"ГОСТ 33634-2015. Межгосударственный стандарт. Продукты пищевые, продовольственное сырье. Иммуноферментный метод определения остаточного содержания антибиотиков фторхинолонового ряда"
(введен в действие Приказом Росстандарта от 18.01.2016 N 6-ст)

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 октября 2015 г. N 81-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 января 2016 г. N 6-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33634-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

Настоящий стандарт распространяется на мясо, мясо птицы, яйца, яичный меланж, яичный порошок, молоко и устанавливает иммуноферментный метод определения остаточного содержания антибиотиков фторхинолонового ряда (энрофлоксацина, ципрофлоксацина, норфлоксацина и офлоксацина) в диапазоне измерений от 5 до 1280 мкг/кг.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 <1> Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

--------------------------------

<1> В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 245-76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный. Технические условия

ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2652-78 Реактивы. Калия бихромат технический. Технические условия

ГОСТ 4172-76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный. Технические условия

ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-6-2003 <2> Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

--------------------------------

<2> В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 7269-79 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

ГОСТ 29245-91 Консервы молочные. Методы определения физических и органолептических показателей

ГОСТ 31467-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю "Национальные стандарты", составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3.1 В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1.1 тест-система: Набор (комплект) специально подобранных реагентов (реактивов) и составных частей, предназначенный для определения одного или нескольких конкретных веществ.

3.1.2 вспомогательный раствор: Раствор, приготовляемый заблаговременно и необходимый для приготовления других типов растворов.

3.1.3 рабочий раствор: Раствор одного или нескольких реактивов, приготовляемый непосредственно перед использованием и необходимый для выполнения процедуры анализа.

3.2 В настоящем стандарте применены следующие сокращения:

ИФА - иммуноферментный анализ;

ОП - оптическая плотность;

АГ - антиген;

АТ - антитела;

ФК - ферментный конъюгат;

П - относительное поглощение.

4.1 Иммуноферментный метод основан на измерении содержания фторхинолонов в растворах экстрактов исследуемых проб с помощью непрямого твердофазного конкурентного ИФА.

4.2 Непрямой твердофазный конкурентный ИФА основан на способности антибиотиков фторхинолонового ряда взаимодействовать со специфичными АТ, полученными к энрофлоксацину, в условиях конкуренции с белковым конъюгатом энрофлоксацина, нанесенным на поверхность лунок планшета, - твердофазным АГ.

4.3 Связавшиеся с твердой фазой АТ взаимодействуют с вторичными антивидовыми АТ, меченными пероксидазой хрена, которые выявляют путем измерения интенсивности окрашивания продукта реакции окисления 3,3',5,5'-тетраметилбензидина (раствор N 11, см. приложение А) перекисью водорода.

Аналитический сигнал (регистрируемое значение ОП), характеризующий степень взаимодействия АТ с АГ, обратно пропорционален массовой концентрации фторхинолонов в исследуемом растворе.

5.1 Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает определение содержания антибиотиков фторхинолонового ряда с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата k = 2, указанной в таблице 1.

5.2 Специфичность АТ, применяемых для определения содержания фторхинолонов, выраженная в коэффициентах перекрестного реагирования, представлена в таблице 2.

6.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

6.2 Помещения, в которых проводится анализ и подготовка проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией, и соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и электробезопасности по ГОСТ 12.1.019.

6.3 К выполнению измерений допускаются лица, владеющие техникой ИФА и изучившие инструкцию по применению тест-системы и инструкции по эксплуатации используемых приборов.

6.4 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

7.1 При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, аппаратуру, материалы и посуду:

- весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с пределом допускаемой абсолютной погрешности +/- 0,05 г;

- весы аналитические с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более +/- 0,1 мг;

- калькулятор любого типа с логарифмической функцией;

- pH-метр любой марки, позволяющий проводить измерения в диапазоне от 3 до 10 ед. pH с погрешностью +/- 0,05 ед. pH;

- фотометр вертикального типа фотометрирования с диапазоном измерений ОП от 0 до 3 в комплекте с интерференционными светофильтрами для длин волн 450 и 620 нм;

- измельчитель-гомогенизатор лабораторный;

- морозильную камеру любого типа, обеспечивающую среднюю температуру в холодильной камере не выше минус 20 °C;

- роторный испаритель любого типа или устройство для испарения экстрактов, термостатируемый нагревательный модуль с системой отдувки растворителей инертным газом;

- термостат любого типа, поддерживающий температуру (37 +/- 1) °C;

- холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от 0 °C до 8 °C;

- центрифугу с бакет-ротором и адаптером для пробирок вместимостью 15 см³, частотой вращения не менее 4000 об/мин;

- шейкер вортексного типа, с вставкой для одной пробирки и диапазоном скорости от 150 до 2500 об/мин;

- шейкер переворачивающий вертикального вращения 360° в одной плоскости с адаптером для пробирок и диапазоном скорости от 20 до 100 об/мин;

- шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий поддержание температуры не менее (95 +/- 5) °C;

- бумагу масштабно-координатную по ГОСТ 334, марки Н-1;

- бумагу фильтровальную по ГОСТ 12026;

- колбы 1-10(100, 1000)-2 по ГОСТ 1770;

- колбу типа Кн-1-50-24/29 ТС по ГОСТ 25336;

- пипетки многоканальные переменной вместимости 0,03 - 0,3 см³, с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более +/- 1,0%;

- пипетки одноканальные переменной вместимости 20 - 100 мм³, 200 - 1000 мм³, 500 - 5000 мм³ с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более +/- 1%;

- пробирки полипропиленовые вместимостью 15 см³ с завинчивающимися крышками;

- пробирки типа П-1-10-0,1 ХС по ГОСТ 25336;

- пробирки типа "Эппендорф" вместимостью 1,5 см³;

- цилиндры 1(2,3)-100(250)-1 по ГОСТ 1770.

7.2 При выполнении измерений применяют следующие реактивы:

- ацетонитрил для хроматографии, о.с.ч., с массовой долей основного вещества не менее 99,9%;

- воду дистиллированную по ГОСТ 6709;

- гексан с содержанием основного вещества не менее 98%, х.ч.;

- дихлорметан для газовой хроматографии с массовой долей основного вещества не менее 99,9%;

- калия бихромат по ГОСТ 2652;

- кислоту ортофосфорную по ГОСТ 6552, концентрированную, х.ч.;

- кислоту серную по ГОСТ 4204, концентрированную;

- натрия гидроксид по ГОСТ 4328, х.ч.;

- натрия гидрофосфат безводный, х.ч., по ГОСТ 4172;

- натрия дигидрофосфат 2-водный, ч.д.а., по ГОСТ 245;

- натрий хлористый по ГОСТ 4233, х.ч.;

- тест-систему для непрямого твердофазного конкурентного ИФА, укомплектованную в соответствии с приложением А.

8.1.1 При подготовке к проведению измерений лабораторную стеклянную посуду моют смесью водного раствора бихромата калия с концентрированной серной кислотой, многократно промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу.

8.1.2 Подготовку и проверку фотометра, pH-метра проводят в соответствии с руководствами по эксплуатации приборов.

8.2.1 Приготовление раствора фосфорной кислоты молярной концентрацией 1 моль/дм³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 50 см³ дистиллированной воды и осторожно приливают 12 см³ концентрированной фосфорной кислоты, доводят объем раствора дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и тщательно перемешивают.

Срок хранения раствора в вытяжном шкафу при комнатной температуре - не более 1 мес.

8.2.2 Приготовление фосфатного буферного раствора молярной концентрацией 0,067 моль/дм³ и pH 7,2

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ вносят 7,67 г безводного гидрофосфата натрия, 2,02 г 2-водного дигидрофосфата натрия и 8,7 г хлорида натрия, растворяют в 500 см³ дистиллированной воды. Измеряют pH, устанавливают его значение до 7,2 +/- 0,2, осторожно по каплям прибавляя раствор фосфорной кислоты (см. 8.2.1) и постоянно перемешивая. Затем объем в колбе доводят до метки дистиллированной водой.

