активности и целевой эффективности дератизационных средств в естественных местах обитания.

Эффективное биологически активное средство вызывает гибель грызунов (отравленные приманки, липкие покрытия, механические и клеевые умерщвляющие устройства), либо ограничивать их передвижение (живоловки) или проникновение (репелленты и УЗИ) на объект. Чем быстрее исчезают грызуны в помещениях объекта, тем эффективнее испытываемое средство и тем меньшее количество площадок заслежено грызунами.

Эффективность дератизационного средства оценивают по скорости освобождения объекта от грызунов. Для этого до начала эксперимента учитывают количество заслеженных и не заслеженных площадок и рассчитывают относительную численность грызунов. Затем на объекте размещают испытываемое дератизационное средство. После этого ежедневно проверяют контрольно-пылевые (следовые) площадки, учитывая количество заслеженных и незаслеженных площадок. После каждого учета поверхность пылевидного материала выравнивают.

Поедаемость приманок определяют по количеству корма, съеденного грызунами на объекте в течение 1 или 2 суток. Процент съеденной приманки определяют от общего количества разложенного корма за каждые сутки или в среднем за выбранный период. Для определения количества поедаемого корма в кормушки раскладывают взвешенные порции. В каждую кормушку раскладывают от 50 до 100 г приманки. Кормушки нумеруют. Через 1 или 2 суток корм в кормушках взвешивают. Затем весь оставшийся корм собирают, а в кормушки раскладывают другой из предварительно подготовленной и взвешенной новой порции. Вычитая из исходного веса корма последующий, определяют массу корма, съеденного грызунами за день в каждой кормушке. Корм раскладывают 2 - 3 раза и рассчитывают среднее потребление приманки за определенный период наблюдения.

Количество контрольно-пылевых (следовых) площадок рассчитывают исходя из норм, указанных в подпункте 5.10.2.1.

Эффективность давилок, живоловок, клейких масс или готовых клеевых ловушек, липких ядовитых покрытий, ультразвуковых родентицидных средств, отпугивающих химических соединений оценивают по скорости освобождения объекта от грызунов, используя для контроля метод контрольно-пылевых (следовых) площадок.

Эффективность дератизационного средства рассчитывают по формуле (5.9):

где: Э - эффективность дератизационного средства (%);

К₁ - число заслеженных площадок на объекте до начала эксперимента (%);

К₂ - число заслеженных площадок в конце эксперимента (%).

К₁ и К₂ определяют по формуле 5.8 процента заслеженных площадок К.

5.10.2.3. Показатели эффективности родентицидов и дератизационных средств в естественных местах обитания приведены в табл. 5.2 и 5.3.

3. В главе VI пункт 6.5.12 и подпункты 6.5.12.1, 6.5.12.2 к нему изложить в следующей редакции:

"6.5.12. Определение и оценка безопасности кожных антисептиков в исследованиях in vitro (общетоксическое и раздражающее действие на кожу). Первичную оценку безопасности кожных антисептиков рекомендуется проводить в исследованиях in vitro на суспензии сперматозоидов быка с использованием анализатора изображений. Сперму получают по ГОСТ 26030-2015, а затем стандартизируют по чувствительности к лаурилсульфату натрия, что позволяет сопоставлять результаты испытаний, полученные в разных лабораториях. В основе метода лежит изменение двигательной активности сперматозоидов под воздействием химических соединений, содержащихся в исследуемых образцах, измеряемое величиной индекса токсичности. Процесс тестирования автоматизирован, анализ динамических кривых индекса токсичности фиксируется в режиме реального времени с помощью анализатора изображений.

Величина индекса токсичности, свидетельствующая о безопасности изучаемого раствора, соответствует интервалу значений 70 - 120%.

6.5.12.1. Для проведения испытаний готовят разведение испытуемого образца антисептика в дистиллированной воде в соотношении 1:700 и 1:200. Колбы с испытуемым раствором и контрольной дистиллированной водой помещают в термостат с температурой плюс (37,0 +/- 0,4) °C на 1 час. После окончания экспозиции растворы охлаждают до комнатной температуры. Затем для приготовления опытного раствора добавляют 4 г глюкозы и 1 г цитрат натрия на 100 см³ испытуемого раствора. Для приготовления контрольного раствора используют такое же соотношение реактивов, как для испытуемого раствора, на 100 см³ контрольной дистиллированной воды. После полного растворения сухих реактивов, опытные и контрольные растворы готовы к работе.

У кожных антисептиков в виде влажных салфеток изучению подлежит пропиточный раствор. Для кожных антисептиков, в состав которых входят перекись водорода или соединения хлора, данный метод не применяют.

Далее испытания проводят в соответствии с руководством пользователя анализатора изображений.

6.5.12.2. Оценку результатов испытаний проводят сравнением полученного значения индекса токсичности для исследованного антисептика и допустимого интервала этого индекса. Схема дальнейшего изучения антисептиков, которая зависит от полученных результатов, приведена в табл. 6.14.1.

Антисептик, у которого величина индекса токсичности, полученная при разведении средства 1:700, составляет менее 70% или более 120% (т.е. выходит за пределы нормы) в большинстве случаев будет обладать раздражающим действием на кожу. Необходимо подтверждение раздражающего действия антисептика на коже лабораторных животных при повторных аппликациях.

Если значение индекса токсичности при разведении 1:700 находится в диапазоне от 70 до 120% и при разведении 1:200 значение индекса токсичности менее 70% или более 120%, необходимо изучение раздражающего действия антисептика на коже лабораторных животных при повторных аппликациях.

Величина индекса токсичности в интервале от 70 до 120%, полученная при разведении антисептика 1:700 и 1:200, свидетельствует, что данный антисептик не обладает раздражающим действием на кожу. В дальнейшем выполняют изучение токсичности и опасности для человека антисептика, при этом оценку раздражающего действия на коже лабораторных животных не проводят.".