"ФС.2.1.0056.18. Фармакопейная статья. Ампициллин натрия. Ампициллин"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том III")

(2S,5R,6R)-6-[(2R)-2-Амино-2-фенилацетамидо]-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат натрия

Содержит не менее 91,0% и не более 102,0% ампициллина натрия C₁₆H₁₈N₃NaO₄S в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

Описание. Белый или почти белый порошок. <*> Гигроскопичен.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Легко растворим в воде, умеренно растворим в ацетоне, практически нерастворим в вазелиновом масле.

1. ИК-спектрометрия. Растворяют 0,25 г субстанции в 5 мл воды, добавляют 0,5 мл уксусной кислоты разведенной 12%, взбалтывают и оставляют на 10 мин в ледяной воде. Отфильтровывают кристаллы на стеклянном фильтре с применением вакуумного насоса и промывают их 3 мл смеси вода - ацетон 1:9, после чего высушивают при 60 °C в течение 30 мин. Инфракрасный спектр полученного ампициллина тригидрата, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца ампициллина тригидрата.

2. Тонкослойная хроматография (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля силанизированного на стеклянной подложке.

Подвижная фаза (ПФ). Пиридин - вода - хлороформ - метанол 10:30:80:90.

Испытуемый раствор. Растворяют 20 мг субстанции в 5 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты.

Раствор сравнения А. Растворяют 20 мг стандартного образца ампициллина тригидрата в 5 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты.

Раствор сравнения Б. Растворяют 20 мг стандартного образца амоксициллина тригидрата и 20 мг стандартного образца ампициллина тригидрата в 5 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора (4 мкг), раствора сравнения А (4 мкг) и раствора сравнения Б (по 4 мкг стандартных образцов амоксициллина тригидрата и ампициллина тригидрата). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт подвижной фазы пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и опрыскивают нингидрина раствором 0,25% в спирте 96%, нагревают при температуре 130 °C в течение 10 мин.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора сравнения Б должны наблюдаться две четко разделенных зоны адсорбции.

Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и интенсивности окрашивания должна соответствовать зоне адсорбции на хроматограмме раствора сравнения А.

3. Качественная реакция. Субстанция должна давать характерную реакцию А или Б на натрий (ОФС "Общие реакции на подлинность").

Удельное вращение. От +258 до +287 в пересчете на сухое безводное вещество (ОФС "Поляриметрия"). Растворяют 62,5 мг субстанции в 0,4% растворе калия гидрофталата и доводят объем раствора до 25,0 мл тем же растворителем.

Прозрачность раствора. Растворяют 1,0 г субстанции в 10 мл 1 М раствора хлористоводородной кислоты. Растворяют 1,0 г субстанции в 10 мл воды. Опалесценция полученных свежеприготовленных растворов не должна превышать эталон сравнения II (ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей").

Цветность раствора. Оптическая плотность 10% раствора в воде, измеренная в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 430 нм, не должна превышать 0,15 (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

pH. От 8,0 до 10,0 (10% раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Растворы, содержащие ампициллин и его примеси, используют свежеприготовленными или хранят при температуре 4 °C не более 1 сут.

4% раствор фосфорной кислоты. К 50 мл воды прибавляют 4 мл фосфорной кислоты концентрированной и доводят объем раствора водой до 100,0 мл.

Подвижная фаза А (ПФА). Смешивают 0,5 мл 4% раствора фосфорной кислоты, 50 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата и 50 мл ацетонитрила и доводят водой до 1 л.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Смешивают 0,5 мл 4% раствора фосфорной кислоты, 50 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата и 400 мл ацетонитрила и доводят водой до 1 л.

Испытуемый раствор. Около 30 мг (точная навеска) субстанции растворяют в ПФА и доводят тем же растворителем до объема 50,0 мл.

Раствор стандартного образца ампициллина. Около 30 мг (точная навеска) стандартного образца безводного ампициллина растворяют в ПФА и доводят тем же растворителем до объема 50,0 мл.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. Растворяют 2 мг стандартного образца цефрадина ((6R,7R)-7-[(2R)-2-амино-2-(циклогекса-1,4-диен-1-ил)ацетамидо]-3-метил-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-2-карбоновая кислота) в ПФА и доводят объем тем же растворителем до 50,0 мл. Смешивают 5,0 мл полученного раствора с 5,0 мл раствора стандартного образца ампициллина.

Раствор сравнения. Доводят 1,0 мл испытуемого раствора ПФА до объема 100,0 мл.

Раствор для идентификации примесей. К 0,20 г испытуемой субстанции прибавляют 1,0 мл воды. Нагревают раствор при 60 °C в течение 1 ч, после чего 0,5 мл полученного раствора доводят ПФА до объема 50,0 мл.

Хроматографируют испытуемый раствор, раствор сравнения, раствор для проверки пригодности хроматографической системы и раствор для идентификации примесей.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей используют хроматограмму раствора для идентификации примесей.

Относительные времена удерживания соединений. Ампициллин - 1; ампициллина димер - 2,8.

Пригодность хроматографической системы: на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы при ПФА - ПФБ 85:15 разрешение (R) между пиками ампициллина и цефрадина должно быть не менее 2,0.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика ампициллина димера не должна быть более 4,5-кратной площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 4,5%);

- площадь пика любой другой примеси не должна быть более двукратной площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 2,0%);

- суммарная площадь пиков всех примесей не должна более чем в 5 раз превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 5,0%).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,1 основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,1%).

N,N-Диметиланилин. Не более 0,002%. Определение проводят методом газовой хроматографии (ОФС "Газовая хроматография").

Раствор внутреннего стандарта. Растворяют 50 мг нафталина в 50 мл циклогексана и 5,0 мл полученного раствора доводят циклогексаном до 100,0 мл.

Испытуемый раствор. В пробирку с притертой стеклянной пробкой помещают 1,00 г субстанции, прибавляют 5,0 мл 1 М раствора натрия гидроксида и 1,0 мл раствора внутреннего стандарта. Пробирку закрывают пробкой и энергично встряхивают в течение 1 мин. При необходимости центрифугируют и используют надосадочный слой.

Раствор сравнения. Смешивают 50,0 мг N,N-диметиланилина с 2 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и 20 мл воды, встряхивают до растворения и разбавляют водой до 50,0 мл. 5,0 мл полученного раствора доводят водой до 250,0 мл. В пробирку с притертой стеклянной пробкой помещают 1,0 мл полученного раствора, прибавляют 5,0 мл 1 М раствора гидроксида натрия и 1,0 мл раствора внутреннего стандарта. Пробирку закрывают пробкой и энергично встряхивают в течение 1 мин. При необходимости центрифугируют и используют надосадочный слой.

Хроматографируют испытуемый раствор и раствор сравнения.

Отношение площади пика N,N-диметиланилина к площади пика нафталина на хроматограмме испытуемого раствора не должно быть более соответствующего отношения на хроматограмме раствора сравнения.

2-Этилгексановая кислота. Не более 0,8%. (ОФС "Определение 2-этилгексановой кислоты").

Вода. Не более 2,0% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют около 0,3 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС "Тяжелые металлы", метод 2, в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

<**> Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС "Аномальная токсичность"). Тест-доза - 40 мг субстанции в 0,5 мл воды для инъекций на мышь, внутривенно. Срок наблюдения 48 ч.

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,1 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС "Бактериальные эндотоксины").

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

<**> Стерильность. Субстанция должна быть стерильной (ОФС "Стерильность").

--------------------------------

<**> Контроль по показателям качества "Аномальная токсичность", "Бактериальные эндотоксины" и "Стерильность" проводят в субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Количественное определение. Испытание проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Родственные примеси" со следующими изменениями.

Подвижная фаза. ПФА - ПФБ 85:15.

Хроматографируют испытуемый раствор и раствор стандартного образца ампициллина.

Пригодность хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора стандартного образца ампициллина относительное стандартное отклонение площади пика ампициллина не превышает 2,0% (6 определений).

Содержание ампициллина натрия C₁₆H₁₈N₃NaO₄S в субстанции в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика ампициллина на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика ампициллина на хроматограмме раствора стандартного образца ампициллина;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска стандартного образца ампициллина безводного, мг;

W - суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;

P - содержание ампициллина в стандартном образце ампициллина безводного, %;

1,0629 - коэффициент пересчета ампициллина в ампициллин натрия.

Хранение. В плотно закрытой упаковке в защищенном от света месте.