"МУК 4.1.4013-24. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств металаксила в семенах подсолнечника методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 19.02.2024)

1. Разработаны Обществом с ограниченной ответственностью "Центр экопестицидных исследований" (Р.А. Стрелецкий, А.В. Попов, В.С. Горбатов).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 19 февраля 2024 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода газожидкостной хроматографии (далее - ГЖХ) для определения остаточных количеств металаксила в семенах подсолнечника в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Металаксил - метил 2-(N-(2-метоксиацетил)-2,6-диметиланилино)пропаноат <1>. Регистрационный номер CAS: 57837-19-1. Молекулярная масса 279,3.

--------------------------------

<1> В соответствии с классификацией Международного союза теоретической и прикладной химии (ИЮПАК) (англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Физико-химические свойства металаксила

Кристаллическое вещество белого или розоватого цвета без запаха. Температура плавления: плюс 71,8 - 72,3 °C. Давление паров при температуре плюс 25 °C: 0,75 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: = 1,75 (плюс 25 °C). Плотность 1,2 (плюс 20 °C). Растворимость в воде 8,4 г/дм (22 °C). Растворимость в органических растворителях, г/дм (плюс 25 °C): н-октанол - 68; толуол - 340; этанол - 400; ацетон - 450; н-гексан - 11. Устойчив при комнатной температуре в нейтральной и кислой средах. Стабильность водных растворов к гидролизу: DT > 200 дней (pH 1), 115 дней (pH 9), 12 дней (pH 10).

2.3. Металаксил - пестицид, фунгицид.

3.1. При соблюдении условий проведения анализа <2> и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

--------------------------------

<2> ГОСТ Р ИСО "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-2 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст (далее ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6)).

4.1. Метод основан на определении металаксила с помощью газожидкостной хроматографии с использованием детектора соединений азота и фосфора (далее - ГЖХ-ТИД).

4.2. Определение металаксила в семенах подсолнечника проводится после его экстракции ацетонитрилом, очистки и концентрирования в системе несмешивающихся растворителей и на картриджах со слабокислотным силикагелем.

4.3. Идентификация металаксила проводится по времени удерживания. Концентрацию металаксила определяют по площадям соответствующих хроматографических пиков на хроматограммах по методу абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором колонки и условий хроматографирования.

4.4. Нижний предел измерения металаксила в анализируемом объеме пробы - 0,2 нг. Количественное определение проводится методом газовой хроматографии с детектированием соединений азота и фосфора.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ Р 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на комплекс газового хроматографа.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организуется обучение работников безопасности труда.

6.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать нормы и правила промышленной безопасности <3>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

--------------------------------

<3> Приказ Ростехнадзора от 15.12.2020 N 536 "Об утверждении федеральных норм и правил в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением" (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе с детектором соединений азота и фосфора, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 - 30 °C, относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе с ТИД проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик.

8.2. Подготовка органических растворителей

При использовании растворителей необходимой чистоты не возникает необходимости в дополнительной очистке.

8.3. Приготовление растворов для проведения анализа

8.3.1. Приготовление рабочих растворов

8.3.1.1. Приготовление 20% раствора гексана в ацетоне

В мерную колбу на 1000 см³ вносят 200 см³ гексана, приливают 250 см³ ацетона, перемешивают и доводят до метки ацетоном. Раствор хранится не более месяца в таре, исключающей испарение при комнатной температуре.

8.3.2. Приготовление градуировочных растворов

8.3.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией металаксила 1,0 мг/см³

Взвешивают 10 мг металаксила в мерной колбе объемом 10 см³. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартного раствора N 2. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 14 суток.

8.3.2.2. Промежуточный раствор N 2 с концентрацией металаксила 10,0 мкг/см³

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 см³ и помещают в мерную колбу объемом 100 см³. Доводят объем до метки ацетоном при перемешивании. Промежуточный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов. Промежуточный раствор N 2 хранят в холодильнике в течение 14 суток.

8.3.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией металаксила 2,0 мкг/см³

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 2 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 3 используется для установления градуировочной характеристики и готовится непосредственно перед использованием.

8.3.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией металаксила 1,0 мкг/см³

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 4 используется для установления градуировочной характеристики и готовится непосредственно перед использованием.

8.3.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией металаксила 0,5 мкг/см³

Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью ацетоном. Стандартный раствор N 5 используется для установления градуировочной характеристики и готовится непосредственно перед использованием.

8.3.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией металаксила 0,2 мкг/см³

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 6 используется для установления градуировочной характеристики и готовится непосредственно перед использованием.

8.4. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (пА x сек) от концентрации металаксила в растворе (мкг/см³), устанавливают путем определения соотношения площади пиков, отвечающих идентифицируемому компоненту, и концентрации аналитического стандарта по 4 растворам для установления градуировочной характеристики.

Градуировочную зависимость для определения металаксила в семенах подсолнечника устанавливают по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,2, 0,5, 1,0 и 2,0 мкг/см³, приготовленным согласно пп. 9.2.2.3 - 9.2.2.6.

В инжектор хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.5. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

8.5. Подготовка концентрирующих картриджей для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения металаксила на них

8.5.1. Подготовка концентрирующих картриджей для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через картридж не должна превышать 1 капля/сек.

Картридж устанавливают в манифолд.

Кондиционирование: концентрирующий картридж последовательно промывают 10 см³ ацетона и 10 см³ гексана. Элюат отбрасывают.

Не допускают высыхания поверхности сорбента.

