"ГОСТ 32711-2014. Межгосударственный стандарт. Продукты переработки фруктов и овощей. Определение общего диоксида серы ферментативным методом"
(введен в действие Приказом Росстандарта от 01.08.2014 N 852-ст)

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

1 ПОДГОТОВЛЕН Некоммерческой организацией "Российский союз производителей соков" (РСПС) при участии открытого акционерного общества "Вимм-Биль-Данн" (ОАО "Вимм-Биль-Данн")

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 июня 2014 г. N 45-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 1 августа 2014 г. N 852-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32711-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2016 г.

5 В настоящем стандарте учтены основные положения метода NMKL-135:1990 "Метод ферментативного определения сульфитов (общего диоксида серы)" (Скандинавский комитет по анализу пищевых продуктов) [NMKL-135:1990 "Sulphite. Enzymatic determination in foods" (Nordic Committee on Food Analysis - NMKL)]

6 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 54894-2012

7 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

Настоящий стандарт распространяется на продукты переработки фруктов и овощей в части: фруктовых и овощных соков, нектаров, сокосодержащих напитков, фруктовых и овощных концентрированных соков, пюре и концентрированных пюре, морсов, концентрированных морсов, соковой продукции из фруктов и овощей обогащенной и для детского питания (далее - соковая продукция), компотов, киселей, в т.ч. из сушеных фруктов (сухофруктов), джемов, повидла, варенья, сушеных фруктов и устанавливает метод ферментативного определения массовой концентрации или массовой доли общего диоксида серы.

Диапазон измерений массовой концентрации (массовой доли) общего диоксида серы - от 10 до 500 мг/дм³ (млн^-1).

Предел обнаружения метода - 3 мг/дм³ (млн^-1).

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ ИСО 3696-2013 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний <1>

--------------------------------

<1> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52501-2005 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

ГОСТ ИСО 5725-1-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ ИСО 5725-2-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ ИСО 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты <2>

--------------------------------

<2> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

ГОСТ 195-77 Реактивы. Натрий сернистокислый. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4201-79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 10652-73 Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты, 2-водная (трилон Б). Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 25794.1-83 Реактивы. Методы приготовления титрованных растворов для кислотно-основного титрования

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 28311-89 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31643-2012 Продукция соковая. Определение аскорбиновой кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3.1 В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1.1 связанная форма диоксида серы: Диоксид серы, химически связанный с органическими соединениями и находящийся в растворенной форме.

3.1.2 общий диоксид серы: Сумма свободного диоксида серы (SO₂) и связанного диоксида серы в пересчете на SO₂.

3.2 Сокращения:

3.2.1 Е (единица активности) - количество ферментов, которое является катализатором превращения (образования) 1·10^-6 моля вещества в минуту при температуре 25 °C.

3.2.2 НАД (NAD) - никотинамидадениндинуклеотид, окисленная форма.

3.2.3 НАДH (NADH) - никотинамидадениндинуклеотид, восстановленная форма.

3.2.4 НАДH-пероксидаза (NADH-POD) - никотинамидадениндинуклеотид-пероксидаза.

3.2.5 Аскорбатоксидаза (AO) - фермент, катализирующий реакцию окисления аскорбиновой кислоты в присутствии растворенного кислорода.

3.2.6 Сульфитоксидаза (SO₂-OD) - фермент, катализирующий реакцию окисления сульфита до сульфата в присутствии растворенного кислорода.

Метод основан на проведении нижеприведенных ферментативных реакций:

Ион сульфита в присутствии растворенного кислорода окисляется ферментом сульфитоксидазой (SO₂-OD) до сульфата:

Пероксид водорода восстанавливается под действием фермента НАДH-пероксидазы (NADH-POD) при взаимодействии с никотинамидадениндинуклеотидом (NADH):

Массовая концентрация общего диоксида серы эквивалентна количеству израсходованного на окисление пероксида водорода НАДH, что определяется по изменению оптической плотности, измеренной при длинах волн: 334, 340 или 365 нм.

5.1 Спектрофотометр, позволяющий проводить измерения оптической плотности при длине волны 340 нм, или фотометр, оснащенный ртутной лампой, позволяющий проводить измерения при длинах волн 334 и 365 нм, с допустимой относительной погрешностью измерения коэффициента пропускания +/- 1%.

5.2 Кюветы кварцевые или полимерные для спектрофотометрии с длиной оптического пути от 5 до 20 мм и вместимостью от 2 до 10 см³.

