"ФС.2.5.0095. Фармакопейная статья. Сушеницы топяной трава"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 N 120)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

Собранная в начале цветения и высушенная трава с корнями дикорастущего однолетнего травянистого растения сушеницы топяной - Gnaphalium uliginosum L.s.l., сем. астровых - Asteraceae.

Содержит не менее 0,2% суммы флавоноидов в пересчете на гнафалозид A в сухом сырье.

Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС "Травы" и ОФС "Корни, корневища, луковицы, клубни, клубнелуковицы".

Цельное сырье. Цельные или частично измельченные олиственные стебли длиной до 30 см с серовато-белым войлочным опушением. Корни тонкие, стержневые, ветвистые. Стебли тонкие, цилиндрические, обычно от основания распростерто-ветвистые. Листья длиной 0,5 - 3,5 см, шириной 0,1 - 0,4 см, очередные, короткочерешковые, линейно-продолговатые, с туповатой верхушкой и выдающейся срединной жилкой. Соцветие состоит обычно из нескольких яйцевидных мелких корзинок длиной 0,3 - 0,4 см, плотно скученных клубочками на верхушках побегов и окруженных лучисторасходящимися листьями, превышающими клубочки соцветий. Обвертка корзинки состоит из 2 - 3 рядов черепитчато-расположенных темно-бурых листочков; наружные листочки яйцевидные, при основании войлочные, в верхней половине голые, блестящие; внутренние - продолговато-яйцевидные, заостренные, голые. Цветки мелкие, желтоватые, трубчатые, пятизубчатые. Плоды - семянки с хохолком из 10 отдельных волосков. Корни стержневые, ветвистые.

Цвет зеленовато-серый. Запах слабый.

Измельченное сырье. Кусочки стеблей, листьев, соцветий, корней, а также отдельные цветки, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм.

Цвет зеленовато-серый. Запах слабый.

Микроскопические признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС "Микроскопический и микрохимический анализ лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения".

Цельное сырье, измельченное сырье. При рассмотрении микропрепаратов листа с поверхности должны быть видны клетки эпидермиса, с обеих сторон более или менее вытянутые по длине листа. Клетки эпидермиса верхней стороны листа должны быть со слабоизвилистыми стенками, с нижней стороны листа - с сильноизвилистыми стенками. Клетки в основном прямоугольной формы, у основания и вершины листа вытянутые. Нижний эпидермис с извилистыми и сильноизвилистыми стенками, у основания и вершины листа клетки вытянуты и имеют более ровные стенки. Кутикула ровная. Устьица крупные, овально-округлые, погруженные, окружены 4 - 5 клетками эпидермиса и ориентированы по длине листа (аномоцитный тип), должны встречаться редко; на нижней стороне их значительно больше.

На поперечных и продольных срезах должны быть видны утолщенные наружные и внутренние стенки эпидермальных клеток. Открытые коллатеральные сосудисто-волокнистые пучки расположены по кругу с небольшими межпучковыми зонами, в которых межпучковая паренхима склерифицирована. Склеренхимные волокна в виде "шапочек" должны быть расположены над пучками, а также имеются в ксилеме. Сосуды спиральные и точечные должны быть представлены небольшими радиальными тяжами группами по 2 - 4. Кора должна быть отделена от центрального осевого цилиндра рядом клеток эндодермы. Сердцевина должна быть заполнена крупными паренхимными клетками. Волоски стебля аналогичны волоскам листа.

Эпидермис обвертки корзинки должен состоять из вытянутых прямоугольных клеток с ровными стенками и редко встречающихся аномоцитных устьиц. Кутикула ровная. Волоски должны быть такими же, как волоски листа, но головчатые волоски более крупные, насчитывающие до четырех клеток в высоту. Хохолок семени должен состоять из многочисленных пучковых многоклеточных волосков. Пыльца округлая шиповатая трехпоровая.

1. ТСХ. Определение проводят методом ТСХ (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Вода - муравьиная кислота - толуол - этилацетат 2:5:10:20.

Испытуемый раствор. В мерную колбу с притертой пробкой вместимостью 100 мл помещают 1,0 г измельченного до однородной массы сырья, прибавляют 10 мл спирта 70%, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане в течение 30 мин. Затем содержимое колбы охлаждают и фильтруют через беззольный фильтр.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг кверцетина-3-глюкозида, 5 мг кофейной кислоты и 5 мг хлорогеновой кислоты и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.

Реактив для детектирования 1. Дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира раствор 1% в спирте 96%.

Реактив для детектирования 2. Макрогола 400 раствор спиртовой 5%.

На линию старта пластинки наносят 10 мкл испытуемого раствора и 5 мкл стандартного раствора. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в предварительно насыщенную в течение не менее 30 мин камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей. Хроматограмму опрыскивают реактивом для детектирования 1, сушат, затем опрыскивают реактивом для детектирования 2, нагревают при температуре 100 - 105 °C в течение 3 - 5 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

На хроматограмме стандартного раствора в нижней трети пластинки должна обнаруживаться зона адсорбции от голубого до сине-голубого цвета (хлорогеновая кислота), в средней трети пластинки должна обнаруживаться зона адсорбции от оранжевого до желто-оранжевого цвета (кверцетин-3-глюкозид) и в верхней трети пластинки должна обнаруживаться зона адсорбции от голубого до сине-голубого цвета (кофейная кислота).

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции от голубого до сине-голубого цвета на уровне зоны адсорбции хлорогеновой кислоты, зона адсорбции от оранжевого до желто-оранжевого цвета на уровне зоны адсорбции кверцетин-3-глюкозида и зона адсорбции от голубого до сине-голубого цвета на уровне зоны адсорбции кофейной кислоты; допускается обнаружение других зон адсорбции (фенольные соединения).

2. Спектрофотометрия (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 200 до 400 нм в кювете толщиной 1 см должен иметь максимумы при 287 +/- 3 нм и 330 +/- 3 нм (раздел "Количественное определение").

3. Качественная реакция. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 г сырья и прибавляют 10 мл спирта 96%, соединяют с обратным холодильником и нагревают на водяной бане в течение 10 мин с момента закипания спирта в колбе. После охлаждения до комнатной температуры полученное извлечение фильтруют через беззольный фильтр.

В две одинаковые пробирки помещают по 2 мл полученного фильтрата, затем в одну из пробирок добавляют 0,5 мл алюминия хлорида спиртового раствора 2% (испытуемый раствор), а во вторую - 0,5 мл спирта 96% (раствор сравнения). Через 20 мин в обе пробирки прибавляют по 10 мл воды и просматривают на белом фоне. Анализируемый раствор должен иметь желтый цвет и по интенсивности окраски заметно превосходить раствор сравнения (флавоноиды).

Влажность. Не более 13,0% (ОФС "Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения").

Зола общая. Не более 20,0% (ОФС "Зола общая").

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Не более 10,0% (ОФС "Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте").

Измельченность сырья. Определение проводят в соответствии с ОФС "Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм - не более 5%.

Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм - не более 10%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,315 мм - не более 10%.

Допустимые примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС "Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Органическая примесь. Не более 2%.

Минеральная примесь. Не более 2%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с ОФС "Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Радионуклиды. В соответствии с ОФС "Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Зараженность вредителями запасов. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Определение степени зараженности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Сумма флавоноидов. Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Подготовка колонки. В химический стакан вместимостью 50 мл помещают 1,5 г порошка полиамида для колоночной хроматографии, заливают 30 мл воды, затем выливают через воронку диаметром 3,5 см в колонку шириной 1,2 см и высотой 25 см, в нижнюю часть которой помещают небольшой ватный тампон, предварительно смоченный водой. Колонку заполняют при открытом кране. Элюирование проводят со скоростью 4 мл/мин.

Раствор калия бихромата. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 0,03 г (точная навеска) калия бихромата, высушенного до постоянной массы, растворяют в серной кислоты растворе 5 мМ, доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Элюат. Аналитическую пробу сырья измельчают до получения однородной массы. Помещают 5,0 г (точная навеска) измельченного сырья в патрон из фильтровальной бумаги и экстрагируют спиртом 96% в аппарате Сокслета с экстрактором вместимостью 150 мл на водяной бане в течение 5 ч (20 - 25 сливов). Извлечение в круглодонной колбе вместимостью 100 мл упаривают по частям на водяной бане досуха. К сухому остатку в колбе прибавляют 5,0 мл натрия хлорида раствора 10%, нагревают на водяной бане в течение 2 мин, растирая осадок стеклянной палочкой до растворения. После охлаждения раствор количественно переносят на колонку с полиамидным сорбентом. Операцию проводят два раза. Слив производят через воронку с ватным тампоном, предварительно смоченным водой.

Колонку промывают 10 мл воды, затем убирают ватный тампон и промывают колонку еще 20 мл воды. Водный элюат отбрасывают. Флавоноиды элюируют 50 мл спирта 96% со скоростью 4 мл/мин. Когда темно-желтая зона (в УФ-свете) подойдет к нижней части сорбента, элюат собирают в мерную колбу вместимостью 50 мл. Объем извлечения доводят спиртом 96% до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл полученного элюата, объем раствора доводят спиртом 96% до метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 338 нм в кювете с толщиной слоя 1 см относительно спирта 96%.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора калия бихромата. В качестве раствора сравнения используют серной кислоты раствор 5 мМ.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на гнафалозид A в сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

где A - оптическая плотность испытуемого раствора;

A₀ - оптическая плотность раствора калия бихромата;

a₀ - навеска калия бихромата, г;

a - навеска сырья, г;

0,2020 - коэффициент пересчета калия бихромата на гнафалозид A;

1,03 - поправочный коэффициент на неполное элюирование гнафалозида A с полиамидного сорбента;

W - влажность сырья, %.

В соответствии с ОФС "Упаковка, маркировка и перевозка лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".

В соответствии с ОФС "Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".