"ГОСТ 29059-91. Государственный стандарт Союза ССР. Продукты переработки плодов и овощей. Титриметрический метод определения пектиновых веществ"
(утв. и введен в действие Постановлением Госстандарта СССР от 27.06.1991 N 1081)

1. Разработан и внесен Всесоюзным научно-исследовательским и конструкторско-технологическим институтом по переработке фруктов и винограда и ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей".

Разработчики: Л.А. Бантыш, канд. техн. наук; Е.В. Йорга, канд. хим. наук; М.И. Киселева, Г.А. Шварцман; В.С. Коржа; Е.Ф. Герги.

2. Утвержден и введен в действие Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 27.06.91 N 1081.

3. Срок проверки - 1996 год; периодичность проверки - 5 лет.

4. Взамен ГОСТ 8756.11-70 в части разд. 3.

5. Ссылочные нормативно-технические документы

Настоящий стандарт распространяется на продукты переработки плодов и овощей, натуральные и приготовленные с добавлением пектина, и устанавливает титриметрический метод определения в них массовой доли полиуронидной части пектиновых веществ и степени ее этерификации.

Метод основан на титровании щелочью предварительно выделенных и подготовленных пектиновых веществ до и после гидролиза. Результаты титрования пропорциональны числу свободных и этерифицированных карбоксильных групп и при умножении на соответствующие эквиваленты дают содержание полиуронидов в пектиновых веществах продукта.

Требования стандарта являются обязательными.

1.1. Отбор проб плодоовощных консервов - по ГОСТ 26313, подготовка проб - по ГОСТ 26671.

1.2. Отбор и подготовка проб сушеных фруктов - по ГОСТ 1750.

1.3. Отбор и подготовка проб других видов продукции - по соответствующим стандартам на продукцию.

Аппарат для встряхивания.

Баня водяная.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 3-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности +/- 2,00 мг.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 3-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг и пределом допускаемой погрешности +/- 10,00 мг.

Микроизмельчитель тканей РТ-2.

Шкаф сушильный, обеспечивающий поддержание температуры нагрева с погрешностью не более 5 °C.

Электропечь сопротивления камерная лабораторная, обеспечивающая поддержание заданного температурного режима с погрешностью до +/- 25 °C.

Центрифуга лабораторная с фактором разделения не менее 3000, со стаканами вместимостью не менее 100 см3.

Бюретки по ГОСТ 20292 2-го класса точности вместимостью - 2,5, 25 и 50 см3.

Воронки фильтрующие по ГОСТ 25336 ВФ-1-40ПОР 40.

Колбы мерные по ГОСТ 1770 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100, 200, 250, 500, 1000 см3.

Колбы плоскодонные по ГОСТ 25336, П-1-250, П-1-500.

Колбы конические по ГОСТ 25336, Кн-1-100, Кн-1-250, Кн-1-500, 29/32.

Колбы с тубусом по ГОСТ 25336, 1-250, 1-500.

Пипетки без делений по ГОСТ 20292 2-го класса точности вместимостью 20, 25, 50, 100 см3.

Стаканы химические по ГОСТ 25336, В-1-150, В-1-400, В-1-600.

Цилиндры по ГОСТ 1770 2-го класса точности вместимостью 50, 100, 500 см3.

Холодильник по ГОСТ 25336, XIII-1-300.

Аммоний роданистый по ГОСТ 27067 или калий роданистый, раствор массовой концентрации 100 г/дм3.

Бромтимоловый синий (индикатор), раствор массовой концентрации 4 г/дм3.

Катионит КУ-2-8 по ГОСТ 20298, фракция 0,5 - 1 мм.

Кислота азотная по ГОСТ 4461 плотностью 1337 - 1367 кг/м3.

Кислота серная по ГОСТ 4204 плотностью 1835 кг/м3, раствор концентрации , 0,1 моль/дм3 и 0,05 моль/дм3.

Кислота соляная по ГОСТ 3118 плотностью 1190 кг/м3, разбавленные растворы (1:3) и (1:8) и растворы концентрации c(HCl) = 0,1 моль/дм3 и 0,05 моль/дм3.

Крезоловый красный (индикатор), раствор массовой концентрации 4 г/дм3.

Метиловый оранжевый (индикатор), раствор массовой концентрации 1 г/дм3.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, раствор массовой концентрации 50 г/дм3 и растворы концентрации c(NaOH) = 0,1 моль/дм3 и 0,05 моль/дм3.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233, насыщенный раствор (при комнатной температуре).

Песок кварцевый по ГОСТ 7031. Допускается использовать речной или морской песок, очищенный и прокаленный.

Серебро азотнокислое по ГОСТ 1277, раствор массовой концентрации 10 г/дм3. Для устойчивости при приготовлении добавляют несколько капель концентрированной азотной кислоты.

Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300 или спирт по ГОСТ 5962 и раствор с объемной долей 70%.