Срок хранения раствора при температуре 4 °C - не более 1 мес.

8.2.3 Приготовление раствора гидроксида натрия молярной концентрацией 0,1 моль/дм³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0,4 г гидроксида натрия, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой.

Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 1 мес.

8.2.4 Приготовление рабочего буферного раствора

В мерную колбу вместимостью 10 см³ приливают до метки раствор N 10 (см. приложение А), добавляют 28 мм³ раствора N 13 (см. приложение А), перемешивают и закрывают притертой пробкой.

Используют свежеприготовленный раствор.

8.2.5 Приготовление смеси ацетонитрила и раствора гидроксида натрия молярной концентрацией 0,1 моль/дм³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 90 см³ ацетонитрила и доводят до метки раствором гидроксида натрия (см. 8.2.3). Колбу закрывают пробкой и тщательно перемешивают.

Срок хранения раствора при комнатной температуре в вытяжном шкафу - 2 сут.

8.2.6 Приготовление рабочих градуировочных растворов К₀ - К₅

Для приготовления рабочего разведения градуировочных растворов К₀ - К₅ в пробирки типа "Эппендорф", маркированные К₀, К₁, К₂, К₃, К₄ и К₅, вносят по 0,27 см³ рабочего буферного раствора (см. 8.2.4) и по 0,03 см³ реактивов N 3 - N 8 (см. приложение А), соответственно маркировке. Перемешивают, в результате получают растворы со следующими концентрациями энрофлоксацина: К₀ - 0 мкг/см³; К₁ - 0,5 мкг/см³; К₂ - 2,0 мкг/см³; К₃ - 8,0 мкг/см³; К₄ - 32,0 мкг/см³; К₅ - 128,0 мкг/см³.

Используют свежеприготовленные растворы.

Концентрированные градуировочные растворы после вскрытия флаконов хранят при температуре от 2 °C до 8 °C в течение всего срока годности набора.

8.2.7 Приготовление рабочего раствора буфера для промывки

В колбу вместимостью 50 см³ вносят 47,5 см³ дистиллированной воды, добавляют 2,5 см³ реактива N 2 (см. приложение А), перемешивают.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 8 °C не более - 1 мес.

8.2.8 Приготовление рабочего раствора ферментного конъюгата

В стеклянную пробирку вносят 2,25 см³ реактива N 10 (см. приложение А) и 0,25 см³ реактива N 9 (см. приложение А), перемешивают.

Используют свежеприготовленный раствор.

8.3.1 Отбор проб мяса и мясных продуктов - по ГОСТ 7269.

8.3.2 Отбор проб мяса птицы - по ГОСТ 31467.

8.3.3 Отбор проб молока - по ГОСТ 26809.

8.3.4 Отбор проб яиц, яичного меланжа и яичного порошка проводят по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт.

8.3.5 Срок хранения отобранных проб при температуре от 2 °C до 8 °C - 2 сут. При отсутствии возможности исследования проб в течение двух суток они должны быть заморожены при температуре минус 20 °C со сроком хранения не более двух месяцев.

8.4.1 Подготовка проб мяса, мяса птицы, яиц, яичного меланжа, яичного порошка

Яйца отделяют от скорлупы и перемешивают на гомогенизаторе. Яичный меланж, яичный порошок тщательно перемешивают.

Мышечную ткань предварительно очищают от жира, грубой соединительной ткани и измельчают на гомогенизаторе. Далее обработку пробы проводят в соответствии с рисунком 1.

8.4.2 Подготовка проб молока

Отобранную пробу молока перед анализом тщательно перемешивают.

В полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см³ вносят 2 см³ пробы, 8 см³ смеси ацетонитрила и раствора натрия гидроксида (см. 8.2.5), гомогенизируют в течение 2 мин, после чего перемешивают на шейкере вортексного типа в течение 10 мин. Далее процедуру экстракции и обезжиривания пробы проводят согласно рисунку 1.

