"ФС.2.1.0054.18. Фармакопейная статья. Амоксициллин натрия. Амоксициллин"
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том III")

(2S,5R,6R)-6-[(2R)-2-Амино-2-(4-гидроксифенил)ацетамидо]-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат натрия

Содержит не менее 89,0% и не более 102,0% амоксициллина натрия C₁₆H₁₈N₃NaO₅S в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

Описание. Белый или почти белый порошок. <*> Гигроскопичен.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Очень легко растворим в воде, умеренно растворим в безводном этаноле, очень мало растворим в ацетоне.

1. ИК-спектрометрия. Растворяют 0,25 г субстанции в 5,0 мл воды очищенной, прибавляют 0,5 мл уксусной кислоты разведенной 12%, взбалтывают и оставляют на 10 мин в ледяной воде. Отфильтровывают кристаллы на стеклянном фильтре при пониженном давлении и промывают их 3 мл смеси вода очищенная - ацетон 1:9, после чего высушивают при 60 °C в течение 30 мин. Инфракрасный спектр полученного амоксициллина тригидрата, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца амоксициллина тригидрата.

2. Тонкослойная хроматография (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля силанизированного на стеклянной подложке.

Подвижная фаза (ПФ). Пиридин-вода-хлороформ-метанол 10:30:80:90.

Испытуемый раствор. Растворяют 20 мг субстанции в 5 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты.

Раствор сравнения А. Растворяют 20 мг стандартного образца амоксициллина тригидрата в 5,0 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты.

Раствор сравнения Б. Растворяют 20 мг стандартного образца амоксициллина тригидрата и 20 мг стандартного образца ампициллина тригидрата в 5,0 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора, раствора сравнения А и раствора сравнения Б. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт подвижной фазы пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и опрыскивают нингидрина раствором 0,25% в спирте 96%, нагревают при температуре 130 °C в течение 10 мин.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора сравнения Б должны наблюдаться две четко разделенных зоны адсорбции.

Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и интенсивности окрашивания должна соответствовать зоне адсорбции на хроматограмме раствора сравнения А.

3. Качественная реакция. Субстанция должна давать характерную реакцию А или Б на натрий (ОФС "Общие реакции на подлинность").

Удельное вращение. От +240 до +290 в пересчете на безводное вещество (ОФС "Поляриметрия"). Растворяют 62,5 мг субстанции в калия гидрофталата растворе 0,4% и доводят объем раствора до 25,0 мл тем же растворителем.

Прозрачность раствора. Опалесценция 1 г субстанции в 10 мл воды не должна превышать эталон сравнения II (ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей").

Оптическая плотность раствора. Оптическая плотность 10% раствора субстанции в воде в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 430 нм не должна превышать 0,20 (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

pH. От 8,0 до 10,0 (10% раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Растворы, содержащие амоксициллин и его примеси, используют свежеприготовленными или хранят при температуре 4 °C не более 1 сут.

Буферный раствор pH 5,0. К 250 мл 0,2 М раствора калия дигидрофосфата прибавляют натрия гидроксида раствор 10% до достижения pH 5,0 и доводят водой до 1 л.

Подвижная фаза А (ПФА). Ацетонитрил-буферный раствор pH 5,0 1:99.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил-буферный раствор pH 5,0 20:80.

Испытуемый раствор. Около 30,0 мг субстанции растворяют в ПФА и доводят тем же растворителем до объема 50,0 мл.

Раствор стандартного образца амоксициллина тригидрата. Около 30,0 мг стандартного образца амоксициллина тригидрата растворяют в ПФА и доводят объем тем же растворителем до 50,0 мл.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. 4,0 мг стандартного образца цефадроксила ((6R,7R)-7-[(2R)-2-амино-2-(4-гидроксифенил)ацетамидо]-3-метил-8-оксо-5-тиа-1-азабицикло[4.2.0]окт-2-ен-2-карбоновая кислота) растворяют в ПФА и доводят объем тем же растворителем до 50,0 мл. Смешивают 5,0 мл полученного раствора с 5,0 мл раствора стандартного образца амоксициллина тригидрата и доводят ПФА до 100,0 мл.

Раствор сравнения. Доводят 1,0 мл испытуемого раствора ПФА до объема 100,0 мл.

Раствор для идентификации примесей. К 0,20 г стандартного образца амоксициллина тригидрата прибавляют 1,0 мл воды. Взбалтывают и по каплям прибавляют 8,5% раствор натрия гидроксида до растворения субстанции, раствор выдерживают при комнатной температуре в течение 4 ч. 0,5 мл полученного раствора доводят ПФА до 50,0 мл.

Примечание.

Примесь C: (4S)-2-[5-(4-гидроксифенил)-3,6-диоксопиперазин-2-ил]-5,5-диметил-1,3-тиазолидин-4-карбоновая кислота, CAS 94659-47-9;

примесь J₂: амоксициллина димер, CAS 73590-06-4;

примесь J₃: амоксициллина тример, CAS 94703-34-1.

Хроматографируют испытуемый раствор, раствор сравнения, раствор для проверки пригодности хроматографической системы и раствор для идентификации примесей.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей используют хроматограмму раствора для идентификации примесей.

Относительные времена удерживания соединений. Амоксициллин - 1 (около 9 мин); примесь C - 3,4; примесь J₂ - 4,1; примесь J₃ - 4,5.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы разрешение (R) между пиками амоксициллина и цефадроксила должно быть не менее 2,0.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика примеси J₂ не должна быть более трехкратной площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 3,0%);

- площадь пика любой другой примеси не должна быть более двукратной площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 2,0%);

- суммарная площадь пиков всех примесей не должна более чем в 5 раз превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 5,0%).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,1 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,1%).

N,N-Диметиланилин. Не более 0,002%. Определение проводят методом газовой хроматографии (ОФС "Газовая хроматография").

Раствор внутреннего стандарта. Растворяют 50 мг нафталина в 50 мл циклогексана. Доводят 5,0 мл полученного раствора циклогексаном до объема 100 мл.

Испытуемый раствор. В пробирку с притертой стеклянной пробкой помещают 1,00 г субстанции, прибавляют 5,0 мл 1 М раствора натрия гидроксида и 1,0 мл раствора внутреннего стандарта. Пробирку закрывают пробкой и энергично встряхивают в течение 1 мин. При необходимости центрифугируют и используют надосадочный слой.

Раствор сравнения. Смешивают 50 мг N,N-диметиланилина с 2 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и 20 мл воды, встряхивают до растворения и доводят объем водой до 50,0 мл. 5,0 мл полученного раствора доводят водой до 250,0 мл. В пробирку с притертой стеклянной пробкой помещают 1,0 мл полученного раствора, прибавляют 5,0 мл 1 М раствора гидроксида натрия и 1,0 мл раствора внутреннего стандарта. Пробирку закрывают пробкой и энергично встряхивают в течение 1 мин. При необходимости центрифугируют и используют надосадочный слой.

Хроматографируют испытуемый раствор и раствор сравнения.

Отношение площади пика N,N-диметиланилина к площади пика нафталина на хроматограмме испытуемого раствора не должно быть более соответствующего отношения на хроматограмме раствора сравнения.

2-Этилгексановая кислота. Не более 0,8% (ОФС "Определение 2-этилгексановой кислоты").

Вода. Не более 3,0% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют около 0,4 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы", метод 2, в зольном остатке, полученном после сжигания 1 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

<**> Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС "Аномальная токсичность"). Тест-доза 40 мг субстанции в 0,5 мл воды для инъекций на мышь, внутривенно. Срок наблюдения 48 ч.

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,1 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС "Бактериальные эндотоксины").

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

<**> Стерильность. Субстанция должна быть стерильной (ОФС "Стерильность").

--------------------------------

<**> Контроль по показателям качества "Аномальная токсичность", "Бактериальные эндотоксины" и "Стерильность" проводят в субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Количественное определение. Испытание проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Родственные примеси" со следующими изменениями.

Подвижная фаза. ПФА - ПФБ 92:8.

Хроматографируют испытуемый раствор и раствор стандартного образца амоксициллина тригидрата.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца амоксициллина тригидрата относительное стандартное отклонение площади пика амоксициллина не должно превышать 2,0% (6 определений).

Содержание амоксициллина натрия C₁₆H₁₈N₃NaO₅S в субстанции в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика амоксициллина на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика амоксициллина на хроматограмме раствора стандартного образца амоксициллина тригидрата;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска стандартного образца амоксициллина тригидрата, мг;

W - суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в испытуемой субстанции, %;

P - содержание основного вещества в стандартном образце амоксициллина тригидрата, %;

0,9235 - коэффициент пересчета амоксициллина тригидрата в амоксициллин натрия.

Хранение. В плотно закрытой упаковке в защищенном от света месте при температуре не выше 25 °C.