"ГОСТ 31486-2012. Межгосударственный стандарт. Премиксы. Метод определения содержания витамина K3"
(введен в действие Приказом Росстандарта от 28.09.2012 N 446-ст)

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены".

1. Разработан Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности" (ОАО "ВНИИКП").

2. Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии.

3. Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (Протокол N 41 от 23 - 24 мая 2012 г.).

За принятие проголосовали:

4. Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 сентября 2012 г. N 446-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31486-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.

5. Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53027-2008.

6. Введен впервые.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в указателе "Национальные стандарты".

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе "Национальные стандарты", а текст изменений - в информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе "Национальные стандарты".

Настоящий стандарт распространяется на премиксы и устанавливает фотометрический метод определения витамина .

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91. Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76. Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018-93. Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79. Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 83-79. Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия

ГОСТ 1770-74. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 1942-86. 1,2-Дихлорэтан технический. Технические условия

ГОСТ 3118-77. Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 3760-79. Реактивы. Аммиак водный. Технические условия

ГОСТ 6709-72. Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026-76. Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13496.0-80. Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

ГОСТ 24104-2001. Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25336-82. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77). Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81). Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования.

Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

Диапазоны измерений содержания витамина и значения показателей повторяемости, воспроизводимости и точности при вероятности P = 0,95 приведены в таблице 1.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, ГОСТ 12.1.018 и электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019.

4.2. Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу с реактивами необходимо проводить в вытяжном шкафу.

4.3. При работе с концентрированными кислотами и щелочами необходимо использовать резиновые перчатки.

5.1. Отбор проб - по ГОСТ 13496.0.

Допускается отбирать пробы премиксов, упакованных в бумажные мешки, мешочным щупом с последующим заклеиванием отверстия.

5.2. Подготовка пробы к анализу - по [1].

Сущность метода заключается в извлечении витамина из исследуемой пробы этиловым спиртом, реэкстракции 1,2-дихлорэтаном и фотометрировании продукта цветной реакции его с (2,4-динитрофенил)-гидразином при длине волны 635 нм.

6.1. Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,0001 г.

Фотоэлектроколориметр с рабочим спектральным диапазоном от 315 до 980 нм с основной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1% или спектрофотометр типа СФ.

Аппарат для встряхивания жидкости типа АВУ-1.

Центрифуга лабораторная ЦЭ-2 с числом оборотов 3000 об/мин.

Баня водяная с регулятором нагрева.

Колбы конические по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 1(2)-2-25(100) по ГОСТ 1770.

Пипетки градуированные 2(3)-1(2)-2-0,5(1,0; 2,0; 5,0; 10; 25) по ГОСТ 29227.

Пипетки с одной меткой 1(2)-2-2(10, 20, 25, 50) по ГОСТ 29169.

Цилиндры 1(3)-50(100) по ГОСТ 1770.

Воронки лабораторные В-36(56,75)-50(80,110) ХС по ГОСТ 25336.

Воронки делительные ВД-1-250 ХС по ГОСТ 25336.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026 или фильтры "красная лента".

Аммиак водный по ГОСТ 3760.

(2,4-Динитрофенил)-гидразин.

Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья с объемной долей этилового спирта 96,0% - 96,3%.

Кислота соляная по ГОСТ 3118.

Витамин менадион (2-метил-1,4-нафтохинон) фирмы Supelko.

1,2-Дихлорэтан по ГОСТ 1942.

Натрий углекислый по ГОСТ 83, раствор с массовой долей углекислого натрия 10%.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечания

1. Допускается применение средств измерений, вспомогательного оборудования с аналогичными метрологическими и техническими характеристиками, а также материалов и реактивов, по качеству не ниже указанных.

2. Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.

6.2. Подготовка к выполнению анализа

6.2.1. Приготовление раствора (2,4-Динитрофенил)-гидразина

80 мг (2,4-динитрофенил)-гидразина, взвешенного с погрешностью не более +/- 0,01 мг, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют при нагревании до 70 °C на водяной бане в 80 см3 этилового спирта по 6.1, охлаждают до комнатной температуры, добавляют 2 см3 соляной кислоты (35% - 38%) и доводят содержимое в колбе до метки этиловым спиртом, тщательно перемешивают.

6.2.2. Приготовление раствора этилового спирта с массовой долей 40%

В стеклянную емкость вносят 40 см3 этилового спирта, приливают 56 см3 дистиллированной воды, перемешивают.

6.2.3. Приготовление стандартного раствора витамина 

Навеску витамина массой 10 мг, взвешенную с погрешностью не более +/- 0,1 мг, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, приливают до метки этиловый спирт с массовой долей 40% и тщательно перемешивают.

Затем 10 см3 полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки этиловым спиртом с массовой долей 40% и перемешивают.

25 см3 полученного раствора отбирают в делительную воронку вместимостью 250 см3, добавляют 50 см3 1,2-дихлорэтана, 20 см3 раствора углекислого натрия с массовой долей 10% и перемешивают в течение 0,5 - 1,0 мин. Раствор отстаивают до разделения фаз. Затем фазу, содержащую 1,2-дихлорэтан (нижнюю), переносят в другую делительную воронку, добавляют 20 см3 дистиллированной воды и перемешивают в течение 0,5 мин. После перемешивания раствор снова отстаивают до фазоразделения и фазу, содержащую 1,2-дихлорэтан, фильтруют через бумажный беззольный фильтр. Получают стандартный раствор витамина , в 1 см3 которого содержится 5 мкг витамина . Раствор витамина хранят в холодильнике при температуре от 4 °C до 6 °C.

6.2.4. Построение градуировочного графика

В 10 мерных колб вместимостью по 25 см3 приливают стандартный раствор витамина (см. 6.2.3) в объемах, указанных в таблице 2.

В каждую из 10 колб приливают по 7,5 см3 раствора (2,4-динитрофенил)-гидразина и помещают их в водяную баню одновременно с испытуемыми и контрольным растворами (см. 6.2.5) на 2 ч при температуре (70 +/- 2) °C, периодически перемешивая содержимое колб. После этого растворы в колбах охлаждают до комнатной температуры, приливают в каждую колбу по 7,5 см3 смеси этилового спирта по 6.1 и водного аммиака с массовой долей 25% в объемном соотношении 1:1, перемешивают, доводят объемы в колбах до метки этиловым спиртом, тщательно перемешивают и измеряют оптические плотности растворов сравнения в порядке возрастания их концентраций на спектрофотометре при длине волны 635 нм или фотоэлектроколориметре с красным светофильтром при длине волны (625 +/- 25) нм в кювете толщиной поглощающего свет слоя 10 мм относительно контрольного раствора.

По полученным данным строят градуировочный график, откладывая на оси ординат значения оптической плотности растворов сравнения, на оси абсцисс - содержание витамина , мкг/25 см3 раствора.

6.2.5. Приготовление контрольного раствора

5 см3 1,2-дихлорэтана отбирают в мерную колбу вместимостью 25 см3, приливают 7,5 см3 раствора (2,4-динитрофенил)-гидразина. Колбу помещают в водяную баню одновременно с испытуемыми пробами и растворами сравнения, далее проводят ту же самую обработку, что и с испытуемой пробой по 6.3.2 и 6.3.3.

6.3. Проведение анализа

6.3.1. Навеску премикса массой от 5 до 10 г, взвешенную с погрешностью не более +/- 0,01 г, помещают в колбу вместимостью 250 см3, приливают 100 см3 этилового спирта с массовой долей 40%, встряхивают на аппарате в течение 15 мин и центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об/мин. Центрифугат фильтруют для устранения случайно оставшихся взвешенных частиц. Отбирают от 5 до 25 см3 фильтрата в зависимости от предполагаемого содержания витамина в испытуемом образце премикса, в делительную воронку вместимостью 250 см3 приливают 50 см3 1,2-дихлорэтана и 20 см3 раствора углекислого натрия с массовой долей 10% и перемешивают в течение 0,5 - 1,0 мин.

Раствор отстаивают до разделения фаз. Затем фазу, содержащую 1,2-дихлорэтан, в полном объеме переносят в другую делительную воронку, приливают в нее 20 см3 дистиллированной воды и перемешивают в течение 0,5 мин.

После этого раствору снова дают отстояться до фазоразделения и фазу, содержащую 1,2-дихлорэтан, фильтруют через бумажный беззольный фильтр.

6.3.2. 5 см3 1,2-дихлорэтанового экстракта испытуемых проб отбирают в мерную колбу вместимостью 25 см3, приливают 7,5 см3 раствора (2,4-динитрофенил)-гидразина (см. 6.2.1), колбу помещают в водяную баню и выдерживают ее 2 ч при температуре (70 +/- 2) °C, периодически перемешивая содержимое колбы.

6.3.3. По истечении указанного времени содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, приливают 7,5 см3 смеси этилового спирта по 6.1 и водного аммиака с массовой долей 25% в объемном соотношении 1:1, доводят объем в колбе этиловым спиртом до метки, тщательно перемешивают и измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 635 нм или фотоэлектроколориметре с красным светофильтром при длине волны (625 +/- 25) нм в кювете толщиной поглощающего свет слоя 10 мм относительно контрольного раствора (см. 6.2.5). Раствор готовят в день проведения анализа.

7.1. Содержание витамина в премиксе X, г/т, вычисляют по формуле

где c - масса витамина , найденная по градуировочному графику, мкг;

v - объем спиртового экстракта, см3;

- объем 1,2-дихлорэтана, взятый для экстракции, см3;

- коэффициент перевода микрограммов в граммы;

m - масса навески премикса, г;

- объем фильтрата спиртового экстракта, взятый для экстрагирования 1,2-дихлорэтаном, см3;

- объем 1,2-дихлорэтанового экстракта, взятый для окрашивания, см3;

- коэффициент перевода граммов в тонны.

7.2. Вычисления выполняют с точностью до второго десятичного знака с последующим округлением до первого десятичного знака.

При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения, начиная со взятия навески испытуемой пробы. Если расхождение между результатами параллельных определений не превышает допустимое (, , - результаты первого и второго параллельных определений и их среднеарифметическое значение соответственно), то среднеарифметическое значение принимают за результат анализа. В противном случае получают еще два результата определений и вычисляют окончательный результат анализа пробы по [2] (подраздел 5.2).

Значения предела повторяемости r и предела воспроизводимости R приведены в таблице 3.

По полученному результату анализа и значению относительной погрешности (см. таблицу 1) рассчитывают абсолютную погрешность по формуле

где - среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений.

Результат анализа представляют в виде , %. Допускается представление результата в виде , %, где - значение характеристики погрешности результатов анализа, установленное при реализации методики в конкретной лаборатории и обеспечиваемое контролем стабильности результатов анализа, при условии .