"ГОСТ Р 54051-2010. Национальный стандарт Российской Федерации. Плодовые и ягодные культуры. Стерильные культуры и адаптированные микрорастения. Технические условия"
(утвержден и введен в действие Приказом Росстандарта от 30.11.2010 N 669-ст)

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения".

1. Разработан Государственным научным учреждением Всероссийским селекционно-технологическим институтом садоводства и питомниководства Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВСТИСП Россельхозакадемии) совместно с Федеральным государственным учреждением "Российский сельскохозяйственный центр" (ФГУ "Россельхозцентр").

2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 359 "Семена и посадочный материал".

3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. N 669-ст.

4. Введен впервые.

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.

Настоящий стандарт распространяется на:

- стерильные культуры плодовых и ягодных растений, полученные на искусственных питательных средах, содержащиеся в культуральных сосудах и предназначенные для дальнейшего размножения, тестирования и получения укорененных микрорастений;

- адаптированные микрорастения плодовых и ягодных культур, полученные после переноса микрочеренков, укорененных в стерильных условиях при клональном микроразмножении, в нестерильные условия и используемые для выращивания посадочного материала в защищенном грунте.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 52681-2006 Виноградарство. Термины и определения

ГОСТ Р 53044-2008 Материал плодовых и ягодных культур посадочный. Термины и определения

ГОСТ 12.0.004-90 Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.3.041-86 Система стандартов безопасности труда. Применение пестицидов для защиты растений. Требования безопасности

ГОСТ 427-75 Линейки измерительные металлические. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 14192-96 Маркировка грузов

ГОСТ 26678-85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия

Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 53044 и ГОСТ Р 52681, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1. стерильная культура плодового [ягодного] растения: Побеги, микрочеренки или микрорастения, полученные из инициальных эксплантов плодовых [ягодных] растений с использованием метода культуры тканей, не содержащие грибов, бактерий, актиномицетов и других микроорганизмов.

3.2. искусственная питательная среда: Специальным образом подобранная смесь растворенных минеральных солей, сахаров, витаминов, регуляторов роста, а также вспомогательных компонентов, на которой культивируют изолированные ткани и органы плодовых [ягодных] растений.

Примечание. К вспомогательным компонентам относят фенольные соединения, желирующие агенты, элиситоры, антиоксиданты и другие вещества, повышающие выживаемость эксплантов и/или активность их развития.

3.3. культуральный сосуд: Прозрачная емкость, предназначенная для выращивания стерильных культур плодовых [ягодных] растений в изолированных от внешней среды условиях.

Примечание. Культуральными сосудами могут быть колбы, пробирки, банки и другие емкости.

3.4. адаптированное микрорастение плодовых [ягодных] культур: Микрорастение плодовых [ягодных] культур, высаженное в нестерильные условия и успешно прошедшее адаптацию.

3.5. микрочеренок плодовых [ягодных] растений: Отделенный от конгломерата побег или его отрезок, полученный в процессе культивирования эксплантов in vitro.

Примечание. "In vitro" (vitrum - стекло) - в данном контексте термин относится к выращиванию живой культуры в культуральном сосуде.

3.6. сапрофитная микрофлора: Микроорганизмы, развивающиеся в искусственной питательной среде, на ее поверхности и на растительных тканях.

Примечание. Сапрофитной микрофлорой являются грибы, бактерии, актиномицеты и другие микроорганизмы.

3.7. клональное микроразмножение растений: Способ размножения растений неполовым путем in vitro с сохранением генотипа и фенотипа исходного растения, включающий следующие этапы: введение в стерильную культуру, пролиферацию, укоренение и адаптацию к нестерильным условиям.

3.8. введение в стерильную культуру: Процесс, обеспечивающий получение стерильной культуры путем химической стерилизации эксплантов и их высадки на питательную среду в культуральные сосуды.

3.9. пролиферация: Массовое образование эксплантом дополнительных почек и побегов на искусственной питательной среде.

3.10. укоренение in vitro: Процесс образования корней у микрочеренков при культивировании на искусственных питательных средах в изолированных условиях.

3.11. регенерант: Микрорастение, развившееся in vitro в процессе культивирования эксплантов различного происхождения.

3.12. тестирование: Проверка растений на наличие в них патогенов.

3.13. иммуноферментный анализ [ИФА]: Способ выявления патогенов, основанный на использовании специфических белковых антител.

3.14. полимеразная цепная реакция [ПЦР]: Метод молекулярной биологии, позволяющий значительно увеличить малые концентрации определенных фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологической пробе.

3.15. конгломерат: Совокупность почек и побегов, развившихся из единичного экспланта на искусственных питательных средах в процессе размножения in vitro.

3.16. эксплант: Орган или фрагмент органа растения, предназначенный для культивирования in vitro.

3.17. инициальный эксплант: Эксплант, предназначенный для введения в стерильную культуру.

