УТВЕРЖДЕНО

                                                                         Председатель Госкомсанэпиднадзора России

                                                                    Главный государственный санитарный врач

                                                             Российской Федерации

Е.Н. Беляев

                                                                    8 июня 1996 г.

                                                                    МУК 4.1.0.416-96

                                                                    Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций витамина B₁ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в воздухе рабочей зоны

              М. м. 426,17

Витамин B₁ (тиамина бромид) - (4-метил-5-b-оксиэтил-N-(2-метил-4-амино-5-метилпиримидил)-тиазолий бромид гидробромид) - кристаллическое вещество белого цвета со слабым специфическим запахом. Хорошо растворим в воде, метиловом и этиловом спиртах. Трудно растворим в ацетоне. Не растворим в эфире, бензоле, хлороформе. Т_пл. - 210 - 215 °С.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Обладает специфическим аллергенным действием.

ПДК в воздухе - 0,1 мг/м³.

Характеристика метода

Метод основан на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.

Отбор проб производится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения витамина B₁ в хроматографируемом объеме пробы (30 мкл) - 0,3 мкг.

Нижний предел измерения витамина B₁ в воздухе - 0,05 мг/м³ (при отборе 600 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций витамина B₁ в воздухе - от 0,05 до 1 мг/м³.

Суммарная погрешность измерения не превышает ± 20 %.

Время выполнения измерения, включая отбор проб, - около 40 мин.

Приборы, аппаратура, посуда

Микроколоночный жидкостной

хроматограф «Милихром-2» или

другие модели с УФ-детектором

Хроматографическая колонка, длиной 120 мм,

внутренним диаметром 2 мм, заполненная

сорбентом «Силасорб SPH C₁₈» с размером

зерен 9 мкм, (ЧСФР)

Электроаспиратор ЭА-1                                                                       ОСТ 95.10052-84

Микроскоп отсчетный типа ПМБ-2                                                    ТУ 3-3.824-78

Фильтродержатель, снабженный

металлической сеткой

Стеклянная ректификационная колонна,

длиной 550 мм и внутренним диаметром

20 мм, флегмовое число 5 (или другая                                                ТУ 25-1173.131-85

такого же типа). Насадка - спиральки Левина

из нержавеющей стали (2 ´ 2 ´ 0,2 мм)

Колбы мерные, вместимостью 100 мл                                                ГОСТ 1770-74

Пипетки, вместимостью 1 и 10 мл                                                      ГОСТ 20292-74

Пробирки с пришлифованными пробками,

вместимостью 10 мл                                                                             ГОСТ 10515-75

Реактивы, растворы, материалы

Витамин B₁ фармакопейный, 99 % чистоты

Калий марганцовокислый (калий перманганат)                                ТУ 20490-75

Ацетонитрил очищенный                                                                     ТУ 6-09-3534-82

Ацетонитрил очищенный получают из ацетонитрила, ч., путем ректификации с предварительной химической обработкой, которая заключается в кипячении растворителя с обратным холодильником в присутствии перманганата калия из расчета 1 г перманганата калия на 1 л растворителя. Кипячение проводится до полного перехода перманганата калия в двуокись марганца. Перед ректификацией осадок двуокиси марганца отделяют путем фильтрации через фильтр Шотта № 4.

Ректификационная колонна длиной 550 мм

и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое

число 5. Насадка - спиральки Левина

из нержавеющей стали (2 ´ 2 ´ 0,2 мм)

Основную фракцию отбирают при температуре

81,6 °С (атмосферное давление) в пределах

колебаний ± 0,1 °С

Элюент: ацетонитрил-вода (4:1)

Основной стандартный раствор с концентрацией витамина В₁ 200 мкг/мл готовят растворением 0,02 г вещества в воде в мерной колбе, вместимостью 100 мл.

Раствор устойчив при хранении в холодильнике в течение недели.

ФильтрыАФА-ВП-10                                                                            ТУ 85-743-80

Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 30 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-10. Для определения 1/2 ОБУВ достаточно отобрать 600 л воздуха.

Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в течение месяца.

Подготовка к измерению

Хроматографическая колонка промышленного изготовления. Градуировочные растворы готовят согласно таблице.

Таблица

Инжектируют в хроматограф по 30 мкл каждого из градуировочных растворов (от 0,3 до 6 мкг витамина B₁).

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

скорость подачи элюента (ацетонитрил-вода, 5:1)                      300 мкл/мин;

длина волны УФ-детектора                                                             242 нм;

скорость движения диаграммной ленты                                        3 мм/мин;

диапазон чувствительности детектора                                           0,2;

диапазон измерения самопишущего потенциометра                   100 мВ;

объем вводимой пробы                                                                    30 мкл;

время удерживания витамина B₁                                                                                        9 мин;

элюирующий объем                                                                          2700 мкл;

эффективность колонки по витамину B₁                                                                 900 тт.

На полученной хроматограмме измеряют площади пиков и строят градуировочный график, выражающий зависимость площади пиков (мм²) от содержания витамина B₁ в хроматографируемом объеме пробы (мкг).

Построение градуировочного графика необходимо проводить не менее, чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочного графика следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

Проведение измерения

Оба фильтра с отобранными пробами помещают в общую пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 3 мл воды и оставляют на 15 мин при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Степень десорбции с фильтра - 96,5 %.

Инжектируют в хроматограф 30 мкл полученного раствора.

Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях и по отношению к тому же элюенту, что и при построении градуировочного графика.

Количественное определение содержания витамина B₁ в хроматографируемом объеме проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Расчет концентрации

Концентрацию витамина B₁ (С) в воздухе (мг/м³) вычисляют по формуле:

а - содержание витамина B₁ в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

б - объем пробы, взятой на хроматографирование, мл;

в - общий объем анализируемого раствора, мл;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. приложение 1).

Методические указания разработаны НИО «Экотокс», г. Москва.

Приложение 1

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 760 мм рт. ст.)

проводят по формуле

V_t - объем воздуха, отобранный для анализа, л;

Р - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);

t - температура воздуха в месте отбора пробы, °С.

Для удобства расчета V₂₀ следует пользоваться таблицей коэффициентов (приложение 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить V_t на соответствующий коэффициент.

Приложение 2

Коэффициенты для приведения объема воздуха к стандартным условиям

Приложение 3

Рис. 1

Ловушка-концентратор.

Общий вид.

Рис. 2

Ловушка-концентратор.

Приложение 4

Вещества, определяемые по ранее утвержденным методическим указаниям