"ФС.2.1.0515. Фармакопейная статья. Натамицин"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(1R,3S,5R,7R,8E,12R,14E,16E,18E,20E,22R,24S,25R,26S)-22-[(3-Амино-3,6-дидезокси--D-маннопиранозил)окси]-1,3,26-тригидрокси-12-метил-10-оксо-6,11,28-триоксатрицикло[22.3.1.0^5,7]октакоза-8,14,16,18,20-пентаен-25-карбоновая кислота.

Содержит не менее 90,0% и не более 102,0% натамицина C₃₃H₄₇NO₁₃ в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. От белого до белого с желтоватым оттенком цвета кристаллический порошок.

Растворимость. Растворим в диметилформамиде, растворим или мало растворим в уксусной кислоте ледяной, мало растворим в метаноле, практически нерастворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика натамицина на хроматограмме раствора стандартного образца натамицина (раздел "Количественное определение").

2. Спектрофотометрия (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Растворитель. Уксусная кислота ледяная - метанол 1:1000.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 50 мг субстанции и прибавляют 5 мл воды. Прибавляют 100 мл растворителя, встряхивают в темноте до растворения и доводят объем растворителем до метки. В мерную колбу вместимость 50 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объем растворителем до метки.

Раствор стандартного образца натамицина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг стандартного образца натамицина и прибавляют 2,5 мл воды. Прибавляют 50 мл растворителя, встряхивают в темноте до растворения и доводят объем растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объем растворителем до метки.

Спектры поглощения испытуемого раствора и раствора стандартного образца натамицина в области от 190 до 400 нм должны иметь максимумы и минимумы при одних и тех же длинах волн.

3. Качественная реакция. К 3 мг натамицина прибавляют 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной; должно появиться сине-фиолетовое окрашивание.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +243 до +259 в пересчете на безводное вещество (0,4% раствор субстанции в уксусной кислоте безводной, ОФС "Оптическое вращение").

pH. От 5,0 до 7,5 (1% суспензия в воде, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Все растворы, содержащие натамицин, используют свежеприготовленными и защищают от света.

Растворитель. Хлористоводородной кислоты раствор 0,1 М - метанол 1:99.

Подвижная фаза (ПФ). В коническую колбу вместимостью 1500 мл помещают 3,0 г аммония ацетата и 1,0 г аммония хлорида, растворяют в 760 мл воды, прибавляют 5,0 мл тетрагидрофурана и 240 мл ацетонитрила. Фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, прибавляют 5 мл тетрагидрофурана и обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин. Прибавляют 60 мл метанола, 25 мл воды, перемешивают, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора водой до метки. Фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг субстанции, растворяют в растворителе и выдерживают в течение 2 часов.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл раствора сравнения и доводят объем раствора водой до метки.

Примечание

Метиловый эфир натамицина: Метил[(1R,3S,5R,7R,8E,12R,14E,16E,18E,20E,22R,24S,25R,26S)-22-[(3-амино-3,6-дидезокси--D-маннопиранозил)окси]-1,3,26-тригидрокси-12-метил-10-оксо-6,11,28-триоксатрицикло[22.3.1.0^5,7]октакоза-8,14,16,18,20-пентаен-25-карбонат].

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Натамицин - 1 (около 14 мин), метиловый эфир натамицина - около 1,3.

Идентификация примесей. Для идентификации пика метилового эфира натамицина используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки пригодности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика натамицина должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

- разрешение (R) между пиками натамицина и метилового эфира натамицина должно быть не менее 2,5;

- фактор асимметрии пика (A_S) натамицина должен быть не более 1,3.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика метилового эфира натамицина не должна более чем в 2 раза превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 2,0%);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5%);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать четырехкратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 4,0%).

Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05%).

Вода. От 6,0% до 9,0% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы" (метод 3А), в зольном остатке, полученном в испытании "Сульфатная зола", с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Родственные примеси" со следующими изменениями.

Раствор стандартного образца натамицина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца натамицина, прибавляют 5 мл тетрагидрофурана и обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин. Прибавляют 60 мл метанола, 25 мл воды, перемешивают, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора водой до метки. Фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор стандартного образца натамицина и испытуемый раствор.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца натамицина:

- фактор асимметрии пика (A_S) натамицина должен быть не более 2,0;

- относительное стандартное отклонение площади пика натамицина должно быть не более 2,0% (6 введений).

Содержание натамицина C₃₃H₄₇NO₁₃ в пересчете на безводное и свободное от органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика натамицина на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика натамицина на хроматограмме раствора стандартного образца натамицина;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца натамицина, мг;

P - содержание натамицина в фармакопейном стандартном образце натамицина, %;

W - содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В плотно укупоренной упаковке, в защищенном от света месте.