"ОФС.1.7.1.0012.18. Общая фармакопейная статья. Интерфероны"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание")

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на интерфероны, полученные с использованием технологии рекомбинантной ДНК с применением в качестве экспрессионной системы бактериальных клеток или клеток млекопитающих.

Интерфероны (ИФН) относятся к группе цитокинов и представляют собой глобулярные белки, которые являются полифункциональными биорегуляторами широкого спектра действия.

Основные биологические свойства интерферонов проявляются в их противовирусном, антипролиферативном и иммуномодулирующем действии.

По происхождению различают три типа интерферонов: - лейкоцитарный (продуцируется лейкоцитами, плазмоцитоидными дендритными клетками, моноцитами/макрофагами), - фибробластный (продуцируется фибробластами и эпителиальными клетками), - иммунный (продуцируется T-лимфоцитов и натуральными киллерами).

По способу получения ИФН делятся на природные (ИФН первого поколения) и рекомбинантные, полученные с помощью генно-инженерной технологии (ИФН второго поколения).

Природный интерферон человеческий лейкоцитарный представляет собой группу белков (интерфероны альфа-типа), синтезируемых лейкоцитами, полученными из крови клинически здоровых доноров в ответ на воздействие вируса-индуктора интерферона (вирус болезни Ньюкасла или вирус Сендай). Требования к производству и оценке качества препаратов этого типа описаны в ФС "Интерферон человеческий лейкоцитарный".

Требования, приведенные в настоящей фармакопейной статье, могут быть дополнены с учетом специфических свойств лекарственного средства и технологии его производства.

Данная статья не распространяется на модифицированные (пегилированные) интерфероны.

Интерфероны альфа 

Эмпирическая формула: C₈₆₀H₁₃₄₉N₂₂₇O₂₅₅S₉.

Рекомбинантные представляют собой негликозилированные белки, состоящие из 165 аминокислот и содержащие две дисульфидные связи: между остатками цистеина в 1-м и 98-м положениях и в 29-м и 138-м положениях. Молекулярная масса негликозилированного белка составляет около 19300 Да. Продуцентом являются генетически модифицированные клетки Esherichia coli, полученные путем трансформации исходного штамма вектором, содержащим ген человека. В структуре молекулы, образующейся при синтезе рекомбинантного белка рибосомой бактериальной клетки, имеется N-концевой метионин в отличие от эндогенного интерферона, который N-концевым аминокислотным остатком содержит цистеин, связанный дисульфидной связью с 98 цистеином белка. Подсемейства 2a и 2b различаются аминокислотами в положениях 23: лизин и аргинин, соответственно.

Интерфероны бета 

Эмпирическая формула: C₉₀₈H₁₄₀₆N₂₄₆O₂₅₂S₇.

Интерферон бета-1a идентичен эндогенному ИФН человека, представляет собой гликозилированный белок, состоящий из 166 аминокислотных остатков с одной внутрицепочечной дисульфидной связью, имеющий один сайт N-гликозилирования по аспарагиновому остатку в позиции 80 и цистеин в позиции 17. Молекулярная масса 22 500 Да. Известны 6 гликоформ , обусловленных дифференциальным гликозилированием сайта и отличающихся количеством олигосахаридов и степенью их сиалирования. Продуцент - генетически модифицированная культура клеток яичника китайского хомячка (CHO).

Эмпирическая формула: C₉₀₃H₁₃₉₉N₂₄₅O₂₅₂S₅.

Интерферон бета-1b модифицирован по отношению к природному, представляет собой негликозилированный белок, состоящий из 166 аминокислотных остатков той же последовательности, за исключением позиции 17 - серин. Не содержит N-концевого метионина. Молекулярная масса 18000 - 20000 Да. Продуцент рекомбинантного - клетки Escherichia coli, в геном которых внедрен ген человеческого .

Интерферон-гамма 

Интерферон-гамма представляет собой белок, молекула которого состоит из нековалентно связанного димера двух одинаковых мономеров. Состоит из 140 аминокислотных остатков и содержит N-концевой метионин. Молекулярная масса 16 495 Да. Отличается от нативного белка делецией 10 аминокислотных остатков на C-конце молекулы и заменой кластера KRKR на KGSA. Метод получения - рекомбинантная технология.

Эмпирическая формула : C₇₃₄H₁₁₆₆N₂₀₄O₂₁₆S₅.

Производство ИФН осуществляется с применением технологии рекомбинантной ДНК и должно проводиться в условиях соблюдения правил надлежащей производственной практики.

