"ГОСТ 32436-2020. Межгосударственный стандарт. Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Испытания по оценке острого раздражающего/разъедающего действия на кожу"
(введен в действие Приказом Росстандарта от 21.10.2020 N 888-ст)

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Российский научно-технический центр информации по стандартизации, метрологии и оценке соответствия" ФГУП "СТАНДАРТИНФОРМ" на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 июня 2020 г. N 131-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 21 октября 2020 г. N 888-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32436-2020 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2021 г.

5 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному документу OECD Test N 404:2015 "Руководство по испытанию химических веществ. Острое раздражение/разъедание кожи" ("Guideline for testing of chemicals. Acute Dermal Irritation/Corrosion", MOD), путем

- включения дополнительного раздела 1, дополнительных фраз (подраздел 5.2) и сноски в таблице 1, выделенных в тексте курсивом;

- изменения его структуры для приведения в соответствие с правилами, установленными в ГОСТ 1.5 (подразделы 4.2 и 4.3).

Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой указанного международного документа приведено в дополнительном приложении ДА.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6)

6 ВЗАМЕН ГОСТ 32436-2013

Руководства Организации экономического сотрудничества и развития (OECD) по испытаниям химических веществ периодически пересматриваются с учетом результатов наилучших доступных исследований. При пересмотре данного руководства особое внимание было уделено возможности соблюдения принципов гуманного обращения с животными и оценке всей имеющейся информации об исследуемом химическом веществе для предотвращения излишних исследований на лабораторных животных. Новая редакция руководства OECD Test N 404 (впервые принятого в 1981 г., пересмотренного в 1992, 2002 и 2015 гг.) включает рекомендации руководящего документа по комплексным подходам к испытаниям и оценке (IATA) раздражающего/разъедающего действия на кожу <1>, в котором предлагается модульный принцип для исследования раздражения/разъедания кожи. IATA содержит описание нескольких модулей, в которых: сгруппированы источники информации и методы анализа; (i) представлено руководство по объединению и использованию имеющихся данных результатов испытаний, а также непроверенных данных для оценки раздражения кожи и потенциальной возможности разъедания кожи химическими веществами; (ii) предлагается подход в случае необходимости проведения дальнейшего исследования <1>. Кроме того, вместо одновременного рекомендуется последовательное проведение трех аппликационных нанесений (патч-тестов) исследуемого химического вещества на кожу одного животного в начальном испытании in vivo.

--------------------------------

<1> См. [1].

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 раздражение кожи (dermal irritation): Обратимые повреждения кожи, возникающие в результате нанесения исследуемого химического вещества однократно на 4 ч.

3.2 разъедание кожи (dermal corrosion): Необратимые повреждения кожи, а именно, некроз, наблюдаемый в эпидермисе и дерме, в результате нанесения исследуемого химического вещества однократно на 4 ч.

Примечание - Типичным проявлением разъедания является образование язв, кровотечение, образование кровянистых корок. К окончанию исследования на 14-й день кожа становится бледной, обработанный участок полностью лысеет и покрывается струпьями. Для оценки сомнительных повреждений ткани рекомендуется провести гистопатологическое исследование.

В интересах получения достоверных научных данных и в целях гуманного обращения с животными исследования in vivo не следует проводить до тех пор, пока не будут оценены все имеющиеся данные о потенциальной способности исследуемого химического вещества вызывать раздражающее/разъедающее действие на кожу путем анализа весомых доказательств (WoE), приведенных в соответствующих модулях в нормативном документе <1> по комплексным подходам к исследованию и оценке раздражения и разъедания кожи. В части 1 вышеуказанного документа предусмотрено распределение имеющихся данных по семи модулям, охватывающим клинические данные для человека, результаты исследований in vivo, in vitro, данные о физико-химических свойствах веществ [например, значение pH (особенно для сильных кислот или щелочей)] и методы испытаний. В части 2 предусмотрено проведение анализа WoE. Если данные WoE все еще не убедительны, то должны быть проведены дополнительные исследования (часть 3), начиная с методов in vitro, и в качестве последней возможности используют исследования in vivo. В связи с изложенным этот анализ должен уменьшить потребность в исследовании in vivo раздражающего/разъедающего действия на кожу исследуемых химических веществ, для которых уже имеются достаточные доказательства из других исследований относительно конечных критериев оценки.

--------------------------------

<1> См. [1].

5.1 Исследуемое химическое вещество наносят однократной дозой на кожу подопытного животного; необработанные участки кожи подопытного животного служат в качестве контроля. Степень раздражения/разъедания кожи фиксируют и оценивают через определенные промежутки времени и подробно описывают их для обеспечения полной оценки эффектов. Продолжительность исследования должна быть достаточной для оценки обратимости или необратимости наблюдаемых эффектов.

5.2 Животных, у которых на любом этапе испытания сохраняются признаки сильного дистресса и/или боли, следует умертвить гуманным способом, а исследуемое химическое вещество - оценить соответствующим образом. Критерии для принятия решения об умерщвлении агонизирующих или тяжело страдающих животных приведены в документе <2>.