Сухие молочные продукты восстанавливают по ГОСТ 29245 (пункт 3.4).

9.1.1 При проведении испытаний следует использовать реагенты и компоненты, входящие в один и тот же набор (тест-систему). Разбавление или замена реагентов из набора (тест-системы) другой серии не допускается.

9.1.2 Наборы (тест-системы) следует хранить при температуре от 2 °C до 8 °C в пределах срока хранения.

9.1.3 Окрашивание раствора субстрата N 11 (см. приложение А) является признаком его порчи и делает невозможным его применение для анализа.

9.2.1 Перед использованием тест-систему вынимают из холодильника и выдерживают при комнатной температуре не менее 30 мин, после чего аккуратно встряхивают каждый флакон. Реактив N 2 (см. приложение А) необходимо прогреть в сушильном шкафу при температуре 37 °C до полного растворения кристаллов солей и тщательно перемешать.

9.2.2 После использования, реагенты тест-системы сразу помещают в холодильник.

9.2.3 На всех стадиях необходимо избегать воздействия прямого солнечного света.

9.2.4 Для каждого реактива и раствора используют отдельные съемные наконечники автоматических пипеток. Внесение растворов в лунки проводят осторожно, не касаясь наконечниками их дна и стенок.

9.2.5 Каждый исследуемый рабочий раствор экстрактов испытуемых проб анализируют в двух повторностях.

Примечание - Далее приведены расходы реактивов на два стрипа <1>, что достаточно для анализа двух исследуемых проб. Для другого числа проб количество используемых стрипов и смешиваемых объемов реагентов изменяют в соответствии с количеством исследуемых проб.

--------------------------------

<1> Стрип - полоска из восьми лунок.

9.3.1 Из планшета извлекают необходимое число стрипов. Неиспользованные стрипы хранят в закрытом фольгированном полиэтиленовом пакете с зип-локом <2> при температуре от 2 °C до 8 °C в течение срока годности тест-системы.

--------------------------------

<2> Зип-лок - замок, обеспечивающий герметизацию пакета.

9.3.2 В лунки планшета вносят по 0,05 см³ рабочих градуировочных растворов (8.2.6) и по 0,05 см³ растворов экстрактов испытуемых проб.

Каждый раствор вносят в двойной повторности (лунки-дубли).

Внесение растворов проводят согласно приложению Б.

Далее в каждую лунку вносят по 0,05 см³ раствора N 1 (см. приложение А). Стрипы заклеивают пленкой или закрывают крышкой, инкубируют в термостате при температуре 37 °C в течение 1 ч, после чего содержимое лунок сливают.

9.3.3 В лунки планшета вносят по 0,2 см³ раствора буфера для промывки (см. 8.2.7), оставляют на 1 - 2 мин и сливают. Процедуру промывки повторяют еще три раза. Остатки жидкости интенсивно стряхивают на чистую фильтровальную бумагу.

9.3.4 В лунки планшета вносят по 0,1 см³ раствора ферментного конъюгата (см. 8.2.8), заклеивают пленкой или закрывают крышкой, инкубируют в термостате при температуре 37 °C 1 ч и отмывают, как указано в 9.3.3.

9.3.5 В лунки планшета вносят по 0,1 см³ раствора N 11 (см. приложение А) и инкубируют при комнатной температуре в темноте в течение 15 мин. Добавляют 0,1 см³ раствора N 12 (см. приложение А) и аккуратно перемешивают легким постукиванием по ребру планшета. Помещают планшет в вертикальный фотометр и измеряют значения ОП при длине волны 450 нм.

Запись результатов проводят согласно приложению В.

10.1 По показателям ОП в лунках-дублях находят среднеарифметические значения. Разность значений ОП для них в процентах от среднего не должна превышать 10.

Связывание АТ (или относительное поглощение) П, %, рассчитывают по формуле

где ОП_п - среднее значение ОП, измеренной в лунках с градуировочными растворами энрофлоксацина К₁ - К₅ (см. 8.2.6) или рабочими растворами экстрактов испытуемых проб;

ОП_к - среднее значение ОП, измеренной в лунках с градуировочным раствором К₀ (см. 8.2.6).

