"Методические указания по определению фосэтилалюминия в плодах и растениях огурца и почве газожидкостной хроматографией"
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6237-91)

Редакционная коллегия:

Калинин В.А. - к.с.н., профессор, зав. кафедры ТСХА; Пушкина Г.П. - к.б.н.

Российский институт лекарственных культур: Борисов Г.С. - зав. КТЛ РРСТАЗР: Федорова Н.Е. - к.х.н., МНИИГ им. Эрисмана.

Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

Фосэтилалюминий - трис (этилфосфит) алюминия является действующим веществом фунгицидов "Альетт", ф. Рон-Пуленк, Франция. Эфаль М, НПО "Каустик". Алюфит, НПО "Каустик".

Структурная формула:

Эмпирическая формула: .

Молекулярная масса: 354,0.

Белое кристаллическое вещество, плавящееся с разложением. Растворимость в воде (20 °C) 120 г/л, в ацетонитриле и метилцеллозольве 0,08 г/л. Медленно разлагается в водном растворе: период полуразложения при 20 °C (1 г/л) > 100 дней. Окислители быстро инактивируют препарат, превращая его в производные фосфорной кислоты.

Выпускается в виде 80%-ного с.п., а также в смесях с другими пестицидами. Применяется как системный фунгицид для защиты хмеля и табака от ложной мучнистой росы (2 - 3 г/га), на виноградниках против милдью (3 кг/га, а также на фруктовых деревьях в комбинации с каптаном или фолпетом.

для крыс 5800 мг/кг. Малотоксичен для пчел и других полезных насекомых. МДУ не установлен.

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении фосэтилалюминия из плодов и растений огурца гомогенизацией с 1%-ной серной кислотой, из почвы экстракцией 1%-ным раствором серной кислоты, центрифугировании фильтрата, метилировании фосэтилалюминия диазометаном и определении метилового эфира этилфосфористой кислоты на газовом хроматографе с термоионным детектором.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Минимально детектируемое количество 0,05 нг, линейный диапазон детектирования 0,05 - 5 нг. Другие метрологические характеристики приведены в таблице:

2.1.3. Избирательность метода

Пестициды, применяемые совместно с фосэтилалюминием, определению не мешают.

Соляная кислота, ч., ГОСТ 3118-67.

Серная кислота, ч., ГОСТ 4204-66.

Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79.

Метиламин, 24%-ный водный раствор, МРТУ 6-09-1385-67.

Мочевина, ч.д.а., ГОСТ 6691-67.

Нитрит натрия, ч.д.а., ГОСТ 4168-66.

Диэтиловый эфир, ч., ТУ 6-09-870-78, абсолютированный.

Гидроксид натрия, ч.д.а., ГОСТ 4203-65.

Хроматон N-AW (0,110 - 0,125) +15% карбовакс 20 М.

Азот, ч., ГОСТ 9293-74.

Стандартные растворы фосэтилалюминия, основной: 100 мкг/мл; рабочие 1,0; 5,0; 10,0 мкг/мл. Срок хранения в холодильнике основного стандарта 1 месяц, рабочих - 1 неделя.

Газовый хроматограф "Цвет-106" или аналогичный с термоионным детектором.

Механический встряхиватель ТУ-64-1-1081-73.

Размельчитель тканей РТ-1, ТУ 64-1-1505-79.

Центрифуга ЦЛС-3, ТУ-5-375-4170-73.

Колба круглодонная ККШ-500, ГОСТ 9737-70.

Воронки химические 70 мм, ГОСТ 9775-77.

Колбы круглодонные ККШ-50, ГОСТ 9737-70.

Пипетки, ГОСТ 20292-77, емк. 5 и 1 мл.

Баня водяная, ТУ 46-22-608-75, или ротационный испаритель ИР-1М.

Стакан химический емк. 3 л.

Холодильник ТИП ХПТ-КШ, ГОСТ 1770-64.

Холодильник обратный, ГОСТ 9499-70.

Термометр ТЛ-2, ГОСТ 275-73.

2.4.1. Получение нитрозометилмочевины

В 1 л колбу приливают 200 г (1,5 м) 24%-ного водного раствора метиламина и добавляют концентрированную соляную кислоту до кислой (pH - 1 - 2) реакции среды (около 150 мл). В колбу добавляют до объема 500 мл дистиллированной воды и 300 г (5 м) мочевины. Полученный раствор осторожно кипятят с обратным холодильником при умеренном нагреве в течение 3-х часов. Усиливают нагрев и кипятят еще 15 минут. Раствор охлаждают до комнатной температуры и растворяют в нем 110 г (1,5 м) нитрита натрия. Охлаждают раствор до 0 °C в смеси лед-хлорид натрия.