--------------------------------

<2> См. [2]

Предпочтительным лабораторным животным является кролик-альбинос. Используют здоровых, молодых, половозрелых кроликов. При использовании животных других видов должно быть предоставлено обоснование.

Приблизительно за 24 ч до начала испытания шерсть должна быть тщательно выстрижена со спинной части тела животного. Шерсть следует удалять осторожно, чтобы не повредить кожу животного. Испытанию подвергают только животных со здоровой неповрежденной кожей. Некоторые виды кроликов в определенное время года имеют плотные клочки шерсти. На такие области нельзя накладывать вещество.

Каждое животное содержат отдельно. Температура в помещении для подопытных животных (кроликов) должна составлять (20 +/- 3) °C. Относительная влажность должна быть не менее 30% и не превышать 70%, за исключением случаев уборки помещения, оптимальное значение влажности - от 50% до 60%. Освещение должно быть искусственным с чередованием света (12 ч) и темноты (12 ч). Для кормления можно использовать обычные лабораторные рационы с неограниченным доступом к питьевой воде.

7.1.1 Исследуемое вещество наносят на небольшой участок (приблизительно 6 см²) кожи и покрывают марлевой салфеткой, которую фиксируют пластырем, не вызывающим раздражения.

Если прямое нанесение невозможно (например, в случае жидкостей или некоторых паст), исследуемое вещество сначала наносят на марлевую салфетку и затем прикладывают к коже. Салфетка должна свободно удерживаться в контакте с кожей с использованием соответствующей полуокклюзионной повязки в течение всего периода воздействия. При нанесении исследуемого химического вещества на салфетку ее следует закрепить на коже таким образом, чтобы обеспечить хороший контакт и равномерное распределение вещества по поверхности кожи. Следует обеспечить невозможность доступа животного к повязке, проглатывания или вдыхания исследуемого химического вещества.

7.1.2 Жидкие исследуемые химические вещества обычно используют в неразбавленном виде. При испытании твердых веществ (которые, при необходимости, могут быть измельчены) в исследуемое вещество должно быть добавлено небольшое количество воды (или, при необходимости, другого подходящего растворителя), достаточное для обеспечения надежного контакта с кожей. При использовании растворителей, кроме воды, их потенциальное раздражающее действие на кожу (при наличии) должно быть минимальным.

7.1.3 По окончании периода воздействия (обычно 4 ч) остатки исследуемого вещества удаляют водой или подходящим растворителем, не задевая раздраженной поверхности и не повреждая целостности эпидермиса.

На область аппликации наносят 0,5 см³ жидкости или 0,5 г твердого вещества или пасты.

7.3 Предварительное испытание (испытание раздражения/разъедания кожи in vivo с использованием одного животного)

7.3.1 Если исследуемое химическое вещество было признано разъедающим, раздражающим или не классифицированным на основании совокупности данных или результатов предыдущих исследований in vitro, проведение дальнейших испытаний in vivo обычно не требуется. Однако в тех случаях когда получение дополнительных данных считают обоснованным, выполняют предварительное испытание in vivo с использованием одного животного следующим способом. На кожу животного наносят последовательно до трех проб (патч-тестов). Первую пробу удаляют через 3 мин. Если не наблюдают серьезной кожной реакции, на другой участок кожи наносят вторую пробу (патч-тест) и удаляют ее через 1 ч. Если наблюдения на этом этапе показывают, что гуманным может быть воздействие продолжительностью до 4 ч, то наносят третью пробу (патч-тест) на отдельный участок, удаляют через 4 ч и оценивают реакцию.

7.3.2 Если наблюдают появление разъедания после любого из трех последовательных воздействий, испытание немедленно прекращают. Если разъедающего эффекта не наблюдают после удаления последней пробы, животное наблюдают в течение 14 дней, если разъедание не проявится раньше.

7.3.3 В тех случаях когда исследуемое вещество предположительно не вызывает разъедания, но может вызвать раздражение, одному животному наносят одну пробу на 4 ч.

7.4 Контрольное испытание (испытание раздражения кожи in vivo с использованием дополнительных животных)

Если в предварительном испытании не наблюдали разъедающего эффекта, следует подтвердить раздражающее воздействие вещества или его отсутствие, используя не более двух дополнительных животных, каждому из которых наносят одну пробу на период воздействия 4 ч. Если в предварительном испытании наблюдали раздражающее действие, следует провести подтверждающее испытание последовательным способом или путем одновременного воздействия на двух дополнительных животных. В исключительном случае, когда предварительное испытание не проводят, два или три животных могут быть обработаны путем однократного нанесения пробы, которую удаляют через 4 ч. Если при использовании двух животных оба демонстрируют одинаковую ответную реакцию, дальнейшее испытание не требуется. В противном случае проверяют также третье животное. Сомнительные ответные реакции могут потребовать оценки с использованием дополнительных животных.

