"ФС.2.1.0206. Фармакопейная статья. Хлорамбуцил"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание")

4-{4-[Бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота.

Содержит не менее 98,5% и не более 101,0% хлорамбуцила C₁₄H₁₉Cl₂NO₂ в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

Растворимость. Легко растворим в спирте 96%, практически нерастворим в воде.

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции - в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца хлорамбуцила.

2. Качественная реакция. В 2 мл спирта 96% растворяют 50 мг субстанции, прибавляют 0,5 мл серебра нитрата раствора 0,1 М и нагревают в течение 2 мин на кипящей водяной бане; должен выпасть белый творожистый осадок, растворимый в растворе аммиака.

Температура плавления. От 64 до 68 °C (ОФС "Температура плавления", метод 1).

1. Примесь G. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Испытуемый раствор и растворы сравнения используют свежеприготовленными или хранят при температуре 4 - 8 °C в защищенном от света месте не более суток.

Подвижная фаза (ПФ). Метанол - трифторуксусной кислоты раствор 1% 500:500.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 2 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца хлорамбуцила, содержащего примесь G, растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Примечание

Примесь G: 4-{2-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота [178481-89-5] или 4-{3-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота [134862-11-6].

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Хлорамбуцил - 1 (около 11 мин); примесь G - около 1,2.

Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси G используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки пригодности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы разрешение (R_S) между пиками хлорамбуцила и примеси G должно быть не менее 1,5.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора площадь пика примеси G не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,4%).

2. Другие примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Испытуемый раствор и растворы сравнения используют свежеприготовленными и защищают от света.

Подвижная фаза А (ПФА). Растворяют 1,9 г аммония ацетата в 800 мл воды и доводят значение pH уксусной кислотой до 3,9, переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.

Растворитель. Хлористоводородная кислота 1% - ацетонитрил 10:90.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца хлорамбуцила для проверки пригодности хроматографической системы, содержащего примеси B и E, растворяют в растворителе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Примечание

Примесь B: 4-{4-[(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота [116505-53-4].

Примесь E: 4-[4-({2-[(4-{4-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутаноил)окси]этил}(2-хлорэтил)амино)фенил]бутановая кислота [1988791-13-4].

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Хлорамбуцил - 1 (около 12 мин); примесь B - около 0,5; примесь E - около 1,4.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей B и E используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы и хроматограмму, прилагаемую к стандартному образцу хлорамбуцила для проверки пригодности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (R_S) между пиками примеси B и хлорамбуцила должно быть не менее 5,0.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика примеси B не должна более чем в 4 раза превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,4%);

- площадь пика примеси E не должна более чем в 6 раз превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,6%);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1%);

- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать десятикратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0%).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).

Вода. Не более 0,5% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Сульфаты. Не более 0,05% (ОФС "Сульфаты", метод 1). К 0,3 г субстанции прибавляют 15 мл воды, встряхивают до растворения и фильтруют.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы" (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании "Сульфатная зола", с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Определение проводят методом титриметрии (ОФС "Титриметрия (титриметрические методы анализа)").

Растворяют 0,3 г (точная навеска) субстанции в 25 мл предварительно нейтрализованного спирта 96% и титруют 0,1 М раствором натрия гидроксида до появления розового окрашивания (индикатор - 0,1 мл фенолфталеина раствора 1%).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида соответствует 30,42 мг хлорамбуцила C₁₄H₁₉Cl₂NO₂.

В герметично укупоренной упаковке, в защищенном от света месте.