5.3 Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, ч.д.а.

5.4 Гидрокарбонат натрия по ГОСТ 4201, NaHCO₃, ч.д.а.

5.5 Никотинамидадениндинуклеотид динатриевая соль, Na₂-НАДH, массовой долей основного вещества не менее 95%.

5.6 НАДH-пероксидаза (NADH-POD), лиофилизированный препарат с активностью не менее 1 Е, CAS <*> N 9032-24-0.

5.7 Сульфитоксидаза (SO₂-OD), лиофилизированный препарат с активностью не менее 1 Е, CAS <*> N 9029-38-3.

5.8 Аскорбатоксидаза (AO), лиофилизированный препарат с активностью 20 Е, CAS <*> N 9029-44-1.

--------------------------------

<*> CAS - уникальный численный идентификатор веществ по реестру Химической реферативной службы (Chemical Abstracts Service - CAS).

5.9 Сульфит натрия безводный по ГОСТ 195, ч.д.а.

5.10 Сульфат аммония по ГОСТ 3769, (NH₄)₂SO₄, ч.д.а.

5.11 Этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусная кислота, динатриевая соль (Na₂-ЭДТА, Трилон Б) по ГОСТ 10652, ч.д.а.

5.12 Триэтаноламин, массовой долей основного вещества не менее 98%.

5.13 Набор реагентов для ферментативного определения диоксида серы <**>, включающий:

реагент 1 - 30 см³ триэтаноламинового буферного раствора с pH 8,0;

реагент 2 - 30 таблеток сухого препарата с содержанием 0,4 мг НАДH;

реагент 3 - 0,3 см³ суспензии НАДH-пероксидазы (NADH-POD) активностью 3 Е;

реагент 4 - 1,6 см³ суспензии сульфитоксидазы (SO₂-OD) активностью 2,5 Е.

--------------------------------

<**> Набор реагентов для определения общего диоксида серы фирмы R-Biopharm AG. Данная информация не является рекламой указанного набора и не исключает возможность применения наборов реагентов других фирм или растворов реактивов, приготовленных в лабораторных условиях (см. 7.2).

5.14 Иономер или pH-метр в комплекте с комбинированным микроэлектродом для измерений в растворах объемом не менее 2 см³, с погрешностью измерений не более 0,05 ед. pH.

5.15 Весы лабораторные специального (1-го) класса точности по ГОСТ OIML R 76-1, с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 0,01 мг.

5.16 Измельчитель лабораторный (гомогенизатор), угловой скоростью вращения от 3000 до 5000 мин^-1, обеспечивающий тонкое измельчение, в т.ч. сухофруктов до однородного состояния.

5.17 Пипетки градуированные 1-2-1-1, 1-2-1-2, 1-2-1-5, 1-2-1-10 и 1-2-1-25 по ГОСТ 29227 или дозаторы пипеточные по ГОСТ 28311 с аналогичными или изменяемыми объемами доз, относительной погрешностью дозирования +/- 1%.

5.18 Посуда мерная лабораторная стеклянная 2-го класса точности по ГОСТ 1770:

цилиндры 1-50-2 и 1-1000-2;

колбы мерные с притертой пробкой 2а-50-2, 2а-100-2 и 2а-1000-2;

пробирки стеклянные 1-10-0,1, 1-15-0,1 и 1-20-0,1.

5.19 Посуда лабораторная стеклянная по ГОСТ 25336:

воронки лабораторные;

стаканы вместимостью В-1-100 и Н-1-1000.

5.20 Фильтры мембранные с размером пор 0,20 или 0,45 мкм и диаметром 13 и 47 мм для фильтрования проб.

5.21 Центрифуга лабораторная, обеспечивающая скорость вращения не менее 4000 мин^-1 и ротором с соответствующим адаптером для пробирок.

5.22 Мешалка магнитная с угловой скоростью вращения от 400 до 1200 мин^-1.

5.23 Баня ультразвуковая лабораторная с рабочей частотой не менее 20 кГц и вместимостью не менее 1 дм³.

5.24 Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

5.25 Вода по ГОСТ ИСО 3696, не ниже 2-й степени чистоты.

5.26 Шпатели пластиковые или палочки стеклянные оплавленные длиной от 2 до 5 см для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.

5.27 Пробирки центрифужные из полимерного материала вместимостью 15 или 50 см³ с завинчивающимися крышками.

5.28 Поливинилполипирролидон низкомолекулярный.

5.29 Термометр жидкостной стеклянный по ГОСТ 28498, диапазоном измерений от 0 °C до 100 °C, ценой деления 1 °C.

5.30 Электроплитка лабораторная.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам, а также реактивов, посуды и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных.

Отбор проб проводят по ГОСТ 26313, подготовку по ГОСТ 26671.

6.1 Подготовка проб соковой продукции

6.1.1 Подготовку проб соковой продукции для измерений проводят в соответствии с ГОСТ 31643 (раздел 6.2).

Окрашенную соковую продукцию обесцвечивают путем добавления (0,15 +/- 0,05) г поливинилполипирролидона на каждые 2 см³ пробы, центрифугируют при скорости вращения 4000 мин^-1 в течение 10 мин и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм. Для определения используют прозрачный фильтрат.

6.1.2 При содержании в пробах соковой продукции аскорбиновой кислоты свыше 100 мг/дм³ проводят ее удаление.

Для этого в пробирку вместимостью 15 - 20 см³ помещают 2 см³ прозрачного фильтрата и доводят при перемешивании кислотность раствора до (5,5 +/- 0,5) ед. pH, регистрируя показания pH-метра, путем прибавления гидроксида натрия молярной концентрацией 2 моль/дм³.

При этом фиксируют суммарный объем израсходованной гидроокиси натрия для расчета величины фактора разбавления F при подготовке рабочего раствора пробы по 7.3.4.

Затем вносят в пробирку 0,1 см³ аскорбатоксидазы (см. 5.8), перемешивают и выдерживают в течение 10 мин.

6.2 Подготовка проб джемов, повидла, варенья, киселей, компотов

Измельчают в гомогенизаторе 100 г пробы в течение 30 с. В мерную колбу объемом 50 см³ помещают 5 г гомогенизированной пробы, взвешенной с точностью до 0,0001 г, добавляют около 40 см³ воды, закрывают мерную колбу и раствор инкубируют в течение 5 мин при температуре 60 °C, периодически помешивая. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры, доводят объем до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм. При содержании аскорбиновой кислоты в продукте более 100 мг/дм³ ее удаляют из пробы по 6.1.3.

6.3 Подготовка проб сушеных фруктов (сухофруктов)

Измельчают в гомогенизаторе 100 г пробы в течение 30 с. В мерную колбу объемом 100 см³ помещают 2 г гомогенизированной пробы и добавляют к ней 60 см³ воды температурой (60 +/- 5) °C. Закрывают мерную колбу и энергично встряхивают в течение 5 мин, выдерживают в течение 30 ч. Колбу охлаждают до комнатной температуры и доводят объем до метки водой.

Содержимое из колбы переносят в пробирку для центрифугирования, центрифугируют при скорости вращения 4000 мин^-1 в течение 10 мин.

Для определения используют прозрачный фильтрат. При необходимости полученный фильтрат разбавляют в соответствии с требованиями, указанными в таблице 1.

7.1 Подготовка растворов реактивов из готового набора реагентов

7.1.1 Подготовка реактива 1

В качестве реактива 1 используют реагент 1 из набора по 5.13 без разбавления. Перед проведением определения реагент 1 выдерживают при температуре (20 +/- 5) °C.

Срок хранения реактива 1 в холодильнике при температуре 4 °C - не более одного года.

7.1.2 Подготовка реактива 2 (НАДH)

Для приготовления реактива 2 растворяют одну таблетку реагента 2 (см. 5.12) в 1 см³ реактива 1.

Срок хранения реактива 2 в холодильнике при температуре 4 °C - не более семи дней.

7.1.3 Подготовка реактива 3 (НАДH-пероксидаза) и реактива 4 (сульфитоксидаза)

В качестве реактива 3 и реактива 4 используют реагенты 3 и 4 из набора по 5.13 без разбавления.

Срок хранения реактивов 3 и 4 в холодильнике при температуре 4 °C - не более одного года.

7.2 Подготовка растворов реактивов в лабораторных условиях

7.2.1 Приготовление раствора гидроксида натрия молярной концентрацией 0,1 моль/дм³

Раствор гидроксида натрия молярной концентрацией 0,1 моль/дм³ готовят по ГОСТ 25794.1.

7.2.2 Приготовление буферного раствора триэтаноламина молярной концентрацией 0,60 моль/дм³ и pH 8,0

Растворяют (5,57 +/- 0,1) г триэтаноламина в стакане в 40 см³ воды. Полученный раствор доводят при перемешивании до 8,0 ед. pH прибавлением раствора гидроксида натрия молярной концентрацией 0,1 моль/дм³, подготовленного по 7.2.1, регистрируя показания pH-метра. Раствор переносят в мерную колбу вместимостью 50 см³ и доводят его объем до метки водой.

Срок хранения раствора в холодильнике при температуре 4 °C - не более 28 дней.

7.2.3 Приготовление раствора восстановленного никотинамидадениндинуклеотида (НАДH) молярной концентрацией 7·10^-3 моль/дм³

Растворяют 0,025 г препарата НАДH-Na₂ (см. 5.5) и 0,050 г гидрокарбоната натрия в 5 см³ воды.

Срок хранения раствора в холодильнике при температуре 4 °C - не более 28 дней.

7.2.4 Приготовление суспензии НАДH-пероксидазы

Растворяют необходимое количество препарата НАДH-пероксидазы (см. 5.6) в растворе сульфата аммония молярной концентрацией 2 моль/дм³ для получения суспензии с активностью фермента НАДH-пероксидазы 15 Е в 1 см³.

Примечание - Необходимое количество препарата определяют в соответствии с его исходной активностью, которая указывается производителем в сопроводительной документации.

Срок хранения суспензии при температуре 4 °C - не более одного года.

7.2.5 Приготовление суспензии сульфитоксидазы

Растворяют необходимое количество препарата сульфитоксидазы (см. 5.7) в растворе сульфата аммония молярной концентрацией 2 моль/дм³ для получения суспензии с активностью фермента НАДH-пероксидазы 2,5 Е в 1 см³.

Примечание - Необходимое количество препарата определяют в соответствии с его исходной активностью, которая указывается производителем в сопроводительной документации.

Срок хранения суспензии в холодильнике при температуре 4 °C - не более одного года.

7.2.6 Приготовление раствора сульфата аммония (NH₄)₂SO₄ молярной концентрацией 2 моль/дм³

В мерной колбе вместимостью 500 см³ растворяют (132,0 +/- 0,1) г сульфата аммония в 200 см³ воды. После полного растворения сульфата аммония доводят объем раствора в колбе до метки водой и тщательно перемешивают.

Срок хранения раствора при температуре от 4 °C до 25 °C - не более 28 дней.

7.2.7 Подготовка контрольного раствора общего диоксида серы массовой концентрацией 300 мг/дм³

Взвешивают (0,0600 +/- 0,001) г сульфита натрия и (0,0370 +/- 0,001) г Na₂-ЭДТА, растворяют в стакане в воде, количественно переносят раствор в мерную колбу вместимостью 100 см³, доводят объем раствора в колбе до метки водой и перемешивают.

Раствор готовят непосредственно перед проведением измерений.

7.3 Приготовление рабочего раствора пробы

Для обеспечения достоверности результатов определения в кювете должно находиться от 0,3 до 30,0 мг общего диоксида серы. Для достижения этого условия пробу разбавляют водой в соответствии с требованиями, указанными в таблице 1 или в соответствии с инструкцией к набору реагентов для ферментативного анализа.

8.1 Условия проведения измерений

При подготовке к проведению и проведении измерений соблюдают следующие условия:

Помещение, в котором проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

8.2 Проведение измерений

В кювету спектрофотометра (см. 5.2) вносят реактивы 2, 3 и 4, воду и пробы в порядке и количествах, указанных в таблице 2.

9.1 Разность в оптической плотности растворов до и после обработки их ферментом, измеренная при длинах волн 334, 340 или 365 нм, пропорциональна массовой концентрации (массовой доле) общего диоксида серы.

Разность значений оптических плотностей вычисляют по формуле

где (A₁ - A₂)_проба - разность оптических плотностей рабочего раствора пробы, е.о.п.;

(A₁ - A₂)_{контроль} - разность оптических плотностей раствора холостой пробы, е.о.п.

Разность оптических плотностей должна находиться в интервале от 0,1 до 0,5 единиц оптической плотности (измерения при длине волны 365 нм) или от 0,1 до 0,8 единиц оптической плотности (измерения при длинах волн 334 и 340 нм). При превышении указанных значений разности оптических плотностей раствор пробы дополнительно разбавляют водой. При меньшей разности оптических плотностей (менее 0,1) объем пробы, дозируемый в кювету (см. 5.2), увеличивают, а объем воды, соответственно, уменьшают так, чтобы объем пробы в кювете оставался постоянным в соответствии требованиями, указанными в таблице 2.

9.2 Массовую концентрацию общего диоксида серы , мг/дм³ в рабочем растворе пробы, подготовленной по 6.1, вычисляют по формуле

где V - суммарный объем добавленных в кювету реагентов по таблице 2 (графы 2, 3), см³;

F - величина фактора разбавления;

M - молекулярная масса диоксида серы, M = 64,06 г/моль;

- разность оптических плотностей, е.о.п.;

- молярный коэффициент поглощения НАДФH, дм³·ммол^-1·см^-1:

- при длине волны 340 нм - 6,3,

- при длине волны 365 нм - 3,5 (ртутная лампа),

- при длине волны 334 нм - 6,18 (ртутная лампа);

d - толщина поглощающего слоя в кювете, см;

v - объем пробы, взятой для определения (см. таблицу 2), см³.

При толщине поглощающего слоя в кювете 1 см и объеме рабочего раствора пробы 0,10 см³ формула для вычисления массовой концентрации общего диоксида серы , мг/дм³, преобразуется следующим образом

9.3 Массовую долю общего диоксида серы , млн^-1, в рабочем растворе пробы, подготовленной по 6.2 и 6.3, вычисляют по формуле

где V_к - вместимость мерной колбы, использовавшейся при подготовке пробы, см³;

- массовая концентрация общего диоксида серы в растворе, вычисленная по формуле (2), мг/дм³;

m_нав - масса пробы, взятой для определения, г.

Все вычисления проводят с точностью до третьего десятичного знака.

Расхождение результатов между двумя параллельными определениями, выполненными в условиях повторяемости, не должно превышать предела повторяемости (сходимости) r, приведенного в таблице 3 при доверительной вероятности P = 0,95.

При соблюдении этого условия за окончательный результат определения принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, округленное до второго десятичного знака.

9.4 Дополнительно, для контроля качества реактивов и работы спектрофотометра, вместе с каждой серией (не менее шести) рабочих проб проводят определение массовой концентрации общего диоксида серы в контрольном растворе по 7.2.7.

Относительное отклонение измеренной величины массовой концентрации общего диоксида серы в контрольном растворе не должно превышать 5% от номинальной. В противном случае результаты измерения всей серии проб признаются неудовлетворительными.

9.5 Окончательный результат определения в документах, предусматривающих их использование, представляют согласно ГОСТ ИСО/МЭК 17025 с указанием метода измерения и настоящего стандарта в виде

где , - среднеарифметическое значение двух параллельных измерений массовой концентрации (массовой доли) общего диоксида серы в пробе, выполненных в условиях повторяемости, мг/дм³ (млн^-1);

- абсолютное значение показателя точности определения массовой концентрации (массовой доли) общего диоксида серы, вычисляемое по формулам:

где - границы относительной погрешности результатов измерений (см. таблицу 3), %.

Числовое значение результата определения должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение границы абсолютной погрешности. Значение границ абсолютной погрешности выражают числом, содержащим не более двух значащих цифр.

10.1 Контроль повторяемости результатов измерений

Контроль повторяемости результатов измерений массовой концентрации или массовой доли общего диоксида серы проводят при получении каждого результата путем сравнения расхождения между результатами двух параллельных определений с пределом повторяемости (сходимости), приведенным в таблице 3.

Повторяемость результатов признают удовлетворительной при условии

где C₁, C₂ - результаты параллельных измерений массовой концентрации общего диоксида серы в пробе, подготовленной по 6.1, мг/дм³;

X₁, X₂ - результаты параллельных измерений массовой доли общего диоксида серы в пробе, подготовленной по 6.2 и 6.3, млн^-1;

r_отн - значение предела повторяемости (см. таблицу 3), %.

При превышении предела повторяемости (сходимости) определение повторяют. При повторном превышении указанного предела выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

10.2 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

10.2.1 Проверку приемлемости результатов параллельных определений в условиях воспроизводимости проводят:

- при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

- проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях.

10.2.2 Для проведения проверки приемлемости результатов параллельных определений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует арбитражные пробы, оставленные на хранение.

Приемлемость результатов параллельных определений, полученных в двух лабораториях, оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью CD_0,95 по формулам:

где , - среднеарифметические значения массовой концентрации общего диоксида серы, полученные в первой и второй лабораториях, мг/дм³;

, - среднеарифметические значения массовой доли общего диоксида серы, полученные в первой и второй лабораториях, млн^-1.

CD_0,95 - значение критической разности, вычисляемое по формулам:

где 2,77 - коэффициент критического диапазона для двух параллельных определений, полученных в условиях воспроизводимости по ГОСТ ИСО 5725-6;

0,01 - множитель для перехода от процентов к абсолютным значениям;

- среднеарифметические значения массовой концентрации общего диоксида серы, полученные в первой и второй лабораториях, мг/дм³;

- среднеарифметические значения массовой доли общего диоксида серы, полученные в первой и второй лабораториях, млн^-1;

- показатель воспроизводимости, % (см. таблицу 3);

- показатель повторяемости, % (см. таблицу 3);

n - число параллельных определений.

10.2.3 Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата определений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-6 (пункт 5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ ИСО 5725-6 (пункт 5.3.4).

10.3 Оперативный контроль погрешности (точности) результатов измерений

Контроль погрешности (точности) результатов измерений осуществляют с использованием контрольного раствора диоксида серы приготовленного по 7.2.7 методом добавок.

Организацию и оценку результатов контроля осуществляют в соответствии с рекомендациями [1].

При проведении контроля пробу делят на две равные части. В одну из них добавляют контрольный раствор общего диоксида серы в таких объемах, чтобы добавка составляла от 50% до 150% исходного содержания компонента в пробе, но не превышала верхней границы диапазона определения массовой концентрации или массовой доли компонента с учетом границ погрешности определения (см. таблицу 3). В обеих частях пробы проводят определение в соответствии с требованиями настоящего стандарта.

Результаты контрольных определений признают удовлетворительными, если погрешность определения массовой концентрации (массовой доли) в добавке не превышает норматива контроля погрешности (точности), то есть выполняется условие

где , - среднеарифметические значения параллельных определений массовой концентрации (массовой доли) общего диоксида серы, в пробе с добавкой, мг/дм³ или млн^-1;

, - среднеарифметические значения параллельных определений массовой концентрации (массовой доли) общего диоксида серы в пробе без добавки, мг/дм³ или млн^-1;

C_доб или X_доб - величина добавки, мг/дм³ или млн^-1;

K_доб - норматив контроля погрешности, мг/дм³ или млн^-1.

При проведении внутрилабораторного контроля (P = 0,90) значение K_доб вычисляют по формулам:

где 0,84 - коэффициент, учитывающий вид контроля;

- границы относительной погрешности измерений массовой концентрации (массовой доли) общего диоксида серы (см. таблицу 3), %.

При проведении внешнего контроля (P = 0,95) значение K_доб вычисляют по формулам:

При превышении норматива контроля погрешности проводят повторные контрольные определения. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Периодичность контроля погрешности (точности) устанавливается самой лабораторией с учетом фактического состояния работ. При смене партий реактивов, экземпляров средств измерений, проведение оперативного контроля погрешности обязательно.

10.4 Контроль стабильности результатов измерений при реализации методики в лаборатории

Контроль стабильности результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ ИСО 5725-6, используя метод контроля стабильности стандартного отклонения промежуточной прецизионности по ГОСТ ИСО 5725-6 с применением контрольных карт Шухарта.

При неудовлетворительных результатах контроля: превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения - выясняют и устраняют причины этих отклонений.

Периодичность контроля и процедуры контроля стабильности результатов измерений регламентируют в руководстве по качеству лаборатории в соответствии с ГОСТ ИСО/МЭК 17025 (пункт 4.2).

11.1 Условия безопасного проведения работ

При работе с химическими реактивами следует соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005 и ГОСТ 12.1.007. При подготовке проб к измерению и выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила пожаровзрывобезопасности по ГОСТ 12.1.018, по электробезопасности - по ГОСТ 12.1.019 и инструкции по эксплуатации прибора.

11.2 Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений, обработке и оформлению результатов допускаются инженер-химик, техник или лаборант, имеющие высшее или среднее специальное образование, опыт работы в химической лаборатории. Первое применение метода в лаборатории следует проводить под руководством специалиста, владеющего теорией и имеющего практические навыки в области ферментативных методов анализа.