Полное меню
Штамм Aspergillus awamori 120/177 получен во ВНИИгенетика как мутант из Asp.awamori С529Д 466 и депонирован в ЦМПМ института. Штамм является продуцентом глюкоамилазы. Штамм-продуцент растет на жидких и агаркзованных средах. Оптимальная температура роста 27-30°С, рН среды - 5,0-6,0, культивирование 7 суток. Для размножения используется агаризованная среда Чапека, сусло-агар 5-6°Б, картофельно-сахарозный агар. Предельно допустимая концентрация (ПДК) в атмосферном воздухе населенных мест - 200 кл/м3, пометка А. 3. Пределы измеренийМетодика обеспечивает выполнения измерений количества клеток плесневого гриба в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 100 до 5 000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95. 4. Метод измеренийМетод основан на аспирации из воздуха клеток плесневого гриба на поверхность среды сусло-агар и подсчета выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам и яркому оранжево-желтому окрашиванию субстрата на 3 сутки. 5.
Средства измерений, вспомогательные устройства,
|
5.1. Средства измерений, вспомогательные
|
||||||||||||||||||||||||||||||
5.2. Реактивы, растворы
|
При выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцента в атмосферном воздухе соблюдают следующие требования:
6 1. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
6.2. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
6.3. «Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).
6.4. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.
Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5 °С), атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.
9.1. Условия отбора проб воздуха
Для определения концентрации клеток плесневого гриба воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность среды сусло-агар. Время аспирации воздуха (5 - 20 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента.
Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска, прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.
9.2. Выполнение анализа
Метод предполагает учет количества типичных колоний, выросших на 3 сутки после посева проб воздуха, по культурально-морфологическим признакам и яркой оранжево-желтой пигментации среды. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.
Агаризованную среду сусло-агар расплавляют, остужают до 50-60 °С, добавляют молочную кислоту из расчета 2 мл на 0,5 л среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности.
Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.
После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат при температуре 38-42 °С (повышенная температура, способствует более быстрому росту колоний и плодоношений рода Asper-gillus). Через 2-3 суток производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.
Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 м3 воздуха производят по формуле:
кл/м3 ,где
Х- концентрация клеток продуцента в воздухе,
N - количество колоний продуцента, выросших на чашке,
1 000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха,
V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).
Результаты измерений оформляют протоколом по форме.
Протокол №
количественного микробиологического анализа штамма-продуцента
Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177
в атмосферном воздухе населенных мест
1. Дата проведения анализа______________
2. Место отбора пробы__________________
3.Название лаборатории_________________
4.Юридический адрес организации_______
Результаты микробиологического анализа
Шифр или № пробы |
Определяемый микроорганизм |
Концентрация, кл/м3 |
|
|
|
Ответственный исполнитель
Научный руководитель
1. Руководство по контролю загрязнения атмосферы: РД 52.04.186 -96. М., 1991.693с.
2. ГОСТ 8.563-96. ГСИ «Методики выполнения измерений».
3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности. М., 1980. 27 с.
4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности. М., 1977. 7с.
5. ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ».
6. Влодавец В. В. К определению плесневых грибов рода Asper-gillus в воздухе лечебных учреждений// Гиг. и сан., 1988. № 8.93-95с.
7. Бабьева И. П., Зенова Г. М. Биология почв. М.: МГУ. 122с.
1. Общие положения и область применения 1 5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы 2 7. Требования к квалификации операторов 2 10. Вычисление результатов измерения 3 |
Расположен в: |
---|
Источник информации: https://internet-law.ru/stroyka/text/44773
На эту страницу сайта можно сделать ссылку:
На правах рекламы:
© Антон Серго, 1998-2024.
|
Разработка сайта |
|