Примечание. Инициальными эксплантами могут быть почки, апексы побегов, пыльники, зародыши, листовые, стеблевые и корневые фрагменты и другие ткани и органы.

3.18. каллус: Новообразование из паренхимных недифференцированных клеток на раневых поверхностях органов растения.

3.19. пассаж: Пересадка эксплантов на свежую искусственную питательную среду с последующим культивированием в течение 1 - 2 мес.

3.20. морфозы: Ненаследственные изменения, возникающие под воздействием естественных или искусственных внешних факторов.

4.1. Общие характеристики и технические требования

4.1.1. Стерильные культуры (Приложение А), размещенные в культуральных сосудах по ГОСТ 1770 (пробирки, колбы и др.), должны соответствовать требованиям, изложенным в таблице 1.

Сортовая чистота стерильных культур составляет 100%.

4.1.2. Микрочеренки плодовых и ягодных культур, укорененные in vitro, по показателям качества должны соответствовать требованиям, установленным в таблице 2.

Сортовая чистота микрочеренков составляет 100%.

4.1.3. Адаптированные микрорастения плодовых и ягодных культур по фитосанитарному состоянию подразделяют на три группы:

- полученные путем микроразмножения исходного материала, свободного от основных вредоносных вирусов по результатам полного цикла тестирования;

- полученные путем микроразмножения исходного материала, свободного от основных вредоносных вирусов по результатам иммуноферментного анализа и/или ПЦР;

- полученные путем микроразмножения исходного материала, взятого с ценных гибридных форм, выделенных по результатам селекционной оценки, и остродефицитных отечественных и интродуцированных сортов и культур, визуально свободных от симптомов вирусных болезней [1], [2].

4.1.4. Длительность и условия этапов адаптации микрорастений плодовых и ягодных культур изложены в таблице 3.

4.1.5. Адаптированные микрорастения плодовых и ягодных культур по показателям качества должны соответствовать требованиям, установленным в таблице 4.

Сортовая чистота адаптированных микрорастений плодовых и ягодных культур составляет 100%.

4.2. Упаковка

4.2.1. Стерильные культуры в культуральных сосудах упаковывают в картонную, полимерную или иную тару, заполненную материалом, обеспечивающим сохранность культуральных сосудов. Культуральные сосуды перед упаковкой герметизируют термоусадочной пленкой или пленкой типа "Parafilm".

4.2.2. Культуральные сосуды с укорененными in vitro микрочеренками (микрорастениями) должны быть герметично закрыты во избежание заражения микроорганизмами.

Культуральные сосуды помещают вертикально (пробками вверх) в картонную, полимерную или иную тару (контейнеры) и переслаивают упаковочным материалом (бумагой, тканью, пенопластом, поролоном и др.). Упаковочный материал не должен выделять газообразные вещества, которые могут привести к гибели микрорастений.

4.2.3. Адаптированные микрорастения плодовых и ягодных культур, высаженные в контейнеры с субстратом, упаковывают в пластмассовые или деревянные ящики высотой не менее 15 см в один ярус.

Не допускается упаковка адаптированных микрорастений с открытой корневой системой и размещение разных культур и помологических сортов в один ящик.

4.3. Маркировка

4.3.1. На каждую единицу упаковки наносят маркировку с указанием манипуляционного знака "Верх, не кантовать" по ГОСТ 14192 трафаретом или прикрепляют ярлык с указанием:

- наименования и адреса отправителя;

- наименования и адреса получателя;

- места назначения;

- наименования культуры и помологического сорта;

- числа растений по культурам и сортам;

- категории качества по фитосанитарному состоянию (см. 4.1.3);

- даты упаковки;

- номера упаковки;

- обозначения настоящего стандарта.

4.3.2. Каждый культуральный сосуд со стерильными культурами, а также с укорененными in vitro микрочеренками (микрорастениями) снабжают этикеткой с указанием культуры, помологического сорта, даты последней пересадки и номера пассажа (при необходимости - клона).

4.3.3. К каждому ящику с адаптированными микрорастениями прикрепляют этикетку с указанием культуры, помологического сорта, категории качества по фитосанитарному состоянию.

4.4. Правила приемки

4.4.1. Стерильные культуры плодовых и ягодных растений и микрочеренки, укорененные in vitro, оценивают на соответствие требованиям настоящего стандарта индивидуально по каждому культуральному сосуду в присутствии производителя и потребителя.

4.4.2. Адаптированные микрорастения плодовых и ягодных культур принимают партиями.

Партией считают любое количество растений одной культуры, одного помологического сорта, одной категории, оформленное документами (Приложения Б, В).

4.4.3. Для проверки соответствия качества адаптированных микрорастений требованиям настоящего стандарта (см. таблицу 4) из разных мест партии отбирают выборку в соответствии с таблицей 5.

При получении спорных результатов проводят повторную проверку на удвоенной выборке. Результаты повторной проверки являются окончательными.

4.4.4. Адаптированные микрорастения плодовых и ягодных культур, отобранные для проверки, пересчитывают и анализируют по всем показателям. После определения качества их присоединяют к партии.

5.1. Оценку внешнего вида питательных сред, стерильных культур, адаптированных микрорастений плодовых и ягодных культур проводят визуально в помещении с хорошей освещенностью.

Наличие механических повреждений, состояние листового аппарата, поражение вредителями и болезнями определяют визуально.

При необходимости наличие основных патогенов определяют методами ИФА и/или ПЦР [3].

5.2. Размер раневого каллуса у основания эксплантов стерильных культур, длину побегов и корней микрочеренков, укорененных in vitro; длину прироста и высоту адаптированных микрорастений измеряют линейкой по ГОСТ 427 с точностью +/- 1 мм.

5.3. Наличие клещей в культуральных сосудах определяют с помощью стереоскопического микроскопа в отраженном свете.

5.4 Дату введения в стерильную культуру и число пассажей культивирования подтверждают документально актом введения эксплантов в стерильную культуру и свидетельством на материал плодовых и ягодных культур, полученный in vitro (Приложения 2, 3).

5.5. Степень адаптации микрорастений определяют визуально по состоянию листового аппарата через 2 ч после полива и размещения их в условия окружающей среды со следующими параметрами: температура воздуха - от 22 °C до 25 °C, влажность воздуха - 50% - 60%.

6.1. Транспортирование

6.1.1. Стерильные культуры и адаптированные микрорастения плодовых и ягодных культур перевозят любым видом транспорта в соответствии с правилами перевозки грузов, действующими на данном виде транспорта.

6.1.2. При перевозке стерильных культур плодовых и ягодных растений необходимо обеспечить поддержание температуры от 2 °C до 27 °C.

При транспортировании микрочеренков, укорененных in vitro, необходимо обеспечить температурный режим от 2 °C до 30 °C.

6.1.3. Длительность транспортирования стерильных культур не должна превышать 12 сут.

6.1.4. Перевозка адаптированных микрорастений в открытом транспорте без укрытия, а также адаптированных микрорастений с открытой корневой системой не допускается.

6.1.5. При перевозке адаптированных микрорастений с закрытой корневой системой размещение ящиков более чем в один ярус допускается только в специально оборудованном транспорте.

6.1.6. При перевозке адаптированных микрорастений более 1 сут следует использовать транспортные средства, оборудованные холодильными установками, обеспечивающими температуру от 8 °C до 10 °C и влажность воздуха 80% - 100%, или предусматривать возможность полива растений.

6.2. Хранение

6.2.1. Хранение стерильных культур плодовых и ягодных растений осуществляют в вертикальном положении в холодильнике по ГОСТ 26678 с обязательной герметизацией культуральных сосудов термоусадочной или иной герметизирующей пленкой или заклейкой пробирок в полиэтиленовые кассеты при температуре от 2 °C до 4 °C.

6.2.2. Длительность хранения приобретенной партии стерильных культур плодовых и ягодных растений не должна превышать 20 сут.

6.2.3. Микрочеренки плодовых и ягодных культур, укорененные in vitro, можно хранить:

- в контролируемых условиях при температуре от 18 °C до 27 °C, фотопериоде 12 - 16 ч, освещенности 3,5 - 5,0 тыс. люкс не более 20 сут;

- в холодильнике при температуре от 2 °C до 8 °C - до 20 сут;

- в комнатных условиях - до 7 сут.

6.2.4. Адаптированные микрорастения плодовых и ягодных культур хранению не подлежат и должны быть высажены в защищенный грунт для доращивания.

В порядке исключения допускается временное хранение адаптированных микрорастений в течение 20 сут при температуре воздуха от 8 °C до 10 °C, влажности воздуха 80% - 100% и освещенности 3 - 5 тыс. люкс.

Требования безопасности для здоровья людей и окружающей среды при работе со стерильными культурами и адаптированными микрорастениями плодовых и ягодных культур обеспечивают в соответствии с ГОСТ 12.0.004, ГОСТ 12.1.005 и ГОСТ 12.3.041.

Стерильные культуры плодовых и ягодных растений получают методом культуры ткани из инициальных эксплантов.

Неукорененные микрочеренки получают путем деления конгломератов побегов и самих побегов, развившихся in vitro в процессе клонального микроразмножения растений. Эти микрочеренки в стерильных условиях пересаживают на специальные питательные среды, индуцирующие корнеобразование.

Микрочеренки плодовых и ягодных культур, полученные в процессе клонального микроразмножения и укорененные in vitro на искусственных питательных средах, представляют собой микрорастения с корнями, стеблями (кроме земляники) и листьями и культивируются в непроницаемых для микрофлоры культуральных сосудах (пробирках, колбах, банках и др.).

Адаптированные микрорастения плодовых и ягодных культур получают путем высадки микрочеренков, укорененных in vitro, в контейнеры различного типа вместимостью не менее 150 см³ с использованием простерилизованного субстрата в контролируемых условиях.