"ФС.2.1.0425. Фармакопейная статья. Инозин пранобекс"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

9-(-D-Рибофуранозил)-1,9-дигидро-6H-пурин-6-она и 4-ацетамидобензоат (2RS)-2-гидрокси-N,N-диметилпропан-1-аминия (1:3).

Содержит не менее 22,8% и не более 25,2% инозина C₁₀H₁₂N₄O₅ и не менее 72,2% и не более 79,8% 4-ацетамидобензоат (2RS)-2-гидрокси-N,N-диметилпропан-1-аминия C₁₄H₂₂N₂O₄ в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

Растворимость. Легко растворим в воде, очень мало растворим или практически нерастворим в метаноле.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ВЭЖХ. Время удерживания двух основных пиков на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пиков инозина и 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора (раздел "Количественное определение").

2. Спектрофотометрия (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,15 г (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.

Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 200 до 300 нм должен иметь максимум при 261 нм.

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность раствора. Раствор 10 г субстанции в 100 мл воды должен быть прозрачным (ОФС "Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей").

pH раствора. От 6,0 до 7,0 (10% раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Подвижная фаза А (ПФА). Растворяют 2,65 г дикалия гидрофосфата в 800 мл воды, доводят значение pH фосфорной кислотой концентрированной до 2,5, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Метанол.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 100 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси 1. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси 1, растворяют в 4 мл аммиака раствора 4% и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор стандартного образца примеси 2. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси 2, растворяют в 10 мл метанола и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца примеси 1, 1,0 мл раствора стандартного образца примеси 2 и 1,0 мл раствора стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 24 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца инозина, растворяют в 50 мл воды, прибавляют 1,0 мл раствора стандартного образца примеси 1, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают на магнитной мешалке в течение 10 мин.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 4,4 мг фармакопейного стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.

Примечание

Примесь 1: 1,7-дигидро-6H-пурин-6-он [68-94-0].

Примесь 2: 4-аминобензойная кислоты [150-13-0].

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, стандартный раствор и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Инозин - 1 (около 6 мин); примесь 1 - около 0,9; примесь 2 - около 1,9; 4-ацетамидобензойная кислота - около 3.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примеси 1 и примеси 2 используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму стандартного раствора.

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика 4-ацетамидобензойной кислоты должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_S) между пиками инозина и гипоксантина должно быть не менее 2,0.

На хроматограмме стандартного раствора фактор асимметрии пика (A_S) примеси 1,4-ацетамидобензойной кислоты и примеси 2 должен быть не более 1,5.

Содержание примеси 1 в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика гипоксантина на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика гипоксантина на хроматограмме стандартного раствора;

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца гипоксантина, мг;

a₁ - навеска субстанции, мг;

P - содержание гипоксантина в фармакопейном стандартном образце гипоксантина, %;

0,24 - массовая доля инозина в субстанции.

Содержание примеси 2 в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика 4-аминобензойной кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика 4-аминобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора;

a₀ - навеска стандартного образца 4-аминобензойной кислоты, мг;

a₁ - навеска субстанции, мг;

P - содержание 4-аминобензойной кислоты в стандартном образце 4-аминобензойной кислоты, %;

0,48 - массовая доля 4-ацетамидобензойной кислоты в субстанции.

Содержание любой другой примеси в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика любой неидентифицированной примеси на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора;

a₀ - навеска стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, мг;

a₁ - навеска субстанции, мг;

P - содержание 4-ацетамидобензойной кислоты в стандартном образце 4-ацетамидобензойной кислоты, %.

- примесь 1 - не более 0,2%;

- примесь 2 - не более 0,2%;

- любая другая примесь - не более 0,1%;

- сумма примесей - не более 0,5%.

Не учитывают пики, площадь которых менее площади пика 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,025%).

Вода. Не более 0,5% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют 0,3 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы" (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании "Сульфатная зола", с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

1. Инозин и 4-ацетамидобензойная кислота. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Все растворы используют свежеприготовленными.

Подвижная фаза (ПФ). Смешивают 800 мл воды, 6,8 мл фосфорной кислоты концентрированной и 50 мл метанола. Количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл, помещают в ледяную баню, доводят значение pH натрия гидроксида раствором 5 М до 7,0 и доводят объем раствора водой до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 0,2 г (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем ПФ до метки.

Раствор стандартного образца инозина. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 60 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца инозина, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 120 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 5,0 мл раствора стандартного образца инозина и 5,0 мл раствора стандартного образца 4-ацетамидобензойной кислоты, доводят объем раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25,0 мл полученного раствора и доводят объем ПФ до метки.

Хроматографируют стандартный раствор и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. 4-ацетамидобензойная кислота - около 8 мин; инозин - около 13 мин.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора:

- разрешение (R_S) между пиками 4-ацетамидобензойной кислоты и инозина должно быть не менее 3,0;

- фактор асимметрии пика (A_S) 4-ацетамидобензойной кислоты и инозина должен быть не более 2,0.

Содержание 4-ацетамидобензойной кислоты C₉H₉NO₃ и инозина C₁₀H₁₂N₄O₅ в субстанции в пересчете на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика инозина или 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика инозина или 4-ацетамидобензойной кислоты на хроматограмме стандартного раствора;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца инозина или 4-ацетамидобензойной кислоты, мг;

P - содержание инозина в фармакопейном стандартном образце инозина или 4-ацетамидобензойной кислоты в фармакопейном стандартном образце ацетамидобензойной кислоты, %;

W - суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

2. N,N-диметиламино-2-пропанол. Определение проводят методом титриметрии (ОФС "Титриметрия (титриметрические методы анализа)").

Растворяют 0,25 г (точная навеска) субстанции в 40 мл воды и титруют 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС "Потенциометрическое титрование").

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты соответствует 10,317 мг N,N-диметиламино-2-пропанола C₅H₁₃NO.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте.