"ФС.2.1.0439. Фармакопейная статья. Ламивудин"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

4-Амино-1-[(2R,5S)-2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил]пиримидин-2(1H)-он.

Содержит не менее 97,5% и не более 102,0% ламивудина C₈H₁₁N₃O₃S в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

Описание. Белый или почти белый порошок.

<*> Проявляет полиморфизм.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Растворим в воде, умеренно растворим в метаноле, мало растворим в спирте 96%.

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца ламивудина.

Если спектры различаются, испытуемую субстанцию и стандартный образец по отдельности растворяют в минимальных объемах метанола, выпаривают досуха и записывают спектры сухих остатков.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика ламивудина на хроматограмме раствора стандартного образца ламивудина (раздел "Количественное определение").

Удельное вращение. От -97,0 до -99,0 в пересчете на безводное вещество (1% раствор субстанции в метаноле, ОФС "Оптическое вращение").

Оптическая плотность. Оптическая плотность 5% раствора субстанции, измеренная при длине волны 440 нм в кювете с толщиной слоя 4 см, не должна превышать 0,0015 (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

1. Энантиомерная чистота (Примесь D). Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Раствор аммония ацетата. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 7,7 г аммония ацетата, растворяют в 900 мл воды и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза (ПФ). Метанол - раствор аммония ацетата 50:950.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2,5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца ламивудина для проверки пригодности хроматографической системы, содержащей примесь D, растворяют в ПФ и доводят объем раствора ПФ до метки.

Примечание

Примесь D: 4-Амино-1-[(2S,5R)-2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил]пиримидин-2(1H)-он [134680-32-3].

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Ламивудин - 1 (около 8 минут); примесь D - около 1,2.

Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси D используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки пригодности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы: отношение максимум/минимум (p/v) между пиками ламивудина и примеси D должно быть не менее 15.

Допустимое содержание примеси D. Не более 0,3%. Содержание примеси D в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС "Хроматография").

Вычисляется сумма площадей пиков в процентах только примесей с относительным временем удерживания от 1,2 до 1,5, за вычетом процентного содержания примеси B, полученного в испытании "Родственные примеси".

2. Другие примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Все растворы используют свежеприготовленными.

Буферный раствор. Растворяют 1,9 г аммония ацетата в 900 мл воды, доводят значение pH уксусной кислотой ледяной до 3,8, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза (ПФ). Метанол - буферный раствор 50:950.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг субстанции, растворяют в ПФ и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор стандартного образца примеси C. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5 мг (точная навеска) салициловой кислоты, растворяют в ПФ и доводят объем раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5 мг (точная навеска) цитозина и 5 мг (точная навеска) урацила, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2,0 мл полученного раствора, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца ламивудина для проверки разделительной способности хроматографической системы, содержащей примеси A и B, растворяют в 2,0 мл ПФ, добавляют 1,0 мл стандартного раствора и доводят объем раствора ПФ до метки.

Примечание

Примесь A: rac-(2R,5S)-5-[4-амино-2-оксо-5-фторпиримидин-1(2H)-ил]-1,3-оксатиолан-2-карбоновая кислота [173602-25-0].

Примесь B: 4-амино-1-[(2R,5R)-2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил]пиримидин-2(1H)-он, CAS 139757-68-9 и 4-амино-1-[(2S,5S)-2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил]пиримидин-2(1H)-он [136846-20-3].

Примесь C (салициловая кислота): 2-Гидроксибензойная кислота [69-72-7].

Примесь E (цитозин): 4-аминопиримидин-2(1H)-он [71-30-7].

Примесь F (урацил): Пиримидин-2,4(1H,3H)-дион [66-22-8].

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор стандартного образца примеси C и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Ламивудин - 1 (около 8 минут); примесь E - около 0,28; примесь F - около 0,32;. примесь A - около 0,36; примесь B - около 0,91; примесь J - около 1,45; примесь C - около 2,32.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей A, B, E и F используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы. Для идентификации пика примеси C используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора стандартного образца примеси C.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы:

- разрешение (R_s) между пиками примесей F и A должно быть не менее 1,5;

- разрешение (R_s) между пиками примеси B и ламивудина должно быть не менее 1,5.

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания примесей площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие коэффициенты: примесь E - 0,6; примесь F - 2,2; примесь J - 2,2.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика примеси A не должна превышать трехкратную площадь пика ламивудина на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,3%);

- площадь пика примеси B не должна превышать двухкратную площадь пика ламивудина на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,2%);

- площадь пика примеси C не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора стандартного образца примеси C (не более 0,1%);

- площадь пика любой другой примеси не должны превышать площадь пика ламивудина на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1%);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать шестикратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,6%).

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).

Вода. Не более 2,0% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы" (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании "Сульфатная зола", с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Родственные примеси. Другие примеси" со следующими изменениями.

Раствор стандартного образца ламивудина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50,0 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца ламивудина, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Хроматографируют раствор стандартного образца ламивудина и испытуемый раствор.

Содержание ламивудина C₈H₁₁N₃O₃S в субстанции в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика ламивудина на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика ламивудина на хроматограмме раствора стандартного образца ламивудина;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца ламивудина, мг;

W - суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;

P - содержание ламивудина в фармакопейном стандартном образце ламивудина, %.

В сухом защищенном от света месте.