"ГОСТ Р 57599-2017. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукция микробиологическая. Бактериальные ларвицидные препараты против личинок комаров (БЛПК). Общие требования"
(утв. и введен в действие Приказом Росстандарта от 11.08.2017 N 869-ст)

1 РАЗРАБОТАН Ассоциацией "Некоммерческое партнерство Координационно-информационный центр государств - участников СНГ по сближению регуляторных практик" при участии ООО "Центр промышленной биотехнологии имени княгини Е.Р. Дашковой"

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 326 "Биотехнологии"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 11 августа 2017 г. N 869-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт распространяется на бактериальные ларвицидные препараты против личинок комаров (далее - БЛПК), получаемые микробиологическим способом и применяемые для уничтожения личинок кровососущих комаров, прошедшие в установленном порядке государственную регистрацию и включенные в Государственный каталог пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.008 Система стандартов безопасности труда. Биологическая безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.044 (ИСО 4588) Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывоопасность веществ и материалов. Номенклатура показателей и методы их определения

ГОСТ 12.2.003 Система стандартов безопасности труда. Оборудование производственное. Общие требования безопасности

ГОСТ 12.3.002 Система стандартов безопасности труда. Процессы производственные. Общие требования безопасности

ГОСТ 12.4.021 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 12.4.028-76 Система стандартов безопасности труда. Респираторы ШБ-1 "Лепесток". Технические условия

ГОСТ 12.4.253 (EN 166) Система стандартов безопасности труда. Средства индивидуальной защиты глаз. Общие технические требования

ГОСТ 5556 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия

ГОСТ 12026 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 20010 Перчатки резиновые технические. Технические условия

ГОСТ 20083 Дрожжи кормовые. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-82) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р 51232 Вода питьевая. Общие требования к организации и методам контроля качества

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ Р 55878 Спирт этиловый технический гидролизный ректификованный. Технические условия

ГОСТ Р 57233 Продукция микробиологическая. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ Р 57234-2016 Продукция микробиологическая. Упаковка, маркировка, транспортирование и хранение

ГОСТ Р 57248 Препараты ферментные. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ Р 57249 Препараты ферментные. Упаковка, маркировка, транспортирование и хранение

ГОСТ Р 57253 Дрожжи кормовые - паприн. Технические условия

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется принять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется принять в части, не затрагивающей эту ссылку.

БЛПК применяют в соответствии с методическими указаниями по их применению для борьбы с личинками кровососущих комаров, разработанными и утвержденными в установленном порядке.

3.2 По органолептическим, физико-химическим и биологическим показателям БЛПК должны соответствовать требованиям, указанным в таблице 1.

3.3 Состав документации, входящей в комплект поставки БЛПК, должен отвечать требованиям ГОСТ Р 57233-2016 и ГОСТ Р 57234-2016 (в части упаковки и маркировки).

4.1 БЛПК нетоксичны для человека при использовании его в нормах, рекомендуемых инструкцией по применению. Согласно гигиенической классификации БЛПК относят к классу практически нетоксичных веществ.

4.2 БЛПК не образуют токсичных соединений при контакте с воздухом, водой и под воздействием других веществ. Ввиду отсутствия стадии распылительной сушки возможность вредного воздействия аэрозолей препарата на работников предприятия-изготовителя практически исключается.

4.3 Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) БЛПК в воздухе рабочей зоны согласно [1] составляет не более 1 мг/см³.

4.4 Для предупреждения опасного и вредного воздействий микроорганизмов на людей следует соблюдать требования биологический безопасности по ГОСТ 12.1.008.

4.5 При производстве БЛПК не используют токсичные вещества. Определение перечня веществ, подлежащих контролю в воздушной среде на предприятии-изготовителе, согласно ГОСТ 12.1.005, [1] и [2].

4.6 Содержание контролируемых веществ в воздухе рабочей зоны предприятия-изготовителя не должно превышать предельно допустимых концентраций (ПДК), указанных в ГОСТ 12.1.005, [1] и [2].

4.7 Требования безопасности к процессу производства БЛПК - согласно ГОСТ 12.3.002 и [3], к технологическому оборудованию - согласно ГОСТ 12.2.003 и [4].

4.8 Все работы в помещениях, где осуществляют фасовку и упаковку БЛПК, проводят при работающей общей и местной приточно-вытяжной вентиляции по ГОСТ 12.4.021.

4.9 Требования к применению средств защиты, работающих с БЛПК, на предприятии-изготовителе - согласно [3] и [5].

4.10 Требования к составу и использованию средств индивидуальной защиты при применении БЛПК - согласно [5].

4.11 При изготовлении и применении БЛПК является обязательным использование спецодежды и следующих индивидуальных средств защиты:

- для защиты органов дыхания - респираторов ШБ-1 "Лепесток" по ГОСТ 12.4.028-76;

- для защиты рук - перчаток резиновых по ГОСТ 20010, или перчаток трикотажных;

- для защиты глаз - очков защитных по ГОСТ 12.4.253.

4.12 Во время работы с БЛПК запрещается курить, пить, принимать пищу. После работы необходимо вымыть руки и лицо водой с мылом. После окончания смены все работающие должны принять душ.

4.13 К работе с БЛПК не допускаются лица с хроническими воспалительными заболеваниями органов дыхания, зрения, кожи и лица, склонные к аллергическим реакциям, беременные женщины и кормящие матери, подростки до 18 лет.

4.14 Все работники, контактирующие с БЛПК, подвергаются периодическим медицинским осмотрам в соответствии с [6].

4.15 Использование БЛПК в нормах, рекомендуемых инструкцией по применению, не приводит к санитарно-опасным загрязнениям обрабатываемых водоемов. ПДК БЛПК в рыбохозяйственных водоемах - до 1 мг/дм³.

4.16 БЛПК непожаро- и невзрывоопасны и не обладают склонностью к накоплению статического электричества с образованием опасных потенциалов. БЛПК относят к группе негорючих веществ по ГОСТ 12.1.044.

Правила приемки БЛПК следует проводить по ГОСТ Р 57233.

5.1 Размер партии - не более 16 т.

Отбор проб проводят по ГОСТ Р 57233 и ГОСТ Р 57248. Масса объединенной пробы - не менее 0,5 кг.

6.2 Внешний вид и цвет БЛПК определяют визуально по каждой единице упаковки выборки при отборе точечной пробы.

Метод основан на определении концентрации БЛПК, вызывающей 50%-ную гибель личинок 2-го возраста (стадии) комаров при свободном поглощении частиц препарата в среде их обитания.

6.3.1 Аппаратура, материалы, реактивы:

- размельчитель тканей РТ-1 или РТ-2 по [7] или гомогенизатор другой аналогичной марки;

- весы лабораторные по ГОСТ Р 53228-2008, 3-го класса точности с наибольшим пределом 20 г и погрешностью взвешивания +/- 0,25 мг;

- термостат, поддерживающий температуру (28 +/- 1) °C;

- стаканы и колбы стеклянные лабораторные вместимостью 250, 500 и 1000 см³ любого класса точности по ГОСТ 25336-82;

- пипетки любого класса точности вместимостью 1,5; 1,0; 2,0; 5,0 см³ по ГОСТ 29227-91;

- чашки биологические (чашки Петри) типа ЧБН-2 по ГОСТ 25336-82;

- микрокомпрессор для аквариумов;

- кюветы эмалированные 30 x 15 x 3,5 см;

- палочка стеклянная;

- сетка капроновая;

- вода питьевая по ГОСТ Р 51232;

- дрожжи кормовые БВК (паприн) по ГОСТ Р 57253 или дрожжи кормовые по ГОСТ 20083;

- спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 55878;

- бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026;

- вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.

В качестве тест-объекта используют личинки второго возраста комаров Aedes aegupti Z или рода Culex, отродившихся из яиц одной популяции вида.

Для получения стандартных личинок кладки яиц в количестве 1000 экземпляров их замачивают в 800 см³ питьевой воды, выдержанной в течение суток для удаления хлора в стеклянных стаканах вместимостью 1 дм³. Для одновременного выплода личинок в воду добавляют 400 мг аскорбиновой кислоты.

Стаканы с кладками помещают в термостат при температуре (28 +/- 1) °C. Через 16 - 18 ч отраженных личинок по 750 экземпляров рассаживают сачком в эмалированные кюветы с 1 дм³ отстоянной воды. Для изготовления сачка 2 см² капронового сита прикрепляют к стеклянной палочке лейкопластырем. В кюветы вносят корм - 2 г дрожжей. Для аэрации воды и предотвращения образования пленки в кювете осуществляют подачу воздуха микрокомпрессором для аквариумов, которые с помощью часового механизма включают на 1 - 2 мин в час.

Личинки окукливаются на 5 - 6 сут. Куколок собирают ежедневно, промывают в воде и переносят в чашки Петри из расчета не более четырех особей на 1 см² поверхности воды.

Для вылета взрослых комаров чашки Петри с куколками устанавливают в маточный садок, который представляет собой проволочный каркас размером 20 x 20 см, обшитый капроновым ситом с ячеями 1 мм. В одну из стенок садка должен быть вшит длинный "рукав" (20 см), являющийся входом в садок.

Через 3 - 4 дня после вылета комаров кормят кровью. Для этого в садок с комарами помещают обездвиженную морскую свинку или белую мышь. Свинку фиксируют в цилиндре из металлической сетки диаметром 8 - 10 см и длиной 15 - 20 см, мышь - в цилиндре из металлической сетки диаметром 3 - 5 см и длиной 8 - 10 см.

Через день проводят повторное кормление кровью. Одновременно осуществляют питание комаров глюкозой, для чего в садок кладут вату, смоченную в 10%-ном растворе глюкозы. Вату накрывают чашкой Петри для предотвращения высыхания и меняют через день.

Садок с взрослыми комарами должен находиться в термостате при температуре (27 +/- 1) °C.

Через три дня после первого кормления кровью в садок помещают чашку Петри с влажной фильтровальной бумагой для откладки яиц.

Бумагу с кладками вынимают два раза в день и выдерживают в течение 2 сут в шкафу при относительной влажности 70% - 80% для дозревания яиц, затем яйца высушивают. Яйца хранят не более 3 мес в комнатных условиях.

Для получения личинок второго возраста за 36 - 40 ч до постановки опыта, яйца комаров (500 - 600 шт.) замачивают в стеклянном сосуде вместимостью 1 дм³, содержащем 0,5 дм³ воды. Добавляют 200 мг аскорбиновой кислоты и помещают в термостат температурой (28 +/- 1) °C. Через 4 - 6 ч из яиц отрождаются личинки 1-й - 2-й стадий. После отрождения личинкам дают корм - 50 мг дрожжей. На 30-й - 34-й ч личинки первого возраста линяют и вступают во вторую стадию развития. После линьки на поверхности воды хорошо видны шкурки головной капсулы личинок первой стадии.

В зависимости от количества тест-объекта испытание БЛПК проводят одним из следующих способов:

- испытание на 600 личинках;

- испытание на 240 личинках.

6.3.3.1 Испытание на 600 личинках

Для проведения испытания используют 24 стеклянных лабораторных стакана вместимостью 500 см³, в которые наливают по 250 см³ отстоянной питьевой воды.

В каждый стакан отсаживают по 25 личинок второго возраста. Испытывают БЛПК пяти концентраций: 0,0008, 0,0004, 0,0002, 0,0001, 0,00005 см³/дм³, обеспечивающих гибель личинок от 10% до 100%. Каждую концентрацию испытывают в четырех повторностях. Одновременно ставят контрольный опыт в четырех повторностях без добавления БЛПК.

Суспензию БЛПК (1) готовят следующим образом: 1 см³ БЛПК помещают в колбу размельчителя с 50 см³ отстоянной питьевой воды, перемешивают в течение 2 мин при скорости 3000 об/мин, после чего колбу доливают водой до 100 см³ и содержимое тщательно перемешивают. Из полученной суспензии (1), содержащей 0,01 см³ БЛПК в 1 см³ воды, готовят разведение (2): 99 см³ отстоянной питьевой воды и 1 см³ суспензии (1).