В 3-литровом стакане готовят смесь из 600 г льда и 100 г (1 м) концентрированной серной кислоты. К раствору при охлаждении стакана в смеси лед-хлорид натрия медленно приливают холодный раствор метилмочевины и при перемешивании содержимого механической мешалкой. Нитрозометилмочевина всплывает на поверхность в виде кристаллов. Кристаллы отфильтровывают на воронке Бюхнера под вакуумом. Затем размешивают их с 50 мл холодной воды до образования пасты и снова отфильтровывают. Сушат нитрозометилмочевину в вакуумном эксикаторе до постоянного веса. Выход 105 - 115 г (66 - 72%). Хранить нитрозометилмочевину следует в темной склянке в холодильнике, т.к. под действием тепла и света она может взрываться. Вещество ядовито! Избегать попадания на кожу. Испытание на чистоту: 0,5 г нитрозометилмочевины растворить в 5 мл метанола. Вещество должно раствориться без осадка. Если остается осадок, вещество дополнительно промыть холодной водой и высушить, как указано выше.

2.4.2. Получение диазометана

В круглодонную колбу емкостью 500 мл помещают 30 мл 50%-ного водного раствора гидроксида калия и 100 мл абсолютированного серного эфира. Смесь охлаждают льдом до 5 °C, после чего при взбалтывании через химическую воронку небольшими порциями добавляют 10,3 г (0,1 м) нитрозометилмочевины. Колбу соединяют с холодильником и стеклянным алонжем, конец которого погружают в приемную колбу с 40 мл диэтилового эфира. Приемную колбу погружают в емкость со смесью соли и льда. Реакционную колбу нагревают в водяной бане до 40 °C и перегоняют образующийся диазометан совместно с серным эфиром. Отгонку прекращают, как только дистиллят станет бесцветным. Нельзя отгонять весь эфир, так как оставшиеся на дне колбы перекисные соединения взрывоопасны. Раствор диазометана хранят в колбе с притертой пробкой в холодильнике не более пяти дней.

2.4.3. Приготовление стандартов

В пробирки или грушевидные колбы вносят 0,1; 0,2; 0,5 мл стандартного раствора с концентрацией 1 мкг/мл, добавляют по 2 - 3 мл ацетона, осушают на водяной бане током сухого воздуха досуха. После охлаждения пробирок до комнатной температуры приливают к сухому остатку по 3 мл эфирного раствора диазометана и закрывают притертыми пробками, через 15 минут избыток диазометана нейтрализуют, прибавляя в пробирку по каплям муравьиную кислоту. Концентрации стандартных растворов соответствуют 0,1; 0,2; 0,5 мкг/мл. Хроматографируют 3 мкл раствора. Метилирование стандартов проводят в день анализа.

2.4.4. Отбор проб

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР 21 августа 1979 г. N 2051-79.

2.4.5. Подготовка проб к анализу

Лабораторную пробу плодов или растений огурца измельчают ножом, перемешивают и отбирают навески: плодов 100 г, растений 50 г. Почву растирают в ступке; просеивают и отбирают навеску 25 г.

2.5.1. Экстракция

Аналитическую пробу помещают в стакан гомогенизатора или измельчителя тканей, прибавляют 50 мл 1%-ного раствора серной кислоты для плодов и 100 мл этого экстрагента для растений, смесь гомогенизируют в течение 10 минут. Гомогенизат фильтруют через ватный фильтр, промывают фильтр 30 мл 1%-ной , отбирают 10 мл фильтрата в центрифужную пробирку и центрифугируют 15 минут при 5 тыс. об/мин. (R = 10 см). Навеску почвы помещают в коническую колбу, приливают 50 мл 1%-ного раствора серной кислоты и фосэтилалюминий экстрагируют на механическом встряхивателе в течение 1 часа. Содержимое колбы фильтруют через ватный фильтр и 10 мл фильтрата центрифугируют.

В круглодонные колбы емкостью 50 мл отбирают пипеткой из центрифужных пробирок по 0,5 мл экстракта, прибавляют 2 - 3 мл ацетона и отдувают воздухом воду и ацетон при нагревании на водяной бане. К сухому остатку после охлаждения до комнатной температуры прибавляют 3 мл эфирного раствора диазометана и колбу закрывают пробкой. Колбу периодически встряхивают. Через 15 минут в колбу по каплям добавляют муравьиную кислоту для нейтрализации избытка диазометана (до обесцвечивания желтой окраски). В хроматограф вводят 3 мкл раствора.

2.5.2. Условия хроматографирования

Колонка стеклянная 1 м x 3 мм, заполнена хроматоном N-AW 0,100 - 0,125 мм с 15% карбовакса 20 М. Температура термостата колонок 150 °C, испарителя 160 °C. Расход газа-носителя 40 мл/мин (азот), воздуха 300 мл/мин, водорода 20 мл/мин. Время удерживания метилэтилфосфита - 3,8 мин.

Содержание фосэтилалюминия в анализируемой пробе рассчитывают по формуле:

где - высота пика рабочей пробы, мм,

- высота пика стандарта, мм;

- концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

- объем стандартного раствора, вводимого в испаритель, мкг;

- объем экстракта, вводимого в испаритель, мкг;

- конечный объем метилированного экстракта, мл;

- начальный объем полученного экстракта (гомогенизата);

- объем экстракта, взятого для метилирования;

a - степень определения.

Соблюдать требования техники безопасности, принятые для работы с пестицидами, ЛВЖ и взрывоопасными веществами.

Разработчики: А.С. Ковалев и Н.Д. Дорошенко (Крымский филиал НИИХСЗР).