"ГОСТ 23231-90. Государственный стандарт Союза ССР. Колбасы и продукты мясные вареные. Метод определения остаточной активности кислой фосфатазы"
(утв. и введен в действие Постановлением Госстандарта СССР от 27.06.1990 N 1935)

1. Разработан и внесен Государственным агропромышленным комитетом СССР.

Разработчики:

В.И. Ивашов, д-р техн. наук; И.А. Шумкова, канд. техн. наук; В.З. Кракова (руководитель темы); Г.И. Мосина.

2. Утвержден и введен в действие Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 27.06.90 N 1935.

3. Срок первой проверки - 1994 г.

Периодичность проверки - 5 лет.

4. Взамен ГОСТ 23231-78.

5. Ссылочные нормативно-технические документы:

Настоящий стандарт распространяется на вареные колбасы, сосиски, сардельки и вареные продукты из свинины и устанавливает метод определения остаточной активности кислой фосфатазы.

Метод основан на фотометрическом определении в продукте интенсивности развивающейся окраски, зависящей от остаточной активности кислой фосфатазы, выраженной массовой долей фенола.

Метод применяют в случае сомнения в проваренности продукта.

1.1. Отбор проб - по ГОСТ 9792.

1.2. Точечные пробы продуктов из свинины должны быть освобождены от жировой ткани и шкурки, а точечные пробы вареных колбас, сосисок и сарделек - от оболочки и шпика.

1.3. Для составления объединенной пробы точечные пробы соединяют, дважды измельчают на бытовой или электрической мясорубке и тщательно перемешивают.

Объединенную пробу помещают в стеклянную или пластмассовую банку вместимостью 200 - 400 см3, заполнив ее полностью и закрывают крышкой.

1.4. Объединенную пробу, подготовленную для испытания, хранят при температуре (4 +/- 2) °C до окончания испытаний.

Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469 с отверстиями решетки диаметром от 3 до 4 мм.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 2-го класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

Потенциометр с погрешностью измерения +/- 0,06 pH.

Калориметр фотоэлектрический лабораторный с устройством для отсчитывания значения оптической плотности и светофильтром с по ГОСТ 12083 или спектрофотометр для измерения в видимой области спектра.

Ультратермостат или водяная баня, обеспечивающие регулирование температуры от 30 до 99 °C.

Воронки В-36-80 ХС, В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 2-500-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770, вымеренные на наливной объем.

Пипетки 4-2-1, 4-2-2, 7-2-5, 7-2-10 по ГОСТ 20292.

Холодильник ХШ-1-400-29/32 ХС по ГОСТ 25336.

Колба К-1-2000-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.

Пробирки П1-16-150 ХС, П1-21-200 ХС, П1-25-200 ХС по ГОСТ 25336.

Палочки стеклянные.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Груша резиновая.

Кислота лимонная по ГОСТ 3652, х.ч.

Натрий лимоннокислый 5-водный по ГОСТ 22280, ч.д.а.

Фенилфосфорной кислоты динатриевая соль по ТУ 6-09-3752, свежеприготовленный раствор 2 г/дм3.

Кислота трихлоруксусная кристаллическая по ТУ 6-09-1926, растворы 50 и 200 г/дм3.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч., гранулированная, раствор c (NaOH) = 0,5 моль/дм3.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Фенол по ТУ 6-09-5303, ч.д.а.

Толуол по ГОСТ 5789, ч.д.а.

Натрий вольфрамовокислый 2-водный по ГОСТ 18289, х.ч.

Натрий молибденовокислый по ГОСТ 10931, ч.д.а.

Литий сернокислый 1-водный по ТУ 6-09-5299, х.ч.

Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552, х.ч., плотностью 1,72 г/см3.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч., плотностью 1,19 г/см3.

Бром по ГОСТ 4109, х.ч.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками, а также реактивов с качественными показателями не ниже указанных в настоящем стандарте.

3.1. Приготовление цитратного буфера

В мерной колбе вместимостью 1000 см3 в дистиллированной воде растворяют 13,88 г лимоннокислого натрия и 0,588 г лимонной кислоты, доливают водой до метки и перемешивают, pH буфера 6,5. Затем добавляют 1 см3 толуола. Раствор хранят в холодильнике при температуре (4 +/- 1) °C не более 12 сут.

3.2. Приготовление реактива Фолина

100 г вольфрамовокислого натрия и 25 г молибденовокислого натрия растворяют в 700 см3 дистиллированной воды. К раствору добавляют 50 см3 ортофосфорной кислоты и 100 см3 соляной кислоты. Смесь осторожно кипятят в течение 10 ч в колбе вместимостью 2000 см3 с обратным холодильником, после чего охлаждают и добавляют 150 г сернокислого лития, 50 см3 воды и несколько капель брома. Остаток брома отгоняют кипячением смеси без холодильника в вытяжном шкафу, охлаждают, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят объем дистиллированной водой до метки, перемешивают и фильтруют. Реактив должен быть золотисто-желтого цвета без зеленого оттенка. Реактив хранят в склянке с притертой пробкой в темном месте не более 6 мес.

3.3. Приготовление стандартного раствора

2 г фенола (результат взвешивания записывают до третьего десятичного знака) растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1000 см3, доводят объем до метки и перемешивают. Отбирают пипеткой с помощью резиновой груши 5 см3 раствора в колбу вместимостью 500 см3, добавляют около 300 см3 дистиллированной воды, вносят 25 г кристаллической трихлоруксусной кислоты. После растворения содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. Полученный раствор содержит 20 мкг фенола в 1 см3.

3.4. Построение градуировочного графика

В пробирки вносят следующие объемы стандартного раствора: О; 0,25; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 см3, что соответствует массе фенола: 0; 5; 10; 20; 30; 40 мкг. Доводят объем в каждой пробирке до 2,5 см3, добавляя соответствующий объем 50 г/дм3 раствора трихлоруксусной кислоты (2,5; 2,25; 2,0; 1,5; 1,0; 0,5 см3) и перемешивая. В каждую пробирку добавляют 5 см3 0,5 моль/дм3 раствора гидроокиси натрия, перемешивают, выдерживают 10 мин и добавляют 1,5 см3 реактива Фолина, разведенного дистиллированной водой в соотношении 1:2 и перемешивают.

Через 30 мин измеряют оптическую плотность растворов по отношению к 50 г/см3 раствору трихлоруксусной кислоты на фотоэлектрическом калориметре с применением светофильтра с в кювете с расстоянием между рабочими гранями 10 мм или на спектрофотометре при длине волны 600 нм в кювете аналогичного размера.

По полученным средним данным по трем стандартным растворам на миллиметровой бумаге размером 20 x 20 см строят градуировочный график. На оси абсцисс откладывают значение массовой доли фенола (микрограмм в 9 см3 окрашенного раствора); на оси ординат - значение соответствующей оптической плотности (D). Градуировочный график должен проходить через начало координат. Пример градуировочного графика приведен в Приложении.

4.1. От объединенной пробы, подготовленной к испытанию, берут 2 навески массой по 1 г (результат взвешивания записывают до третьего десятичного знака) и переносят в две пробирки (одна - контрольная, другая - опытная).

В пробирки вносят по 10 см3 цитратного буфера pH 6,5, тщательно перемешивают стеклянной палочкой и настаивают в течение 20 мин при комнатной температуре, периодически перемешивая.

В контрольную пробирку добавляют 5 см3 200 г/дм3 раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и добавляют 5 см3 2 г/дм3 раствора динатриевой соли фенилфосфорной кислоты, выдерживают 10 мин и фильтруют.

В опытную пробирку добавляют 5 см3 2 г/дм3 раствора динатриевой соли фенилфосфорной кислоты и помещают в ультратермостат при температуре (39 +/- 1) °C на 1 ч, затем добавляют 5 см3 200 г/дм3 раствора трихлоруксусной кислоты, выдерживают 10 мин и фильтруют.

Для проведения цветной реакции из контрольной и опытной пробирок отбирают по 2,5 см3 безбелкового фильтрата. Цветную реакцию проводят по п. 3.4.

Массовую долю фенола определяют по градуировочному графику.

5.1. Массовую долю фенола (X) в процентах вычисляют по формуле

где - масса фенола в опытной пробирке, найденная по градуировочному графику, мкг;

- масса фенола в контрольной пробирке, найденная по градуировочному графику, мкг;

m - масса анализируемой пробы, г;

- коэффициент пересчета в граммы;

20 - разведение, см3;

2,5 - объем фильтрата, отобранный для цветной реакции, см3.

Вычисление проводят до четвертого десятичного знака.

5.2. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми при P = 0,95 не должно превышать 10% по отношению к среднему арифметическому.

Окончательный результат определяют до третьего десятичного знака.

5.3. Допускаемое расхождение между результатами испытаний, проведенных в двух разных лабораториях, при P = 0,95 не должно превышать 25% по отношению к среднему арифметическому значению.

5.4. Значение среднего квадратического отклонения случайной составляющей погрешности измерений массовой доли фенола одной и той же пробы в разных лабораториях при допускаемых методикой изменениях влияющих факторов составляет .