"ФС.2.1.0206.18. Фармакопейная статья. Хлорамбуцил"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том III")

4-{4-[Бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота

Содержит не менее 98,5% и не более 101,0% хлорамбуцила C₁₄H₁₉Cl₂NO₂ в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

При работе с хлорамбуцилом следует принимать, меры, предохраняющие от попадания субстанции на кожу и слизистые оболочки.

Описание. Белый или почти белый со слабым розоватым оттенком кристаллический порошок.

Растворимость. Легко растворим в 96% спирте и хлороформе, практически нерастворим в воде.

1. ИК-спектрометрия. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца хлорамбуцила.

2. Качественная реакция. В пробирку помещают 20 мг субстанции и прибавляют 4 капли калия дихромата раствора в серной кислоте. Пробирку накрывают фильтровальной бумагой, смоченной свежеприготовленным нитропруссида натрия раствором 1% и каплей пиперидина, и нагревают на небольшом пламени горелки; должно появиться синее пятно.

3. Качественная реакция. В 2 мл спирта 96% растворяют 50 мг субстанции, прибавляют 0,5 мл 0,1 М раствора серебра нитрата и нагревают в течение 2 минут на кипящей водяной бане; должен выпасть белый творожистый осадок, растворимый в растворе аммиака.

Температура плавления. От 64 до 68 °C (ОФС "Температура плавления").

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Испытуемый раствор и растворы сравнения используют свежеприготовленными или хранят при температуре 4 - 8 °C в защищенном от света месте не более суток.

Подвижная фаза (ПФ). Метанол - трифторуксусной кислоты раствор 1% 50:50.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в метаноле и доводят объем раствора метанолом до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг стандартного образца хлорамбуцила, содержащего примесь G, растворяют в метаноле и доводят объем раствора метанолом до метки.

Примечание:

примесь G: 4-{2-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота, CAS 178481-89-5 или 4-{3-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота, CAS 134862-11-6.

Хроматографируют испытуемый раствор, раствор сравнения и раствор для проверки пригодности хроматографической системы.

Для идентификации пика примеси G используется хроматограмма раствора для проверки пригодности хроматографической системы.

Относительные времена удерживания соединений. Хлорамбуцил - 1 (около 11 мин); примесь G - около 1,2.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы разрешение (R) между пиками хлорамбуцила и примеси G должно быть не менее 1,5.

Допустимое содержание примеси G. На хроматограмме испытуемого раствора площадь пика примеси G должна быть не более площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,4%).

Испытуемый раствор и растворы сравнения защищают от света и используют свежеприготовленными.

Подвижная фаза А (ПФА). В химический стакан вместимостью 1 л помещают 1,9 г аммония ацетата, растворяют в 800 мл воды, доводят pH раствора уксусной кислотой до 3,9, переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1 л и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил для хроматографии.

Смесь растворителей. Хлористоводородная кислота 1% - ацетонитрил для хроматографии 10:90.

Испытуемый раствор. Около 25 мг субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в смеси растворителей и доводят объем раствора смесью растворителей до метки.

Раствор сравнения А. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора смесью растворителей до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора смесью растворителей до метки.

Раствор сравнения Б. В мерную колбу вместимостью 20,0 мл помещают 5 мг стандартного образца хлорамбуцила для проверки пригодности системы, содержащего примеси B и E, растворяют в смеси растворителей и доводят объем раствора смесью растворителей до метки.

Примечание:

примесь B: 4-{4-[(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота, CAS 116505-53-4;

примесь E: 4-[4-({2-[(4-{4-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутаноил)окси]этил}(2-хлорэтил)амино)фенил]бутановая кислота, CAS 1988791-13-4.

Хроматографируют испытуемый раствор и растворы сравнения А и Б.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей B и E используются хроматограммы раствора сравнения Б и прилагаемая к стандартному образцу хлорамбуцила для проверки пригодности системы.

Относительное время удерживания соединений. Хлорамбуцил - 1 (около 12 мин); примесь B - около 0,5; примесь E - около 1,4.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора сравнения Б разрешение (R) между пиками хлорамбуцила и примеси B должно быть не менее 5,0.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика примеси B не должна превышать 4-кратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения А (не более 0,4%);

- площадь пика примеси E не должна превышать 6-кратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения А (не более 0,6%);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения А (не более 0,1%);

- суммарная площадь пиков всех примесей должна быть не более 10-кратной площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения А (не более 1,0%).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения А (менее 0,05%).

Вода. Не более 0,5% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют около 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Сульфаты. Не более 0,05% (ОФС "Сульфаты", метод 1). К 0,3 г субстанции приливают 15 мл воды, встряхивают до растворения и фильтруют. Для определения используют 10 мл фильтрата.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют около 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы", метод 2, в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Определение проводят методом титриметрии.

Около 0,3 г субстанции (точная навеска) помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 25 мл предварительно нейтрализованного спирта 96% (индикатор - 0,1 мл фенолфталеина раствора 1%) и титруют 0,1 М раствором натрия гидроксида до появления розового окрашивания.

1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида соответствует 30,42 мг хлорамбуцила C₁₄H₁₉Cl₂NO₂.

Хранение. В плотно закрытой упаковке, в защищенном от света месте при температуре от +8 до +15 °C.