По значениям процентов связывания, вычисленным для градуировочных растворов и соответствующим известным значениям массовой концентрации энрофлоксацина (мкг/дм³), строят градуировочный график в полулогарифмической системе координат.

10.2 Для построения градуировочного графика используют масштабно-координатную бумагу. На ось абсцисс наносят значения логарифмов концентраций энрофлоксацина в рабочих разведениях градуировочных растворов (см. 8.2.6). По оси ординат откладывают значения процентов связывания, рассчитанные для массовых концентраций по формуле (1), и строят градуировочный график с использованием линейной зависимости.

10.3 С помощью градуировочного графика по значению процента связывания, полученного для рабочих растворов экстрактов испытуемых проб, находят логарифм массовой концентрации фторхинолонов. С помощью калькулятора вычисляют его обратное значение (антилогарифм), соответствующее массовой концентрации определяемого фторхинолона в растворе экстракта. После чего рассчитывают содержание фторхинолонов в пробе C, мкг/дм³ (мкг/кг), по формуле

где c - массовая концентрация фторхинолонов в рабочем растворе экстракта испытуемой пробы, определяемая по градуировочному графику, мкг/дм³;

K - коэффициент пересчета мкг/дм³ в рабочем растворе экстракта испытуемой пробы в мкг/дм³ (мкг/кг), учитывающий как разведение, так и степень извлечения фторхинолонов и равный 10.

Результаты измерений массовой концентрации (содержания) фторхинолонов C, мкг/дм³ (мкг/кг), округляют до целого числа.

За окончательный результат принимают среднеарифметическое двух измерений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

где C₁ и C₂ - результаты определений содержания фторхинолонов, полученные в условиях повторяемости, мкг/кг;

C_ср - среднеарифметическое результатов двух определений содержания фторхинолонов в пробе, мкг/кг;

r - предел повторяемости, %, (см. таблицу 1).

10.4 Допускается использование программного обеспечения, позволяющего определять содержание фторхинолонов в пробе по средним значениям ОП, измеренным в лунках с градуировочными растворами и рабочими растворами экстрактов испытуемых проб.

Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходимости) и воспроизводимости, проводят с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6 (раздел 5).

Относительное расхождение между результатами, полученными в разных лабораториях, не должно превышать относительного стандартного отклонения воспроизводимости (см. таблицу 1).

--------------------------------

<1> Данный комплект реагентов является рекомендуемым и приведен для удобства пользователей настоящего стандарта.

В комплектацию тест-системы входят:

Планшет 96-луночный полистироловый стрипованный для иммунологических исследований, сенсибилизированный антигеном;

Пакет полиэтиленовый фольгированный с зип-локом.

Пленка полиэтиленовая самоклеющаяся для заклеивания планшетов.

Растворы:

N 1 - АТ - антитела к энрофлоксацину;

N 2 - раствор фосфатного буфера для промывки с добавлением твина-20 (20-кратный концентрат), pH (7,0 - 7,4);

N 3 - буфер для экстракции;

N 4 - К₁, N 5 - К₂, N 6 - К₃, N 7 - К₄, N 8 - К₅ - градуировочные растворы с известным содержанием (мкг/дм³) энрофлоксацина;

N 9 - ФК - конъюгат антител против IgG (H + L) кролика с пероксидазой хрена (10-кратный концентрат);

N 10 - реакционный буферный раствор с добавлением твина-20 и бычьего сывороточного альбумина, pH 7,0 - 7,4, стерильный;

N 11 - раствор субстрата на основе 3,3',5,5'-тетраметилбензидина с добавлением перекиси водорода;

N 12 - стоп-реагент, раствор серной кислоты молярной концентрацией 0,5 моль/дм³;

N 13 - натрия ацетат, раствор молярной концентрацией 1,5 моль/дм³.

Внесение реагентов следует проводить согласно следующей схеме: