УТВЕРЖДЕНО

                                                                         Председатель Госкомсанэпиднадзора России

                                                                    Главный государственный санитарный врач

                                                             Российской Федерации

Е.Н. Беляев

                                                                    8 июня 1996 г.

                                                                    МУК 4.1.0.442-96

                                                                    Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны

                                                                 М. м. 171,15

Метронидазол - [1-(-оксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазол] - кристаллическое вещество белого цвета. Хорошо растворим в уксусной кислоте. Мало растворим в воде, этиловом и метиловом спиртах, хлороформе. Т_пл - 160 - 161 °С.

                                                                             М. м. 127,10

2-метил-4(5)-нитроимидазол - кристаллическое вещество белого цвета. Мало растворим в воде, метиловом и этиловом спиртах. Умеренно растворим в изопропиловом спирте и дихлорэтане. Т_плавл. - 250 - 253 °С.

В воздухе находятся в виде аэрозолей.

Обладают общетоксическим действием.

ОБУВ в воздухе 1 мг/м³.

Характеристика метода

Определение основано на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы (50 мкл) метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола - 0,05 мкг.

Нижний предел измерения в воздухе метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола - 0,5 мг/м (при отборе 20 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций в воздухе метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола - от 0,5 до 8 мг/м³.

Определению не мешает присутствие аденозинтрифосфата, 2-метилимидазола, мешает присутствие этадена.

Суммарная погрешность измерения не превышает ± 20 %.

Время выполнения измерения, включая отбор пробы, - около 40 мин.

Приборы, аппаратура, посуда

Микроколоночный жидкостной хроматограф

«Милихром» или другие модели

с УФ-детектором

Хроматографическая колонка длиной 120 мм,

внутренним диаметром 2 мм, заполненная

сорбентом «Силасорб С₁₈» с размером

зерен 9,0 мкм (ЧСФР)

Аспирационное устройство

Фильтродержатель

Микроскоп отсчетный типа МПБ-2                                                    ТУ 3.3-824-78

Стеклянная ректификационная колонна

длиной 550 мм, внутренним диаметром

20 мм, флегмовое число 5 (или другая

такого же типа)

Колбы мерные, вместимостью 25, 100 мл и 1 л                                 ГОСТ 1770-74

Пипетки, вместимостью 10 мл ГОСТ 20292-74

Пробирки с пришлифованными пробками,

вместимостью 10 мл                                                                             ГОСТ 10515-75

Реактивы, растворы и материалы

Метронидазол, % чистоты согласно паспорту

2-метил-4(5)-нитроимидазол, % чистоты

согласно паспорту

Метанол (спирт метиловый) очищенный                                           ТУ 2222-78Е

Метанол очищенный получают из метанола путем ректификации. Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5. Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2 ´ 2 ´ 0,2 мм). Основную фракцию отбирают при температуре 64,5 °С (атмосферное давление) в пределах колебаний ± 0,1 °С.

Натрий фосфорнокислый двузамещенный

12-водный, Na₂HPО₄ 12Н₂О

(динатрийфосфат)                                                                                 ТУ 4172-76

Калий фосфорнокислый однозамещенный

КН₂НРО₄ (калий фосфат)                                                                      ТУ 4198-75

0,067 М раствор динатрийфосфата готовят растворением 23,986 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного в воде в мерной колбе, вместимостью 1 л.

0,067 М раствор калийфосфата готовят растворением 9,078 г калия фосфорнокислого однозамещенного в воде в мерной колбе, вместимостью 1 л.

0,067 М фосфатный буфер (рН 6,4) готовят, смешивая 262 мл 0,067 М раствора динатрийфосфата и 738 мл 0,067 М раствора калийфосфата.

0,01 М фосфатный буфер (рН 6,4) готовят соответствующим разбавлением 0,067М фосфатного буфера (рН 6,4) дистиллированной водой.

Фосфатный буфер устойчив при хранении в холодильнике в течение месяца.

Элюент: 0,01 М фосфатный буфер (рН 6,4) -

метанол (6:1)

Стандартный раствор № 1 с концентрацией метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола по 100 мкг/мл каждого готовят растворением смеси 0,01 г метронидазола и 0,01 и 2-метил-4(5)-нитроимидазола в элюенте в мерной колбе, вместимостью 100 мл

Стандартный раствор № 2 с концентрацией метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола по 20 мкг/мл каждый готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора № 1 элюентом.

Растворы устойчивы в течение суток

Фильтры АФА-ВП-10                                                                           ТУ 85-743-80

Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 5 л/мин аспирируют через фильтр типа АФА-ВП-10. Для определения 1/2 ОБУВ достаточно отобрать 20 л воздуха.

Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в течение месяца.

Подготовка к измерению

Хроматографическая колонка промышленного изготовления.

Инжектируют в хроматограф от 0,05 до 0,8 мкг метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола из стандартного раствора № 2.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

скорость подачи элюента (0,01 М фосфатный

буфер (рН 6,4) - метанол, 6:1)                                                         100 мкл/мин;

слина волны УФ-детектора                                                             310 нм;

скорость движения диаграммной ленты                                        1,8 мм/мин;

диапазон чувствительности детектора                                           0,4 - 0,8;

диапазон измерения самопишущего потенциометра                   100 мВ;

максимальный объем вводимой пробы                                          50 мкл;

время удерживания метронидазола

2-метил-4(5)-нитроимидазола                                                        11 мин 48 с;

                                                                                                            7 мин 15 с;

элюирующий объем для метронидазола

2-метил-4(5)-нитроимидазола                                                        1100 мкл;

                                                                                                            730 мкл;

эффективность колонки по метронидазолу

2-метил-4(5)-нитроимидазолу                                                        1240 тт;

                                                                                                            555 тт.

На полученной хроматограмме измеряют площади пиков и строят градуировочные графики, выражающие зависимость площади пиков (мм²) от содержания метронидазола или 2-метил-4(5)-нитроимидазола в хроматографируемом объеме пробы (мкг) соответственно.

Построение градуировочных графиков необходимо проводить не менее чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочных графиков следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

Проведение измерения

Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной крышкой, добавляют 10 мл элюента и оставляют на 15 мин при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Степень десорбции с фильтра составляет 97,5 %.

Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях по отношению к тем же элюентам, что и при построении градуировочных графиков.

Количественное определение содержания метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола в хроматографируемом объеме проводят по соответствующим предварительно построенным градуировочным графикам.

Расчет концентрации

Концентрацию метронидазола и 2-метил-4(5)-нитроимидазола (С) в воздухе (мг/м³) вычисляют по формуле:

а - содержание метронидазола или 2-метил-4(5)-нитроимидазола в хроматографируемом объеме пробы, найденное по соответствующему градуировочному графику, мкг;

б - объем пробы, взятой на хроматографирование, мл;

в - общий объем анализируемого раствора, мл;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. приложение 1).

Методическиеуказания разработаны НИО «Экотокс», г. Москва.

Приложение 1

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 760 мм рт. ст.)

проводят по формуле

V_t - объем воздуха, отобранный для анализа, л;

Р - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);

t - температура воздуха в месте отбора пробы, °С.

Для удобства расчета V₂₀ следует пользоваться таблицей коэффициентов (приложение 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить V_t на соответствующий коэффициент.

Приложение 2

Коэффициенты для приведения объема воздуха к стандартным условиям

Приложение 3

Рис. 1

Ловушка-концентратор.

Общий вид.

Рис. 2

Ловушка-концентратор.

Приложение 4

Вещества, определяемые по ранее утвержденным методическим указаниям