Продолжительность периода наблюдений должна быть достаточной для того, чтобы в полной мере оценить обратимость наблюдаемых эффектов. Однако эксперимент должен быть прекращен, если у животного наблюдают продолжительные признаки сильной боли или дистресса. Для определения обратимости реакций животные должны быть под наблюдением в течение 14 дней после удаления пробы. При обнаружении обратимости раньше 14 дней эксперимент прекращают в этот момент.

7.6.1 Все животные сразу после удаления пробы должны быть проверены на наличие признаков эритемы и отека. Реакции оценивают через 60 мин, а далее через 24, 48 и 72 ч после удаления пробы. В предварительном испытании на одном животном область аппликации также проверяют сразу после удаления пробы. Кожные реакции оценивают и классифицируют в соответствии с таблицей 1. При наличии повреждения кожи, которое через 72 ч нельзя идентифицировать как раздражение или разъедание, для определения обратимости данного эффекта может потребоваться наблюдение вплоть до 14 дня. В дополнение к наблюдению за раздражением кожи должны быть полностью описаны и зарегистрированы все местные токсические эффекты, такие как обезжиривание кожи или любые системные неблагоприятные эффекты (например, влияние на клинические признаки токсичности и изменение массы тела). Для уточнения сомнительных результатов проводят гистопатологическое исследование.

7.6.2 Оценка кожных реакций обычно субъективна. Для обеспечения гармонизации оценки реакции кожи и оказания помощи испытательным лабораториям персонал, участвующий в проведении наблюдений и интерпретации их результатов, должен пройти соответствующую подготовку и обучение используемой системе оценки (см. таблицу 1). Поясняющее руководство для оценки раздражения и других повреждений кожи приведено в нормативном документе <1>.

--------------------------------

<1> См. [3].

Результаты исследования в итоговом отчете должны быть обобщены в виде таблицы и охватывать все элементы, приведенные в 7.2.

8.1.1 При оценке раздражения кожи следует определить характер и тяжесть поражений, а также их обратимость или отсутствие обратимости. Индивидуальная реакция не является абсолютным стандартом (критерием) проявления раздражающих свойств вещества, поэтому также должны быть оценены и другие эффекты от его воздействия. На самом деле индивидуальные реакции следует рассматривать как опорные характеристики, которые необходимо учитывать в сочетании с результатами всех других наблюдений, полученных в данном исследовании.

8.1.2 При оценке раздражающих эффектов следует учитывать обратимость поражений кожи. Когда реакции кожи такие, как алопеция, гиперкератоз, гиперплазия и шелушение, сохраняются до конца 14-дневного срока наблюдения, исследуемое химическое вещество должно быть признано раздражающим.

Протокол испытаний должен содержать следующую информацию:

Логическое обоснование проведения испытания in vivo:

- анализ весомости доказательств существующих данных, включая результаты проведения последовательной стратегии испытания в соответствии с ГОСТ 34568;

- описание соответствующих данных, полученных в ходе проведенных ранее исследований;

- данные, полученные на каждом этапе стратегии проведения испытания;

- описание проведенных исследований in vitro, включая детали исследований, результаты, полученные с исследуемыми/контрольными веществами;

- анализ весомости доказательств для необходимости проведения испытания in vivo.

- однокомпонентное вещество: химическое идентификационные данные, такие как наименование по IUPAC или CAS, номер CAS, код SMILES или InChl, структурная формула, степень чистоты, химическая идентификация примесей в зависимости от требований и возможности определения и т.д.;

- многокомпонентное вещество, смесь и вещества неизвестного или переменного состава, сложные продукты реакции или биологические материалы характеризуют, насколько это возможно, химической идентификацией (см. выше), количественным присутствием и соответствующими физико-химическими свойствами компонентов;

- внешний вид, растворимость в воде и соответствующие дополнительные физико-химические свойства;

- источник, номер партии (при наличии);

- обработка исследуемого химического вещества/контрольного вещества перед испытанием, при необходимости (например, нагревание, измельчение);

- стабильность исследуемого химического вещества, срок хранения или дата повторного анализа (если известна);

- условия хранения.

- идентификационные данные, концентрация (при необходимости), используемый объем;

- обоснование выбора растворителя.

- используемый вид/линия, обоснование использования животных, если это не кролики альбиносы;

- число животных каждого пола;

- масса тела каждого животного в начале и конце испытания;

- возраст в начале испытания;

- источник животных, условия содержания, диета и т.д.

- способ подготовки места нанесения пробы;

- описание материала, используемого для нанесения пробы, и способ нанесения пробы;

- подробное описание подготовки исследуемого вещества, его нанесения и удаления.

- сбор и занесение в таблицу данных о проявлении у каждого животного раздражающих/разъедающих реакций на каждой отмечаемой временной точке;

- описания всех наблюдаемых поражений;

- подробное описание природы и степени раздражения или разъедания (коррозии), а также любых гистопатологических наблюдений;

- описание других негативных местных (например, обезжиривание кожи) и системных эффектов в дополнение к раздражению или разъеданию (коррозии) кожи.