"ГОСТ Р 51470-99. Государственный стандарт Российской Федерации. Казеины и казеинаты. Метод определения массовой доли белка"
(принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22.12.1999 N 625-ст)

1. Разработан Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности (ГУ ВНИМИ).

Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 186 "Молоко и молочные продукты".

2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 625-ст.

3. Настоящий стандарт гармонизирован с международным стандартом ИСО 5549-78 "Казеины и казеинаты. Определение содержания белка (арбитражный метод)".

4. Введен впервые.

Настоящий стандарт распространяется на казеины и казеинаты и устанавливает метод определения массовой доли белка.

Метод основан на минерализации пробы под действием сернокислого калия и серной кислоты в присутствии сернокислой меди в качестве катализатора, дистилляции раствора, абсорбции аммиака раствором борной кислоты, титровании аммиака раствором соляной кислоты и расчете массовой доли азота с последующим пересчетом на массовую долю белка умножением на коэффициент 6,38.

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 844-79 Магнезия жженая. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия

ГОСТ 2062-77 Кислота бромисто-водородная. Технические условия

ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4145-74 Калий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4165-78 Медь (II) сернокислая 5-водная. Технические условия

ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5833-75 Сахароза. Технические условия

ГОСТ 5962-67 Спирт этиловый ректификованный. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809-82 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29251-91 Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р 51464-99 Казеины и казеинаты. Определение массовой доли влаги

ИСО 707-97 <*> Молоко и молочные продукты. Методы отбора проб

--------------------------------

<*> Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе соответствующего ИСО.

В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:

массовая доля белка в казеинах и казеинатах: величина, пропорциональная массовой доле азота в образце и выраженная в процентах. Коэффициент пропорциональности - 6,38.

Прибор нагревательный (аппарат для минерализации) с приспособлением для поддержания колбы Кьельдаля в наклонном положении под углом 45°.

Весы лабораторные по ГОСТ 24104, 2-го класса точности, наибольшим пределом взвешивания 200 г.

Холодильник по ГОСТ 25336, типа ХПТ исполнения 1, длиной кожуха 400 или 600 мм (для анализа по Кьельдалю).

Каплеуловитель по ГОСТ 25336, исполнения КО-60 (для анализа по Кьельдалю).

Устройство измельчающее, позволяющее измельчать пробу без ее нагрева, потери или поглощения влаги.

Сито из проволочной сетки диаметром 200 мм, размером стороны ячейки 500 мкм.

Термометр стеклянный нертутный лабораторный по ГОСТ 28498 диапазоном измерения от 0 до 100 °C и ценой деления шкалы 1,0 °C.

Бумага лакмусовая.

Колбы конические по ГОСТ 25336 вместимостью 100, 250 и 500 см3 с притертыми стеклянными пробками.

Колба Кьельдаля по ГОСТ 25336 вместимостью 500 см3.

Колбы мерные по ГОСТ 1770 вместимостью 500 и 1000 см3.

Стаканы по ГОСТ 25336, типов В и Н, исполнения 1 и 2, вместимостью 50 см3.

Цилиндры градуированные по ГОСТ 1770 вместимостью 50 и 100 см3.

Бюретки по ГОСТ 29251 вместимостью 50 см3 и ценой деления 0,1 см3.

Кусочки твердого фарфора или шарики стеклянные (для минерализации).

Куски пемзы свежепрокаленные (для дистилляции).

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.

Кислота серная концентрированная по ГОСТ 4204, плотностью 1,84 г/см3 при температуре 20 °C.

Калий сернокислый по ГОСТ 4145.

Медь (II) сернокислая 5-водная по ГОСТ 4165.

Сахароза по ГОСТ 5833.

Кислота борная по ГОСТ 2062, раствор концентрации 40 г/дм3.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, раствор массовой доли 30%.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор концентрации c(HCl) = 0,1 моль/дм3.

Метиловый красный.

Метиловый голубой.

Магнезия жженая по ГОСТ 844.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками и оборудование с техническими характеристиками не хуже, а также реактивы по качеству не ниже указанных.

Отбор проб и подготовка их к анализу - по ГОСТ 26809, для экспортно-импортных операций - по ИСО 707.

6.1. Подготовка пробы

6.1.1. В колбу вместимостью 250 см3 помещают (50 +/- 1) г казеина или казеината, закрывают колбу пробкой и перемешивают образец десятикратным переворачиванием и встряхиванием колбы.

6.1.2. Тщательно перемешанную пробу переносят на лабораторное сито.

6.1.3. Если 50 г пробы полностью просеивается через сито, то проба пригодна для дальнейшей работы.

6.1.4. Если проба полностью или частично не проходит через сито, повторно измельчают (50 +/- 5) г образца. Пробу просеивают, переносят в колбу вместимостью 250 см3, закрывают пробкой и тщательно перемешивают десятикратным переворачиванием колбы. Во время проведения этих работ необходимо исключить попадание влаги в пробу.

