"ФС.2.1.0390. Фармакопейная статья. Варфарин натрия клатрат. Варфарин"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

2-Оксо-3-[(1RS)-3-оксо-1-фенилбутил]-2H-1-бензопиран-4-олят натрия-пропан-2-ол(2:1).

Содержит не менее 97,0% и не более 102,0% варфарина натрия C₁₉H₁₅NaO₄ в пересчете на безводное и свободное от 2-пропанола и остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

<*> Гигроскопичен.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Очень легко растворим в воде, легко растворим в спирте, растворим в ацетоне, очень мало растворим в метиленхлориде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца варфарина натрия клатрата.

2. ГХ (ОФС "Газовая хроматография"). Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика 2-пропанола на хроматограмме стандартного раствора (раздел "2-Пропанол").

3. Качественная реакция. Растворяют 1 г субстанции в 10 мл воды, прибавляют 5 мл азотной кислоты концентрированной, фильтруют, прибавляют 2 мл калия дихромата раствора 0,5% и встряхивают в течение 5 мин; через 20 мин должно появиться зеленовато-голубое окрашивание.

4. Качественная реакция. Субстанция должна давать характерную реакцию Б на натрий (ОФС "Общие реакции на подлинность").

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность раствора. Раствор 1 г субстанции в 20 мл воды должен быть прозрачным (ОФС "Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей").

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании "Прозрачность раствора", должен быть бесцветным (ОФС "Степень окраски жидкостей", метод 2).

pH. От 7,6 до 8,6 (1% раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Растворитель. Метанол - вода 250:750.

Подвижная фаза (ПФ). Уксусная кислота ледяная - ацетонитрил - вода 10:250:750.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 40 мг субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2 мг примеси B и 2 мг примеси C, растворяют в 25 мл метанола и доводят объем раствора водой до метки.

Примечание

Примесь B: 4-гидрокси-2H-1-бензопиран-2-он [1076-38-6].

Примесь C: (3E)-4-фенилбут-3-ен-2-он [1896-62-4].

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Варфарин - 1 (около 9 мин); примесь B - около 0,4; примесь C - около 0,6.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей B и C используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R) между пиками примеси B и примеси C должно быть не менее 2,0.

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь B - 0,5; примесь C - 0,4.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика каждой из примесей B и C не должна более чем в 1,5 раза превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15%);

- площадь пика любой примеси не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1%);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать трехкратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,3%).

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее половины площади пика варфарина на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).

2-Пропанол. От 8,0 до 8,5%. Определение проводят методом ГХ (ОФС "Газовая хроматография").

Раствор внутреннего стандарта. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 0,17 г пропанола и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.

Испытуемый раствор. Растворяют 0,1 г субстанции в 2,0 мл воды и прибавляют 2,0 мл раствора внутреннего стандарта.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 0,17 г 2-пропанола и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки. Смешивают 2,0 мл полученного раствора и 2,0 мл раствора внутреннего стандарта.

Хроматографируют контрольный, стандартный и испытуемый растворы.

Относительное время удерживания соединений. 2-Пропанол - 1; пропанол - около 1,5.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора:

- разрешение (R_s) между пиками 2-пропанола и пропанола должно быть не менее 5,0;

- фактор асимметрии пика (A_s) 2-пропанола должен быть не более 1,3;

- относительные стандартные отклонения площадей пиков 2-пропанола и пропанола должны быть не более 2,0% (6 введений).

Допустимое содержание примесей. Содержание 2-пропанола в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где B₁ - отношение площади пика 2-пропанола к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме испытуемого раствора;

B₀ - отношение площади пика 2-пропанола к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме стандартного раствора;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска 2-пропанола, мг;

P - содержание основного вещества в 2-пропаноле, %.

Фенольные кетоны. Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,25 г (точная навеска) субстанции, растворяют в натрия гидроксида растворе 2% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. Раствор используют сразу после приготовления.

Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 385 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, используя в качестве раствора сравнения натрия гидроксида раствор 2%.

Оптическая плотность испытуемого раствора не должна превышать 0,2.

Вода. Не более 0,3% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют 2,5 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы" (метод 3Б) в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1 г (точная навеска) субстанции, растворяют в натрия гидроксида растворе 0,01 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 308 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, используя в качестве раствора сравнения натрия гидроксида раствор 0,01 М.

Содержание варфарина натрия C₁₉H₁₅NaO₄ в процентах (X) в пересчете на безводное, свободное от 2-пропанола и остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:

где A₁ - оптическая плотность испытуемого раствора;

a₁ - навеска субстанции, г;

431 - удельный показатель поглощения варфарина натрия, ;

W - суммарное содержание воды, 2-пропанола и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В сухом, защищенном от света месте.