Экспрессирующая конструкция, штамм-продуцент, производство лекарственного средства, включая банки штаммов-продуцентов, должны быть охарактеризованы в объеме и в соответствии с требованиями, изложенными в ОФС "Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК".

В качестве клеток-хозяина для создания штамма-продуцента ИФН используются бактериальные клетки или клетки млекопитающих. Производство основано на системе банков клеток-продуцентов - Главного банка клеток (ГБК) и Рабочего банка клеток (РБК).

Используемые в процессе производства ИФН клетки и материалы биологического происхождения должны быть охарактеризованы в объеме и в соответствии с требованиями, изложенными в ОФС "Требования к клеточным культурам - субстратам производства биологических лекарственных препаратов" и ОФС "Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК".

Требования к испытаниям фармацевтической субстанции регламентируются нижеприведенными показателями, требованиями ОФС "Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК".

Описание. Должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят визуально.

Подлинность. Подтверждается с помощью комплекса методов, позволяющих специфически идентифицировать ИФН с использованием стандартных образцов. Подлинность ИФН должна быть подтверждена биологическими методами по оценке специфической противовирусной активности, в реакции нейтрализации противовирусной активности ИФН моно- или поликлональными антителами против соответствующего типа ИФН, в соответствии с ОФС "Биологические методы испытания препаратов интерферонов с использованием культур клеток" и/или методом иммуноферментного анализа, а также на уровне структуры белка и его пространсляционных модификаций с применением физико-химических методов исследования: пептидным картированием, карбогидратным картированием (для гликозилированных белков), электрофорезом в полиакриламидном геле, изоэлектрическим фокусированием, обращенно-фазовой и эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографией, методом масс-спектрометрического анализа и др.

Выбор методов оценки подлинности должен быть обоснован. Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Для испытаний могут использоваться методы в соответствии с ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография", ОФС "Капиллярный электофорез", ОФС "Электрофорез в полиакриламидном геле", ОФС "Изоэлектрическое фокусирование", ОФС "Определение подлинности и чистоты биологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот", ОФС "Метод иммуноферментного анализа" и другие валидированные методики, указанные в нормативной документации.

Прозрачность. Должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей".

Цветность. Должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Степень окраски жидкостей".

pH. Приводится допустимый интервал значений pH. Субстанция должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия".

Чистота. Родственные соединения и посторонние примеси. Чистота субстанции оценивается комплексом обоснованных (не менее 2 - 3) взаимодополняющих методов, позволяющих охарактеризовать содержание остаточных количеств восстановленной формы ИФН, димеров и агрегатов, продуктов деградации (окисленные и дезамидированные формы).

Содержание родственных соединений и посторонних примесей в субстанции оценивают обоснованными методами. Нормативные требования и методика испытаний должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию.

Остаточные белки клетки-хозяина. Содержание белков штамма-продуцента должно соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Остаточные белки клетки-хозяина могут быть определены иммунохимическими методами (например, радиоиммунологическим или ИФА). Методика должна быть указана в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию.

Остаточная ДНК штамма-продуцента. Содержание остаточных белков клеток-хозяина и ДНК штамма-продуцента не должно превышать значений, установленных в фармакопейной статье или в нормативной документации, и не превышать показателей, определенных международными требованиями.

Определение проводят методом гибридизации с зондами, меченными биотином, дигоксигенином или другой меткой. Возможно использование готовых наборов реагентов, с применением валидированной методики.

Микробиологическая чистота. Должна соответствовать требованиям, предъявляемым к фармацевтическим субстанциям, предназначенным для приготовления лекарственных форм для парентерального применения. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Стерильность. Субстанция должна быть стерильной, если хранится после стерилизующей фильтрации. Испытания стерильности проводят методом прямого посева или методом мембранной фильтрации в соответствии с ОФС "Стерильность".

Бактериальные эндотоксины. Указывают допустимое содержание бактериальных эндотоксинов и метод определения. Содержание бактериальных эндотоксинов должно соответствовать нормам, определенным в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Бактериальные эндотоксины".

Пирогенность (если применимо). Субстанция должна соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Пирогенность".

Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксична. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Аномальная токсичность", если нет других указаний в нормативной документации.

Белок. Содержание белка должно соответствовать нормам, определенным фармакопейной статьей или нормативной документацией на субстанцию. Испытания проводят любым пригодным методом, например, в соответствии с ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография", ОФС "Хроматография", ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой области", ОФС "Определение белка" или в соответствии с валидированной методикой, приведенной в фармакопейной статье или нормативной документации на фармацевтическую субстанцию. Выбор метода определения белка должен быть обоснован.

Специфическая активность. Субстанция должна обладать противовирусной активностью и выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Количественное определение активности ИФН проводят с использованием биологического метода in vitro на соответствующей линии клеток, чувствительных к ИФН в соответствии с ОФС "Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием культур клеток".

Методика испытания должна быть приведена в фармакопейной статье или нормативной документации.

Удельная активность. Величина показателя должна соответствовать нормам, определенным в фармакопейной статье или нормативной документации на субстанцию. Определяют расчетным методом как частное от деления величины специфической активности (МЕ/мл) на величину содержания белка (мг/мл).

Транспортирование, хранение. В герметичном контейнере при температуре, указанной в нормативной документации. Для замороженного раствора недопустимо повторное замораживание и оттаивание.

Лекарственные препараты на основе рекомбинантных ИФН выпускают в различных формах: капли назальные, капли глазные, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций, лиофилизат для приготовления суспензии для приема внутрь, лиофилизат в капсулах, раствор для инъекций, суппозитории, мази, гели.

Форма выпуска препарата определяет перечень показателей качества и методы их определения.

Препараты ИФН для парентерального введения широко используются в практике здравоохранения для лечения многих тяжелых вирусных заболеваний, в том числе вирусных гепатитов B, C, D, рассеянного склероза, а также большого круга онкологических заболеваний.

Препараты для местного применения (мази, суппозитории, капли и т.д.) при ряде нозологических форм способны обеспечить накопление больших концентраций препарата непосредственно в очаге поражения при отсутствии побочных эффектов, свойственных парентеральному введению высоких доз интерферона. За счет высокой концентрации в очаге инфекции достигается выраженный местный противовирусный и иммуностимулирующей эффект. Системное всасывание препаратов незначительное.

Низкая биодоступность лекарственных средств при интраназальном введении связана с функционированием особого семейства белков из 25 протеинов, входящих в состав слизистой оболочки полости носа и контролирующих транспорт всех молекулярных и клеточных объектов, проникающих через слизистую.

Лекарственные формы препаратов ИФН для ректального применения эффективны для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний урогенитального тракта, а также в составе комплексной терапии для лечения других инфекционных заболеваний вирусной этиологии. Эти препараты оказывают местное и системное действие, их биодоступность составляет более 80%. При ректальном введении отсутствуют побочные эффекты, возникающие при парентеральном введении препаратов ИФН, не образуются антитела, нейтрализующие противовирусную активность.

Препараты для местного применения и ректального применения в большинстве своем являются комбинированными и, в зависимости от состава препарата, нормативная документация должна содержать показатели, характеризующие "Подлинность" и "Количественное содержание" всех основных действующих веществ.

Требования к испытаниям лекарственных препаратов ИФН регламентируются нижеприведенными показателями, а также требованиями ОФС "Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК" и ОФС на соответствующую лекарственную форму (ОФС "Лекарственные формы для парентерального применения", ОФС "Аэрозоли и спреи", ОФС "Глазные лекарственные формы", ОФС "Мази" и др.).

Описание. Приводится описание свойств соответствующей лекарственной формы препарата соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации.

Подлинность. Подлинность подтверждается комплексом (2 - 3) взаимодополняющих методов (один из которых - определение специфической активности), позволяющих специфически идентифицировать ИФН с использованием стандартных образцов. Подлинность ИФН может быть подтверждена биологическим методом в реакции нейтрализации противовирусной активности ИФН моно- или поликлональными антителами против соответствующего типа ИФН (ОФС "Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием культур клеток"), а также следующими физико-химическими методами: изоэлектрическим фокусированием, обращенно-фазовой и эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографией и другими методами с доказанной специфичностью.

Выбор методов оценки подлинности должен быть обоснован. Методики должны быть приведены в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат. Для испытаний могут использоваться методы в соответствии с ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография", ОФС "Изоэлектрическое фокусирование", ОФС "Определение подлинности и чистоты биологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот", ОФС "Метод иммуноферментного анализа" и другие валидированные методики, указанные в нормативной документации.

Время восстановления препарата (для лиофилизированных форм). Время восстановления лекарственного препарата указывается в фармакопейной статье или нормативной документации. Условия проведения испытания и методы должны быть указаны в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат.