Феноловый красный (индикатор), раствор массовой концентрации 4 г/дм3.

Эфир этиловый медицинский.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечания.

1. Титрованные растворы серной, соляной кислот и гидроокиси натрия готовят в соответствии с требованиями ГОСТ 25794.1.

2. Допускается приготовление титрованных растворов серной, соляной кислот и гидроокиси натрия из стандарт-титров (фиксаналов).

3. Квалификация всех применяемых реактивов должна быть не ниже ч.д.а.

4. Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками не ниже указанных в настоящем стандарте.

3.1. Приготовление индикатора Хинтона

Водные растворы индикаторов бромтимолового синего, крезолового красного и фенолового красного концентрации 4 г/дм3 смешивают в соотношении (1:1:3).

3.2. Подготовка катионита КУ-2-8

Катионит заливают насыщенным раствором хлористого натрия и оставляют на сутки для набухания. Затем раствор декантируют и заливают катионит раствором гидроокиси натрия с концентрацией 50 г/дм3 на 3 - 4 ч. Сливают щелочь и промывают смолу свежими порциями щелочи до тех пор, пока промывная жидкость не станет бесцветной и прозрачной. Далее катионит промывают дистиллированной водой до pH 6 - 7, после чего его переводят в Н-форму и удаляют ионы железа. Для этого смолу промывают поочередно раствором соляной кислоты (1:8) и дистиллированной водой до отрицательной реакции промывной жидкости на ион железа; при добавлении раствора роданида аммония или роданида калия не должно появляться розовое окрашивание. Затем отмывают катионит дистиллированной водой от хлоридов до отсутствия опалесценции при добавлении к 15 см3 промывной воды 0,5 см3 азотной кислоты и 1 см3 раствора азотнокислого серебра или до нейтральной реакции по метилоранжу.

Для промывания рекомендуется использовать растворы и воду, нагретые до температуры 60 - 80 °C.

После обработки катионит КУ-2-8 в Н-форме хранят под слоем дистиллированной воды в хорошо закрытой посуде не более года.

3.3. Подготовка речного или морского песка

Песок просеивают, собирают фракцию 0,25 - 1,0 мм, отмучивают водой и промывают раствором соляной кислоты (1:3) до отрицательной реакции на ион железа с раствором роданида аммония или роданида калия. Затем песок промывают дистиллированной водой для удаления ионов хлора и проводят проверочную реакцию с раствором азотнокислого серебра или с метилоранжем.

Для промывания рекомендуется использовать раствор кислоты и воду, нагретые до температуры 60 - 80 °C.

Очищенный песок сушат и прокаливают при температуре 500 - 600 °C в течение 5 ч.

3.4. Приготовление спиртово-кислотных смесей

Готовят два вида спиртово-кислотных смесей. Смесь для осаждения пектина - к 100 см3 этилового спирта добавляют 2 см3 концентрированной соляной кислоты.

Смесь для промывки осадка пектина - 100 см3 70%-ного раствора этилового спирта смешивают с 5 см3 концентрированной соляной кислоты.

4.1. Из подготовленной пробы берут навески в количестве 30 - 50 г для натуральных продуктов и 10 - 20 г для продуктов, приготовленных с добавлением пектина. Берут по две навески для определения отдельно пектина и протопектина.

Продукты, содержащие добавленный жир, предварительно обезжиривают. Для этого навеску исследуемого материала помещают в патрон из фильтровальной бумаги и подсушивают при температуре 70 - 80 °C. Высушенную пробу помещают в колбу вместимостью 250 или 500 см3 со шлифом, заливают 30 - 40 см3 эфира и нагревают на водяной бане при температуре 40 - 50 °C с обратным холодильником 20 - 30 мин. Осторожно! Не пользоваться открытыми нагревательными приборами!

Эфир осторожно сливают или фильтруют через бумажный фильтр, а отделение жира повторяют еще четыре-пять раз. Обезжиривание пробы можно проводить в аппарате Сокслета.

Остатки пробы с фильтром добавляют в колбу с обезжиренной навеской, заливают 100 см3 подогретой до 60 - 70 °C дистиллированной водой и далее проводят извлечение пектиновых веществ по пп. 4.2 и 4.3.

4.2. Для извлечения водорастворимого пектина навеску исследуемого продукта помещают в колбу вместимостью 250 или 300 см3, заливают 100 см3 подогретой до 60 - 70 °C дистиллированной водой и встряхивают 30 мин. Затем содержимое количественно дистиллированной водой переносят в мерную колбу вместимостью 200 или 250 см3, охлаждают, доводят до метки, тщательно перемешивают и отделяют жидкость центрифугированием. Полученный экстракт водорастворимого пектина переносят в сухую посуду.

При анализе фруктовых соков без мякоти операцию извлечения водорастворимого пектина совмещают с очисткой экстракта по п. 4.4.

Для консервов с низкоэтерифицированным пектином, при производстве которых используется соль кальция, мешающая количественному выделению пектиновых веществ, экстракцию водорастворимого пектина проводят в присутствии 0,5 - 0,7 г (1,5 см3) обработанного катионита КУ-2-8, добавляемого в колбу с пробой.

4.3. Суммарное содержание пектиновых веществ определяют в другой навеске продукта после проведения солянокислого гидролиза для перевода протопектина в растворимое состояние. Для этого навеску исследуемого материала помещают в колбу вместимостью 250 или 300 см3, заливают 100 см3 раствора соляной кислоты концентрации 0,05 моль/дм3 (pH смеси 1,8 - 2,0) и нагревают на водяной бане 30 мин при температуре 85 - 90 °C. Затем содержимое колбы количественно дистиллированной водой переносят в мерную колбу вместимостью 200 или 250 см3, охлаждают, доводят до метки, перемешивают и оставляют на 1 - 1,5 ч для выравнивания концентрации пектиновых веществ в жидкой и твердой фазах. Экстракт отделяют центрифугированием и собирают в сухую посуду.

4.4. Полученные растворы пектиновых веществ очищают осаждением спиртово-кислотной смесью. Для этого в химический стакан с помощью пипетки помещают 25, 50 или 100 см3 экстракта (в зависимости от содержания пектина), добавляют двойное количество спиртово-кислотной смеси, тщательно перемешивают и оставляют на 1 - 1,5 ч для формирования осадка.

При анализе фруктовых соков без мякоти к навеске сока добавляют двукратный объем спиртово-кислотной смеси, тщательно перемешивают и оставляют на 1 - 1,5 ч для формирования осадка.

Выпавший осадок отфильтровывают через воронку с пористой пластинкой ВФ-1-40 ПОР 40 со слоем песка 0,5 - 0,7 см. Стакан и осадок промывают раствором 70%-ного этилового спирта, подкисленного соляной кислотой три раза по 15 - 20 см3, затем раствором 70%-ного этилового спирта до отрицательной реакции на ион хлора с азотнокислым серебром.

На промывку одной пробы расходуется 90 - 100 см3 70%-ного раствора этилового спирта.

4.5. Воронку с промытым осадком устанавливают в чистую колбу с тубусом вместимостью 250 см3 и количественно растворяют пектиносодержащий осадок водой при температуре 60 - 70 °C. Стакан, где проводили осаждение, также промывают два-три раза подогретой водой.

Охлаждают раствор до комнатной температуры, добавляют 6 капель индикатора Хинтона и титруют раствором гидроокиси натрия концентрации 0,05 моль/дм3 до перехода желтой окраски в малиновую, не исчезающую в течение 20 - 30 с.

Затем к раствору в колбе с помощью пипетки или бюретки добавляют 20 см3 раствора гидроокиси натрия концентрации 0,1 моль/дм3, закрывают пробкой и оставляют на 30 мин. Далее с помощью бюретки приливают раствор соляной кислоты концентрации 0,1 моль/дм3, точное количество которого устанавливают предварительно титрованием 20 см3 гидроокиси натрия концентрации 0,1 моль/дм3 тем же раствором кислоты с индикатором Хинтона.

Смесь в колбе вновь титруют раствором гидроокиси натрия концентрации 0,05 моль/дм3.

Результат первого титрования пропорционален содержанию свободных, а второго - верифицированных карбоксильных групп и при умножении на соответствующие эквиваленты выражают массовую долю полиуронидной части пектиновых веществ.

Массовую долю полиуронидов (X) в процентах вычисляют по формуле

где , - объемы раствора гидроокиси натрия, израсходованные на первое и второе титрования, см3;

c - точная концентрация раствора гидроокиси натрия, используемого для титрования, моль/дм3 (0,05 моль/дм3, умноженная на поправочный коэффициент);

V - общий объем экстракта, см3;

- объем экстракта, отобранный для осаждения и титрования, см3;

m - масса навески, г;

- молекулярная масса звена полигалактуроновой кислоты, ;

- молекулярная масса этерифицированного звена полигалактуроновой кислоты, .

Степень этерификации выделенных пектиновых веществ в процентах вычисляют по формуле

Количество водонерастворимого пектина (протопектина) определяют по разности между общим содержанием пектиновых веществ (п. 4.3) и содержанием водорастворимого пектина (п. 4.2).

Вычисления проводят с тремя значащими цифрами, результат округляют до двух значащих цифр.

За окончательный результат испытаний принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемое абсолютное расхождение между которыми не должно превышать 0,10% при определении полиуронидов и 4,0% при определении степени этерификации (P = 0,95).

Минимально определяемое содержание полиуронидов - 0,10% при навеске на анализ 50 г продукта.

Продолжительность определения 6 - 7 ч.