Затем в стаканы с личинками добавляют следующее количество суспензии (2):

Через час после внесения испытуемой суспензии в стаканы с личинками добавляют по 1 см³ 3%-ной суспензии корма. Стаканы с личинками помещают в термостат температурой (28 +/- 1) °C на (24 +/- 0,5) ч.

6.3.3.2 Испытание на 240 личинках

Для проведения испытания используют 24 стеклянных лабораторных стакана вместимостью 250 см³, в которые наливают по 100 см³ отстоянной питьевой воды.

В каждый стакан отсасывают по 10 личинок второго возраста. Испытывают БЛПК пяти концентраций: 0,0008, 0,0004, 0,0002, 0,0001, 0,00005 см³/дм³, обеспечивающих гибель личинок от 10% до 100%. Каждую концентрацию испытывают в четырех повторностях. Одновременно ставят контрольный опыт в четырех повторностях без добавления БЛПК.

Суспензию БЛПК (разведение (2)) готовят по 6.3.3.1 с учетом относительных поправочных коэффициентов в приложении А.

Затем в стаканы с личинками добавляют следующее количество суспензии (2) с учетом относительных поправочных коэффициентов в приложении А:

Через час после внесения испытуемой суспензии в стаканы с личинками добавляют по 0,5 см³ 3%-ной суспензии корма. Стаканы с личинками помещают в термостат температурой (28 +/- 1) °C на (24 +/- 0,5) ч.

Основные этапы обработки результатов опыта следующие:

- учет гибели личинок;

- расчет отношения числа личинок, погибших от данной концентрации БЛПК, к общему числу личинок, подвергшихся действию этой концентрации;

- вычисление log ЛК₅₀.

6.3.4.1 Учет гибели личинок проводят через (24 +/- 0,5) ч после их контакта с БЛПК. Подсчитывают число оставшихся в живых личинок для каждой концентрации и вычисляют процент гибели в четырех повторностях. Параллельно учитывают число личинок в контроле. Гибель личинок в контроле не должна превышать 10% отн.

6.3.4.2 Отношение числа личинок, погибших от i-й концентрации БЛПК к общему числу личинок, подвергшихся действию этой концентрации, вычисляют по формуле

где O_i - общее число личинок, погибших от i-й концентрации БЛПК;

M - общее число личинок, подвергшихся действию i-й концентрации БЛПК;

K - общее число личинок, погибших в контроле.

6.3.4.3 log ЛК₅₀ вычисляют по формуле

где C - концентрация БЛПК.

Упаковку и маркировку препаратов БЛПК проводят по ГОСТ Р 57234 и ГОСТ Р 57249.

7.1.1 БЛПК фасуют по 0,5 - 40 кг. Допускается упаковка по 60 кг.

7.1.2 Допускается упаковка БЛПК в полиэтиленовые канистры по [8], бочки по [9] или емкости по [10], а также емкости из нержавеющей стали по действующей нормативной документации.

7.1.3 На каждую единицу транспортной тары наносят манипуляционный знак "Боится нагрева" в соответствии с ГОСТ Р 57234-2016.

Транспортирование и хранение препаратов БЛПК проводят по ГОСТ Р 57234.

7.2.1 Хранят БЛПК при температуре от плюс 30 °C до минус 30 °C.

БЛПК применяют в соответствии с утвержденной в установленном порядке инструкцией по применению и списками химических и биологических средств борьбы с вредителями, разрешенных для применения в сельском хозяйстве и для розничной продажи населению.

9.1 Изготовитель гарантирует соответствие БЛПК требованиям настоящего стандарта при соблюдении потребителем условий транспортирования, хранение и применения.

9.2 Гарантийный срок хранения БЛПК - не менее 12 мес со дня изготовления. По истечении указанного срока хранения перед реализацией или использованием препарат должен быть проверен на соответствие требованиям настоящего стандарта.

В случае соответствия препарата указанным требованиям срок годности продлевается на 6 мес.

Количество суспензии (2) для 6.3.3.1:

Количество суспензии (2) для 6.3.3.2: