"ФС.2.1.0645. Фармакопейная статья. Ванкомицина гидрохлорид. Ванкомицин"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

(1S,2R,18R,19R,22S,25R,28R,40S)-22-(2-Амино-2-оксоэтил)-48-{[2-O-(3-C-амино-2,3,6-тридезокси-3-метил--L-ликсо-гексопиранозил)--D-глюкопиранозил]окси}-2,18,32,35,37-пентагидрокси-19-[(2R)-4-метил-2-(метиламино)пентанамидо]-20,23,26,42,44-пентаоксо-5,15-дихлор-7,13-диокса-21,24,27,41,43-пентаазаоктацикло[26.14.2.2^3,6.2^14,17.1^8,12.1^29,33.0^10,25.0^34,39]пентаконта-3,5,8(48),9,11,14,16,29(45),30,32,34,36,38,46,49-пентадекаен-40-карбоновой кислоты гидрохлорид (1:1).

Содержит не менее 900 мкг/мг ванкомицина C₆₆H₇₅Cl₂N₉O₂₄ в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

Вещество, продуцируемое некоторыми штаммами Amycolatopsis orientalis.

Описание. Белый или почти белый микрокристаллический порошок. <*> Гигроскопичен.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Легко растворим в воде, очень мало растворим или практически нерастворим в спирте 96%.

1. ИК-спектрометрия. (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца ванкомицина.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора Б должно соответствовать времени удерживания основного пика (Ванкомицин В) на хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы (раздел "Ванкомицин В").

3. Качественная реакция. Раствор субстанции 10% должен давать характерную реакцию А на хлориды (ОФС "Общие реакции на подлинность").

Прозрачность раствора. Раствор 2 г субстанции в 20 мл воды должен быть прозрачным (ОФС "Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей").

Оптическая плотность. Оптическая плотность раствора, полученного в испытании "Прозрачность раствора", измеренная в максимуме поглощения при длине волны 450 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, не должна превышать 0,1 (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

pH раствора. От 2,5 до 4,5 (5% раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Приготовление испытуемого раствора. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1 г субстанции, растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Ванкомицин В. Не менее 91,0%. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Буферный раствор. Растворяют 2 мл триэтиламина в воде и доводят значение pH фосфорной кислотой концентрированной до 3,2, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза А (ПФА). Тетрагидрофуран - ацетонитрил - буферный раствор 10:70:920.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Тетрагидрофуран - ацетонитрил - буферный раствор 10:290:700.

Испытуемый раствор А. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в ПФА и доводят объем раствора ПФА до метки.

Испытуемый раствор Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,0 мл испытуемого раствора А и доводят объем раствора ПФА до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 30 мг фармакопейного стандартного образца ванкомицина гидрохлорида, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки. Раствор переносят в коническую колбу с пришлифованной пробкой, нагревают до 65 °C и выдерживают при этой температуре в течение 24 ч, после чего охлаждают до комнатной температуры. Раствор используют в течение 4 ч.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл испытуемого раствора Б и доводят объем раствора ПФА до метки.

Уравновешивают колонку в течение не менее 30 мин смесью ПФА - ПФБ в соотношении 0:100, уравновешивают колонку в течение 15 мин смесью ПФА - ПФБ в соотношении 100:0.

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, испытуемые растворы А и Б.

Время удерживания ванкомицина В - около 11 мин.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика ванкомицина В должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_S) между двумя основными пиками должно быть не менее 5,0.

На хроматограмме испытуемого раствора Б:

- фактор асимметрии пика (A_S) ванкомицина В должен быть не более 1,6;

- относительное стандартное отклонение площади пика ванкомицина В должно быть не более 2,0% (6 введений);

- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику ванкомицина В, должна составлять не менее 2000 теоретических тарелок.

Содержание ванкомицина В в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S_Б - площадь пика ванкомицина В на хроматограмме испытуемого раствора Б;

- сумма площадей пиков всех примесей на хроматограмме испытуемого раствора А;

25 - коэффициент разведения испытуемого раствора А.

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,2% от площади основного пика на хроматограмме испытуемого раствора А, а также пики, соответствующие пикам на хроматограмме ПФ.

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Ванкомицин В".

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S_А - площадь пика любой примеси на хроматограмме испытуемого раствора А;

S_Б - площадь пика ванкомицина В на хроматограмме испытуемого раствора Б;

- сумма площадей пиков всех примесей на хроматограмме испытуемого раствора А;

25 - коэффициент разведения испытуемого раствора А.

- любая примесь - не более 4,0%;

- сумма примесей - не более 9,0%.

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,1% от площади основного пика на хроматограмме испытуемого раствора А, а также пики, соответствующие пикам на хроматограмме ПФ.

Вода. Не более 5,0% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 1,0% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,003%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы" (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании "Сульфатная зола". Для приготовления эталонного раствора к 3 мл свинец стандартный раствор 10 мкг/мл прибавляют 7 мл воды.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС "Аномальная токсичность"). Тест-доза - 4 мг субстанции, растворенной в 0,5 мл воды для инъекций, на мышь, внутривенно со скоростью 0,1 мл/с. Срок наблюдения - 48 ч.

Бактериальные эндотоксины. Не более 0,25 ЕЭ на 1 мг субстанции (Ванкомицин В) (ОФС "Бактериальные эндотоксины").

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Определение проводят микробиологическим методом в соответствии с ОФС "Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар".

В герметично укупоренной упаковке в защищенном от света месте.