Прозрачность. Должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей".

Цветность. Должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Степень окраски жидкостей".

pH. Приводится допустимый интервал значений pH. Лекарственный препарат должен соответствовать нормам, определенным в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия".

Извлекаемый объем (для парентеральных форм). Извлекаемый объем должен быть не менее номинального и должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье и нормативной документации. Определение проводят в соответствии с ОФС "Извлекаемый объем для лекарственных форм для парентерального применения".

Герметичность (если применимо). Лекарственный препарат должен выдерживать требования, определенные в фармакопейной статье или нормативной документации. Методика испытания должна быть приведена в нормативной документации.

Осмолярность (Осмоляльность) (если применимо). Лекарственный препарат должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации. Определение проводят в соответствии с ОФС "Осмолярность".

Примечание

При необходимости показатель "Осмолярность" может быть заменен на показатель "Осмоляльность" с приведением обоснования замены.

Механические включения. Видимые механические включения должны соответствовать требованиям, указанным в ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах".

Невидимые механические включения должны соответствовать требованиям ОФС "Невидимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения".

Испытания проводят в соответствии с указанными ОФС.

Чистота. Родственные соединения и посторонние примеси (если применимо). Определение проводится комплексом взаимодополняющих методов (не менее 2 - 3), выбор которых должен быть обоснован. Требования по содержанию родственных соединений и посторонних примесей должны гарантировать безопасность и эффективность лекарственного препарата.

Содержание родственных соединений и посторонних примесей может определяться с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях; изоэлектрофокусирования; обращенно-фазовой и эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии и других методов с доказанной специфичностью и точностью.

Испытания проводят в соответствии с ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография", ОФС "Электрофорез в полиакриламидном геле", ОФС "Изоэлектрическое фокусирование".

Методики испытания должны быть приведены в нормативной документации на лекарственный препарат.

Стерильность. Лекарственный препарат должен быть стерильным. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Стерильность" методом прямого посева или мембранной фильтрации. В нормативной документации должно быть указание о наличии/отсутствии антимикробного действия препарата в условиях проведения испытания. В случае проведения испытания методом прямого посева должны быть указаны питательные среды для проведения испытаний, соотношение количества испытуемого препарата и питательной среды, условия инкубации. Для метода мембранной фильтрации при необходимости должна быть приведена методика пробоподготовки препарата к испытанию, с указанием промывочной жидкости и количества промывок мембранного фильтра.

Бактериальные эндотоксины. Указывают допустимое содержание бактериальных эндотоксинов и методы определения. Содержание должно соответствовать нормам, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации на препарат. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Бактериальные эндотоксины".

Аномальная токсичность. Лекарственный препарат должен быть нетоксичным. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Аномальная токсичность".

Белок. Содержание белка не должно превышать значений, указанных в фармакопейной статье или нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография", ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой области" и ОФС "Определение белка" или в соответствии с другой валидированной методикой, приведенной в фармакопейной статье или нормативной документации. Выбор метода определения белка должен быть обоснован.

Вещества, вносимые в препарат. Определяют количественное содержание веществ, используемых в качестве стабилизатора.

Полисорбаты. Определение проводится для препаратов ИФН, в состав которых входят соединения указанного класса. Содержание полисорбата должно соответствовать нормам, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации.

Содержание полисорбата может быть определено методами обращенно-фазовой хроматографии, газовой хроматографии, спектрометрический метод или иной метод с доказанной специфичностью и точностью.

Методика определения, параметры пригодности системы и нормы содержания определяются типом полисорбата, входящего в состав ИФН, и используемым методом испытания.

Выбор метода определения полисорбата должен быть обоснован. Методика должна быть приведена в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственный препарат.

Специфическая активность. Лекарственный препарат должен соответствовать требованиям, указанным в фармакопейной статье или нормативной документации.

Количественное определение активности ИФН проводят с использованием биологического метода in vitro на соответствующей линии клеток, чувствительных к интерферону, в соответствии с ОФС "Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием культур клеток", если в фармакопейной статье или нормативной документации не указано иное.

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств" и ОФС для соответствующей лекарственной формы препарата (ОФС "Лекарственные формы для парентерального применения" и др.).

Транспортирование, хранение. В защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °C, не допускается замораживание в соответствии с ОФС "Лекарственные формы для парентерального применения" и ОФС "Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств". Контролируемые условия указывают в фармакопейной статье или нормативной документации.