"ГОСТ Р 53878-2010. Национальный стандарт Российской Федерации. Мед. Метод определения падевого меда"
(утв. и введен в действие Приказом Росстандарта от 21.09.2010 N 259-ст)

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения".

1. Разработан Государственным научным учреждением Научно-исследовательским институтом пчеловодства Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИ пчеловодства Россельхозакадемии) и Обществом с ограниченной ответственностью "Аналитический центр "Апис".

2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 432 "Пчеловодство".

3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 21 сентября 2010 г. N 259-ст.

4. Введен впервые.

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомления и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.

Настоящий стандарт распространяется на натуральный падевый мед и устанавливает показатели качества и методы их определения.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2006 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ Р 51568-99 (ИСО 3310-1-90) Сита лабораторные из металлической проволочной сетки. Технические условия

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ Р 52001-2002 Пчеловодство. Термины и определения

ГОСТ Р 52451-2005 Меды монофлорные. Технические условия

ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) Вода для лабораторного анализа. Технические условия

ГОСТ Р 52834-2007 Мед натуральный. Методы определения гидроксиметилфурфураля

ГОСТ Р 52940-2008 Мед. Метод определения частоты встречаемости пыльцевых зерен

ГОСТ Р 53120-2008 Мед. Метод определения электропроводности

ГОСТ Р 53126-2008 Мед. Рефрактометрический метод определения воды

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 1027-67 Реактивы. Свинец (II) уксуснокислый 3-водный. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 8677-76 Реактивы. Кальция оксид. Технические условия

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 19792-2001 Мед натуральный. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52001, ГОСТ 19792, ГОСТ Р 52940, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1. Падевые элементы (honeydew elements): части мицелия, споры и спорангии грибов, микроскопические водоросли.

3.2. Структурные элементы меда (structural elements of honey): падевые элементы и пыльцевые зерна.

4.1. Требования электробезопасности при работе с приборами - по ГОСТ 12.1.019.

4.2. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

4.3. При выполнении анализов необходимо соблюдать требования безопасности при работе с химическими реактивами согласно ГОСТ 12.1.007.

4.4. К проведению анализов допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже среднего технического образования, владеющие навыками проведения анализов и изучившие инструкции по эксплуатации используемой аппаратуры.

По органолептическим, микроскопическим и физико-химическим показателям падевый мед соответствует требованиям, приведенным в таблицах 1, 2, 3.

Остальные технические требования и показатели качества соответствуют требованиям ГОСТ 19792.

6.1. Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 19792.

6.2. Подготовка пробы к испытанию

6.2.1. Закристаллизованный мед предварительно размягчают на термостатируемой водяной бане, предназначенной для равномерного обогрева с помощью трубчатых электрических нагревательных элементов мощностью не более 1600 Вт, напряжение сети 220 В, диапазон регулировки температуры от 20 °C до 100 °C, или в сушильном шкафу по ГОСТ 14919 при температуре не выше 40 °C, продавливают через сито по ГОСТ Р 51568 металлическим или пластмассовым шпателем с длиной рабочей поверхности не менее 20 мм и охлаждают до комнатной температуры.

6.2.2. Сотовый мед (без перговых ячеек) распечатывают, отделяют от сот при помощи металлического сита без нагревания.

6.2.3. Мед с примесями после растворения кристаллов процеживают при комнатной температуре через сито. Крупные механические частицы удаляют вручную.

Анализируемую пробу тщательно перемешивают не менее 3 мин так, чтобы в мед попало меньше воздуха.

6.3. Определение органолептических показателей

Определение органолептических показателей - по ГОСТ 19792 и ГОСТ Р 52451.

6.4. Определение микроскопических показателей

Количество падевых элементов (ПЭ) и пыльцевых зерен (ПЗ) определяют по ГОСТ Р 52940, вид меда в зависимости от соотношения микроскопических элементов (ПЭ/ПЗ) - по таблице 2.

6.5. Определение электропроводности

Определение электропроводности - по ГОСТ Р 53120.

6.6. Определение массовой доли редуцирующих сахаров, сахарозы, мелецитозы

6.6.1. Определение массовой доли редуцирующих сахаров, сахарозы - по ГОСТ 19792.