6.2. Приготовление индикатора

Взвешивают 2 г метилового красного и 1 г метилового голубого, помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3 и наливают этиловый спирт до метки.

6.3. Проверка образца на присутствие небелкового азота (присутствие аммонийного казеината или других аммонийных соединений)

В коническую колбу вместимостью 100 см3 помещают (1,00 +/- 0,01) г пробы, приливают 10 см3 дистиллированной воды и 100 мг магнезии. Тщательно смывают водой магнезию, приставшую к стенкам, закрывают колбу корковой пробкой, вставляют при этом кусок красной лакмусовой бумаги между пробкой и горлышком колбы. Перемешивают содержимое колбы и нагревают колбу на водяной бане температурой (62 +/- 2) °C. Если лакмусовая бумага окрашивается в голубой цвет в течение 15 мин, это свидетельствует о присутствии аммиака, и, следовательно, данный метод не может применяться для определения белка.

6.4. Проверка качества реактивов (контрольный анализ)

Проверку качества реактивов проводят с использованием 0,5 г сахарозы вместо навески казеина или казеината. Используют аппаратуру и реактивы по разделу 4, методику по разделу 7. Если объем раствора соляной кислоты, израсходованной на титрование, превышает 0,5 см3, реактивы проверяют и реактив (реактивы) с примесями очищают или заменяют. Результат измерения объема раствора соляной кислоты, израсходованной на титрование в контрольном анализе, используют при расчете массовой доли белка по формуле (1).

7.1. Помещают в колбу Кьельдаля навеску казеина или казеината массой (0,3 +/- 0,1) г, подготовленных по 6.1.

7.2. Помещают в колбу Кьельдаля несколько кусочков фарфора или стеклянных шариков и 15 г безводного сернокислого калия. Добавляют 0,2 г сернокислой меди и промывают горлышко колбы небольшим количеством воды. Добавляют 20 см3 концентрированной серной кислоты. Содержимое колбы перемешивают.

Колбу осторожно нагревают на аппарате для минерализации до перехода суспензии в состояние истинного раствора и появления бледной зелено-голубой окраски. При нагревании время от времени колбу встряхивают.

Процесс нагревания регулируют так, чтобы образующийся пар конденсировался в середине горлышка колбы. Колбу нагревают в течение 90 мин, избегая при этом локального перегрева.

Колбу охлаждают до комнатной температуры. Осторожно добавляют 200 см3 дистиллированной воды и несколько кусочков пемзы. Перемешивают и снова охлаждают.

7.3. Помещают в коническую колбу 50 см3 раствора борной кислоты и четыре капли индикатора по 6.2. Перемешивают. Устанавливают коническую колбу под холодильником так, чтобы кончик выходной трубки холодильника был погружен в раствор борной кислоты.

Градуированным цилиндром добавляют в колбу Кьельдаля 80 см3 раствора гидроокиси натрия. Во время этой операции колбу поддерживают в наклонном положении, чтобы раствор стекал по стенке колбы и на дне образовывался слой гидроокиси.

Соединяют колбу Кьельдаля с холодильником через каплеуловитель.

Для перемешивания содержимого колбу Кьельдаля осторожно вращают. Колбу нагревают, избегая любого вспенивания. Дистилляцию регулируют так, чтобы собрать 150 см3 дистиллята за 30 мин. Дистиллят должен иметь температуру ниже 25 °C. За 2 мин до окончания дистилляции опускают коническую колбу так, чтобы кончик выходной трубки холодильника не был погружен в раствор кислоты, промывают кончик небольшим количеством воды. Прекращают нагревание, вынимают выходную трубку и промывают ее наружные и внутренние стенки небольшим количеством воды, собирая смывы в коническую колбу.

7.4. Дистиллят титруют в конической колбе раствором соляной кислоты до перехода зеленого цвета в серый и измеряют объем раствора соляной кислоты, израсходованный на титрование.

8.1. Массовую долю белка в пробе , %, вычисляют по формуле

где 1,4 - масса азота, эквивалентная 1 см3 соляной кислоты, концентрацией c(HCl) = 0,1 моль/дм3, мг/см3;

- объем раствора соляной кислоты, израсходованной на титрование в основном анализе, см3;

- объем раствора соляной кислоты, израсходованной на титрование в контрольном анализе по 7.4, см3;

T - титр соляной кислоты;

6,38 - коэффициент пересчета массовой доли азота на массовую долю белка;

m - масса пробы, г.

Рассчитывают массовую долю белка с округлением результата до первого десятичного знака.

8.2. Массовую долю белка в пробе в пересчете на сухое вещество , %, вычисляют по формуле

где M - массовая доля влаги в пробе, %, определенная по ГОСТ Р 51464.

9.1. Пределы допускаемой погрешности результата определения - +/- 0,5%, сходимость - не более 0,3% и воспроизводимость - 1,0% при вероятности P = 0,95.

9.2. Если расхождение результатов двух параллельных определений (сходимость) превышает 0,3%, повторно проводят два новых определения.