"ГОСТ 23041-78. Государственный стандарт Союза ССР. Мясо и продукты мясные. Метод определения оксипролина"
(утв. и введен в действие Постановлением Госстандарта СССР от 30.03.1978 N 893)
(ред. от 01.12.1987)

1. Разработан и внесен Министерством мясной и молочной промышленности СССР.

Разработчики: А.Ф. Савченко, канд. техн. наук; Г.Л. Солнцева, канд. биол. наук (руководитель темы); А.А. Сабянина, канд. техн. наук.

2. Утвержден и введен в действие Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 30.03.78 N 893.

3. Введен впервые.

4. Ссылочные нормативно-технические документы

5. Срок действия продлен до 01.01.94 Постановлением Госстандарта СССР от 25.12.87 N 5052.

6. Переиздание (декабрь 1990 г.) с изменениями N 1, 2, 3, утвержденными в августе 1983 г., июне 1985 г., декабре 1987 г. (ИУС 12-83, 10-85, 4-88).

Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты и устанавливает метод определения оксипролина, когда определение этого показателя предусмотрено нормативно-технической документацией.

Метод основан на выделении оксипролина при кислотном гидролизе пробы продукта, проведении цветной реакции с продуктами окисления ее и измерении интенсивности развивающейся окраски.

(Измененная редакция, Изм. N 3).

1.1. Пробу отбирают по ГОСТ 9792-73, пропускают через мясорубку не менее двух раз до тонкого измельчения и тщательно перемешивают.

1.2. Пробу, подготовленную для испытания, помещают в стеклянную банку вместимостью от 200 до 400 мл, заполнив ее, и закрывают крышкой.

Пробу хранят при температуре от 3 до 5 °C.

Испытания проводят в течение 24 ч.

Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025-83 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469-81 с отверстием решетки диаметром от 3 до 4 мм.

Весы лабораторные общего назначения второго класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г с допускаемой погрешностью взвешивания +/- 0,001 г по ГОСТ 24104-80.

Баня водяная.

Баня песчаная.

Электронагревательное устройство с песчаной баней.

Колориметр фотоэлектрический лабораторный по нормативно-технической документации с устройством для отсчитывания значения оптической плотности и интерференционным фильтром с (рабочая длина кювет 30 - 50 мм, светофильтр - зеленый) или спектрофотометр для измерения в видимой области спектра.

Колба Кн-1-250-29/32 ТХС по ГОСТ 25336-82.

Дефлегматоры 250-29/32 ТС или холодильники ХШ-1-300-29/32 ХС по ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные 1-100-2 или 2-100-2; 1-250-2 или 2-250-2; 2-1000-2 по ГОСТ 1770-74, вымеренные на наливной объем.

Воронки В-36-50 ХС по ГОСТ 25336-82.

Пробирки П4-10-14/23 по ГОСТ 25336-82.

Пробирки для колориметрирования должны быть из бесцветного стекла.

Пипетки 5-1-2 или 4-2-2; 7-1-5 или 7-2-5; 7-1-10 или 7-2-10 по ГОСТ 20292-74.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026-76 или фильтры обеззоленные диаметром 5 и 9 см.

Фольга алюминиевая по ГОСТ 745-79.

Бумага индикаторная универсальная.

Хлорамин - Т.

Хлорамин - Б.

Кислота соляная по ГОСТ 3118-77, х.ч., плотностью 1,19 г/см3 и раствор c(HCl) = 6 моль/дм3.

Натрий гидроокись по ГОСТ 4328-77, х.ч. или ч.д.а., гранулированная, раствор c(NaOH) = 10 моль/дм3.

Спирт пропиловый (протанол), ч. и х.ч.

Спирт изопропиловый, ч. или ос.ч.

Кислота лимонная по ГОСТ 3652-69, х.ч.

Кислота уксусная по ГОСТ 61-75, х.ч.

Натрий уксуснокислый по ГОСТ 199-78, х.ч.

Парадиметиламинобензальдегид.

Кислота хлорная, х.ч., плотностью 1,50 г/см3, массовая доля кислоты 57%, или ч.д.а., плотностью 1,32 г/см3, массовая доля кислоты 42%.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

Оксипролин.

Разд. 2. (Измененная редакция, Изм. N 3).

3.1. Приготовление реактивов

3.1.1. Приготовление реактива для окисления

1,41 г хлорамина-Т или хлорамина-Б разводят в 10 см3 воды и последовательно добавляют 10 см3 пропилового спирта и 80 см3 буферного раствора. Раствор должен быть свежеприготовленный.

3.1.2. Приготовление цветного реактива

10 г парадиметиламинобензальдегида растворяют в 35 см3 хлорной кислоты, непрерывно перемешивая. Полученный раствор смешивают с 65 см3 пропилового спирта. Раствор приготовляют в день использования.

3.1.3. Приготовление буферного раствора (pH 6,0)

50 г лимонной кислоты, 12 см3 уксусной кислоты (96 г на 100 см3), 120 г уксуснокислого натрия, 34 г гидроокиси натрия растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см3, доводят до метки дистиллированной водой. Полученный раствор смешивают с 200 см3 воды и 300 см3 пропилового спирта.

3.1.4. Приготовление основного раствора оксипролина

100 мг стандартного препарата оксипролина растворяют в воде (в мерной колбе вместимостью 100 см3), добавляют каплю 6 моль/дм3 (н.) соляной кислоты и доводят водой до метки. В день использования берут 1 см3 основного раствора в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят до метки водой, тщательно перемешивая. 1 см3 этого раствора содержит 0,01 мг оксипролина. Затем приготовляют четыре стандартных раствора путем разбавления 5, 10, 20 и 30 см3 этого раствора водой в мерных колбах вместимостью 100 см3 для получения соответственно концентраций 0,5; 1; 2 и 3 мкг/см3.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.2. Построение градуировочного графика

Измеряют оптическую плотность стандартных растворов оксипролина при длине волны 558 нм. Повторяют всю операцию определения, используя по 4 см3 четырех разбавленных стандартных растворов оксипролина.

По полученным средним данным строят градуировочный график, откладывая на оси ординат величины оптической плотности, а на оси абсцисс - концентрацию оксипролина, по отмеченным точкам проводят прямую линию.

4.1. В коническую колбу вместимостью 300 см3 помещают около 4 г продукта, взвешенного с погрешностью не более 0,0002 г. Добавляют 100 см3 6 моль/дм3 (н.) раствора соляной кислоты и кипятильные камни для равномерного кипения. Колбу соединяют с воздушным или водяным холодильником и нагревают на песчаной бане в течение 7 ч при гидролизе проб вареных и полукопченых мясных продуктов, в течение 8 ч - при гидролизе проб мяса и сырокопченых мясных продуктов.

Теплый гидролизат фильтруют в мерную колбу вместимостью 250 см3, смывая гидролизную колбу и фильтр дистиллированной водой. Объем колбы доводят водой до метки и тщательно перемешивают. Затем разбавляют гидролизат, доводя содержание оксипролина в 1 см3 до 1 - 4 мкг. Для этого 4 - 10 см3 гидролизата (в зависимости от предполагаемого содержания оксипролина в испытуемом продукте) вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и нейтрализуют 10 моль/дм3 (н.) раствором гидроокиси натрия до pH 6,0 по индикаторной бумаге.

Объем доводят водой до метки и перемешивают. Переносят 4 см3 этого раствора в пробирку и добавляют 2 см3 реактива для окисления, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 20 мин. Затем добавляют 2 см3 цветного реактива, перемешивают и пробирку закрывают алюминиевой фольгой. Одновременно готовят два контрольных раствора, используя вместо фильтрата дистиллированную воду. Пробирки быстро переносят в водяную баню с температурой (60 +/- 0,5) °C и нагревают в течение 15 мин, затем пробирки охлаждают в течение 3 мин водой или льдом и не позднее чем через 30 мин измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 558 нм. Предварительно измеряют оптическую плотность контрольных растворов одного относительно другого, а затем испытуемых в отношении контрольного.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

5.1. Массовую долю оксипролина (X) вычисляют в процентах по формуле

где C - количество оксипролина, найденное по градуировочному графику, мкг/см3;

m - количество продукта, взятое для испытания, г;

V - количество гидролизата, взятое для нейтрализации, см3;

- коэффициент пересчета в мкг;

100 - коэффициент пересчета в проценты.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, расхождение между которыми не должно превышать 0,5%.

Окончательный результат вычисляют с погрешностью до 0,1%.