6.6.2. Определение массовой доли фруктозы, глюкозы, сахарозы, мелецитозы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с рефрактометрическим детектированием.

Этот метод применяют в качестве арбитражного при возникновении разногласий в оценке качества меда.

6.6.2.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

Хроматограф жидкостный, состоящий:

- из градиентного насоса высокого давления с подачей элюента от 0,1 до 5,0 см3/мин;

- термостата колонок;

- инжектора или автосемплера;

- рефрактометрического детектора;

- системы для сбора и обработки данных.

Колонка хроматографическая с аминмодифицированным диоксидом кремния длиной 250 мм (или 150 мм) с внутренним диаметром 4,6 мм.

Предколонка с картриджем Phenomenex (ODS)4 x 3 мм.

Микрошприцы объемом от 0,010 до 0,050 см3 для жидкостной хроматографии (в случае использования инжектора).

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,003 г.

Система получения воды квалификации "для ВЭЖХ" Millipore Simplicity или аналогичная.

Устройство для фильтрации и дегазации.

Колбы мерные 1 (2)-100-2(ПМ) по ГОСТ 1770.

Пипетки 2-2-25 по ГОСТ 29227.

Цилиндры 3-50(100) по ГОСТ 1770.

Стаканы В-1-100 ТС по ГОСТ 25336.

Колбы конические КН-1 (2,3)-250-29/32(34) ТС по ГОСТ 25336.

1-канальные механические дозаторы с варьируемыми объемами дозирования 0,010 - 0,100 см3, 0,100 - 1,0 см3, 1,0 - 5,0 см3 1-го класса точности.

Фильтр нейлоновый импортный на шприце с размером пор м.

Водяная баня с диапазоном регулирования температуры от 20 °C до 100 °C.

Палочки стеклянные лабораторные оплавленные длиной от 15 до 20 см.

Ацетонитрил для жидкостной хроматографии.

Метанол для жидкостной хроматографии.

Фруктоза с содержанием основного вещества не менее 99,0%.

Глюкоза с содержанием основного вещества не менее 99,0%.

Сахароза с содержанием основного вещества не менее 99,0%.

Мелецитоза с содержанием основного вещества не менее 99,0%.

Вода для лабораторного анализа по ГОСТ Р 52501, категории 1.

Допускается использование других средств измерений и вспомогательного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам и качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.

Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

6.6.2.2. Подготовка к испытаниям

а) Приготовление элюента для ВЭЖХ

В конической колбе на 250 см3 по ГОСТ 25336 смешивают 80 см3 ацетонитрила для ВЭЖХ и 20 см3 воды для лабораторного анализа по ГОСТ Р 52501. Раствор элюента пропускают через устройство для фильтрации и дегазации. Раствор при необходимости хранят 30 сут при температуре 4 °C.

б) Приготовление стандартного раствора сахаридов

Фруктозу массой (2,000 +/- 0,001) г, глюкозу (1,500 +/- 0,001) г, сахарозу (0,250 +/- 0,001) г, мелецитозу (0,150 +/- 0,001) г растворяют в воде для лабораторного анализа в одной мерной колбе вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770. Добавляют 25 см3 метанола для ВЭЖХ. Объем раствора в колбе доводят до метки водой для лабораторного анализа, перемешивают. Полученный раствор фильтруют через нейлоновый фильтр с размером пор м.

Раствор хранят в холодильнике 30 сут при температуре 4 °C или 180 сут при температуре минус 18 °C.

в) Приготовление раствора меда

В стакан вместимостью 50 см3 помещают навеску меда массой (5,000 +/- 0,001) г, подготовленного по 6.2. К навеске приливают 10 - 20 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709, мед тщательно растирают стеклянной палочкой и переносят жидкость в мерную колбу вместимостью 100 см3. Обработку пробы повторяют два-три раза до полного растворения меда, затем стакан несколько раз обмывают небольшими порциями дистиллированной воды, которые также сливают в мерную колбу, при этом объем жидкости не должен превышать 2/3 объема колбы. Добавляют 25 см3 метанола. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают. Полученный раствор фильтруют через нейлоновый фильтр с размером пор м.

Раствор хранят в холодильнике 30 сут при температуре 4 °C или 180 сут при температуре минус 18 °C.

6.6.2.3 Проведение испытаний

Условия хроматографического анализа:

- колонка Eclipse XDB-C18, 5 мкм, 150 x 4,6 мм (см. 6.6.2.1);

- предколонка с картриджем Phenomenex C18(ODS)4 x 3 мм (см. 6.6.2.1);

- температура колонки(30 +/- 1) °C;

- скорость потока 1,3 см3/мин;

- подвижная фаза - элюент по 6.6.2.2а);

- объем вводимой пробы 20 мкл.

Значение времени удерживания:

фруктозы - (5,2 +/- 0,3) мин;

глюкозы - (6,0 +/- 0,3) мин;

сахарозы - (8,5 +/- 0,3) мин

мелецитозы - (18,0 +/- 0,3) мин.

Стандартный раствор сахаридов, приготовленный по 6.6.2.2б), и раствор меда, приготовленный по 6.6.2.2в), последовательно хроматографируют не менее трех раз каждый в указанных выше условиях.

Примечание. Объемы инжекции раствора меда и стандартного раствора должны быть одинаковыми.

При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения.

6.6.2.4 Обработка и представление результатов испытаний

а) Качественная оценка

Путем сравнения времен удерживания в ВЭЖХ-спектрах стандартного раствора и раствора меда проводят качественное обнаружение определяемых сахаридов.

б) Количественное определение

Количественное определение осуществляют методом внешних стандартов по площадям или высотам пиков определяемых сахаридов в ВЭЖХ-спектре раствора меда по отношению к стандартным растворам сахаридов.

Массовую долю сахарида X, %, рассчитывают по формуле

где - площадь пика соответствующего сахарида в растворе меда;

- общий объем раствора меда, см3;

- масса сахарида, содержащаяся в стандартном растворе , г;

- площадь пика соответствующего сахарида в стандартном растворе;

- общий объем стандартного раствора, см3;

- навеска меда, г.

Вычисление проводят до второго десятичного знака.

в) За результат испытаний принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений, полученных в условиях повторяемости, если абсолютное расхождение между ними не превышает предела повторяемости r. Значение предела повторяемости r приведено в таблице 4.

При превышении предела повторяемости r целесообразно произвести дополнительное определение значения массовой доли сахарида и получить еще один результат. Если при этом абсолютное расхождение результатов трех определений не превосходит значения критического диапазона , то в качестве окончательного результата принимают среднеарифметическое значение результатов трех определений. Значение критического диапазона приведено в таблице 4.

При невыполнении этого условия проводят повторные испытания.

г) Абсолютное расхождение между результатами испытаний, полученными в двух лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости R. При выполнении этого условия приемлемы оба результата испытаний и в качестве окончательного результата может быть использовано их среднеарифметическое значение. Значение предела воспроизводимости R приведено в таблице 4.

д) Результат испытаний, округленный до первого десятичного знака, в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

где - среднеарифметическое значение результатов определений по 6.6.2.4в), %;

- границы абсолютной погрешности результатов определений по таблице 4, %.

е) Результаты испытания оформляют протоколом в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025.

6.7. Качественные реакции на падь

6.7.1. Известковая реакция

Метод основан на свойстве веществ, входящих в состав падевых медов, образовывать осадок при кипячении раствора меда с насыщенным раствором гидроокиси кальция.

6.7.1.1. Средства измерений, вспомогательное оборудование и реактивы

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,002 г.

Пробирки стеклянные П-1-10-0,1ХС по ГОСТ 1770.

Палочки стеклянные лабораторные длиной 15 - 20 см.

Электроплитка по ГОСТ 14919.

Колбы 2-250-2, 1-500-1 по ГОСТ 1770.

Кальция окись по ГОСТ 8677.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Пипетки градуированные 1-2-1(5) по ГОСТ 29227.

Стаканы В-1-50 ТС по ГОСТ 25336.

6.7.1.2. Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 19792.

6.7.1.3. Приготовление известковой воды

(50,000 +/- 0,001) г окиси кальция по ГОСТ 8677 помещают в стеклянную колбу вместимостью 500 см3 по ГОСТ 1770, осторожно при постоянном помешивании добавляют 200 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709, перемешивают несколько раз в течение 12 ч и дают суспензии полностью отстояться.