8.5.2. Проверка хроматографического поведения металаксила на концентрирующих картриджах

В концентратор объемом 50 см³ вносят 1 см³ стандартного раствора металаксила в ацетоне с концентрацией 1,0 мкг/см³ и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

В концентратор помещают 1 см³ ацетона, обрабатывают концентратор 30 сек в ультразвуковой ванне, приливают 9 см³ гексана, обмывают стенки концентратора и вносят раствор на подготовленный картридж. Элюат собирают порциями по 1 см³ в отдельные концентраторы объемом 50 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C. Картридж не обсушивают.

Металаксил смывают 5 см³ 20% гексана в ацетоне (п. 8.3.1.1), собирают элюат порциями по 1 см³ в отдельные концентраторы объемом 50 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см³ ацетона, обрабатывая колбы в ультразвуковой ванне в течение 30 сек и хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие металаксил, полноту смывания с картриджа и необходимый объем элюента.

Изучение поведения металаксила на концентрирующих картриджах проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии картриджей.

8.6. Подготовка и кондиционирование колонки для газожидкостной хроматографии

Капиллярную кварцевую колонку устанавливают в термостат хроматографа и, не присоединяя к детектору, кондиционируют при температуре плюс 290 °C и скорости газа носителя 1 см³/мин в течение 8 - 10 ч.

8.7. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1):

где: X - концентрация металаксила контрольного измерения, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора металаксила в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

10 - точность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает указанные значения, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов металаксила, предусмотренных методикой испытаний. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 8.4.

9.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <4>. Пробы семян подсолнечника хранят в подсушенном виде в полиэтиленовых пакетах в сухом месте.

--------------------------------

<4> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.

10.1. Экстракция

Образец семян подсолнечника массой 10 (+/- 0,01) г помещают в коническую плоскодонную колбу на 250 см³, добавляют 50 см³ ацетонитрила и помещают на 30 мин в ультразвуковую ванну, после чего фильтруют через фильтр "красная лента" при помощи воронки Бюхнера. Экстракцию повторяют еще дважды по 15 мин 50 см³ ацетонитрила.

10.2. Подготовка экстракта для определения металаксила

Полученный экстракт (п. 10.1) упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани плюс 40 °C до маслянистого остатка.

10.3. Очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К экстракту (п. 10.2) добавляют 30 см³ гексана, обрабатывают в ультразвуковой ванне в течение 30 сек и переносят в делительную воронку объемом 250 см³. Концентратор обмывают еще 10 см³ и также помещают в делительную воронку. Далее приливают 30 см³ ацетонитрила и экстрагируют интенсивным встряхиванием в течение 2 мин. Жидкости в воронке дают расслоиться и отбирают нижний слой в колбу концентратор объемом 250 см³, фильтруя через фильтр "красная лента" с 25 г безводного сульфата натрия. Экстракцию повторяют еще дважды 30 см³ и 20 см³ ацетонитрила, экстракты объединяют и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре водяной бани плюс 40 °C.

10.4. Очистка полученного экстракта при помощи твердофазной экстракции

К экстракту в концентраторе (п. 10.3) добавляют 1 см³ ацетона, обрабатывают концентратор 30 сек в ультразвуковой ванне, приливают 9 см³ гексана, снова обрабатывают концентратор 30 сек в ультразвуковой ванне, обмывают стенки концентратора и вносят раствор на подготовленный картридж (п. 8.5.1). Элюат отбрасывают, картридж не обсушивают.

Металаксил смывают 5 см³ 20% гексана в ацетоне (п. 8.3.1.1), собирают элюат в концентратор объемом 50 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетона, обрабатывают концентратор в ультразвуковой ванне в течение 30 сек и переносят экстракт в хроматографическую виалу объемом 2 см³ для последующего хроматографирования.

10.5. Условия хроматографирования описаны в табл. 10.1.

11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему и рассчитывает концентрацию металаксила в анализируемом объеме. Концентрацию металаксила в образцах рассчитывают по формуле (2):

где: X - содержание бентазона в пробе, мг/кг;

V - объем экстракта, см³ (п. 10.4);

m - масса анализируемого образца, г.

11.2. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (3):

где: X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом .

При невыполнении условия (3) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12.1. Результат анализа представляют в виде выражения (4):

где: - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг, которая определяется по формуле (5):

где: - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "< 0,02 мг/кг".

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с методическими документами <5>. Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.

--------------------------------

<5> ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6).

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Приказ Ростехнадзора от 15.12.2020 N 536 "Об утверждении федеральных норм и правил в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением".

3. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

4. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

5. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

6. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

7. ГОСТ 12026 "Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия".

8. ГОСТ 9147 "Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия".

9. ГОСТ 34037 "Упаковка стеклянная для химических реактивов и особо чистых химических веществ. Общие технические условия".

10. ГОСТ Р 58144 "Вода дистиллированная. Технические условия".

11. ГОСТ 4166 "Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия".

12. ГОСТ ISO 7886-1 "Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования".

13. ГОСТ 9293 "Азот газообразный и жидкий. Технические условия".

14. ГОСТ 17433 "Промышленная чистота. Сжатый воздух. Классы загрязненности".

15. ГОСТ 12.1.007 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

16. ГОСТ 12.1.019 "Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

17. ГОСТ 12.1.004 "Пожарная безопасность. Общие требования".

18. ГОСТ 12.4.009 "Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

19. ГОСТ 12.0.230 "Системы управления охраной труда. Общие требования".

20. ГОСТ Р ИСО 5725-1 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения".

21. ГОСТ Р ИСО 5725-2 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений".

22. ГОСТ Р ИСО 5725-3 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений".

23. ГОСТ Р ИСО 5725-4 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений".

24. ГОСТ Р ИСО 5725-5 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений".

25. ГОСТ Р ИСО 5725-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

26. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.