Прозрачную жидкость сливают в колбу вместимостью 250 см3 с пробкой по ГОСТ 1770 и используют в качестве реактива.

6.7.1.4. Приготовление 50%-ного раствора меда

В стакане вместимостью 50 см3 по ГОСТ 25336 взвешивают (5,000 +/- 0,001) г меда по 6.2 и добавляют 5 см3 дистиллированной воды. Растворяют мед, размешивая его стеклянной палочкой.

6.7.1.5. Проведение испытания

В пробирку вместимостью 10 см3 по ГОСТ 1770 пипеткой по ГОСТ 29227 наливают 2 см3 раствора меда по 6.7.1.4 и 2 см3 известковой воды по 6.7.1.3, закрывают пробкой и содержимое хорошо перемешивают. После этого, вынув пробку, осторожно нагревают смесь до кипения над электроплиткой по ГОСТ 14919. Образование хлопьевидного осадка свидетельствует о наличии пади в меде.

6.7.2. Реакция с уксуснокислым свинцом

Метод основан на свойстве веществ, входящих в состав падевых медов, при взаимодействии с уксуснокислым свинцом образовывать рыхлые хлопья.

6.7.2.1. Средства измерений, вспомогательное оборудование и реактивы

Пробирки стеклянные 1-10-01 по ГОСТ 1770.

Пипетки градуированные по ГОСТ 29227.

Баня водяная по 6.2.1.

Термометр жидкостной стеклянный по ГОСТ 28498.

Секундомер механический однострелочный в металлическом или пластмассовом корпусе с ценой деления шкалы: секундной 0,2 с, минутной - 1 мин. Средняя погрешность за 30 мин +/- 1,0 с.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Свинец (II) уксуснокислый по ГОСТ 1027.

Колбы 2-100-2 по ГОСТ 1770.

Стаканы 1-50 по ГОСТ 25336.

6.7.2.2. Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 19792.

6.7.2.3. Приготовление 25%-ного раствора уксуснокислого свинца

В колбу вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770 взвешивают (25,000 +/- 0,001) г уксуснокислого свинца по ГОСТ 1027 и (75,000 +/- 0,001) г дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Раствор тщательно перемешивают до полного растворения уксуснокислого свинца.

6.7.2.4. Проведение испытания

В пробирку вместимостью 10 см3 по ГОСТ 1770 пипеткой по ГОСТ 29227 наливают 2 см3 раствора меда по 6.7.1.4 и 2 см3 дистиллированной воды, добавляют пять капель раствора уксуснокислого свинца по 6.7.2.3. Содержимое тщательно перемешивают и ставят на 3 мин в водяную баню, нагретую до 80 °C - 100 °C. Образование рыхлых хлопьев, выпавших в осадок, свидетельствует о положительной реакции на падь. Помутнение жидкости любой степени без хлопьев и осадка считается отрицательной реакцией.

6.7.3. Спиртовая реакция

Метод основан на образовании рыхлых хлопьев, выпадающих в осадок, при взаимодействии этилового спирта с веществами, входящими в состав падевых медов.

6.7.3.1. Средства измерений и реактивы

Пробирки стеклянные 1-10-01 по ГОСТ 1770.

Пипетки градуированные по ГОСТ 29227.

Спирт этиловый с массовой долей спирта 96% по ГОСТ Р 51652.

6.7.3.2. Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 19792.

6.7.3.3. Проведение испытания

В пробирке по ГОСТ 1770 смешивают 1 см3 раствора меда по 6.7.1.4 и 8 - 10 см3 этилового спирта по ГОСТ Р 51652. Содержимое тщательно перемешивают. Помутнение жидкости и выпадение хлопьев указывает на присутствие пади в меде.

6.8. Определение массовой доли воды

Определение массовой доли воды - по ГОСТ Р 53126.

6.9. Определение диастазного числа, механических примесей, признаков брожения, общей кислотности

Определение диастазного числа, механических примесей, признаков брожения, общей кислотности - по ГОСТ 19792.

6.10. Определение гидроксиметилфурфураля

Определение гидроксиметилфурфураля - по ГОСТ Р 52834.