"МУК 4.1.3624-20. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций фамоксадона в атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 04.08.2020)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, Л.П. Мухина).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 4 августа 2020 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) для определения в атмосферном воздухе населенных мест массовой концентрации фамоксадона в диапазонах (0,00008 - 0,00080) мг/м³.

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль загрязнения воздушной среды, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими контроль качества и безопасности объектов окружающей среды, а также условий безопасности труда работающих.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Фамоксадон - 3-анилино-5-метил-5-(4-феноксифенил)-1,3-оксазолидин-2,4-дион. <1> Брутто формула: C₂₂H₁₈N2O₄. Молекулярная масса: 374,4.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Физические и химические свойства:

- порошкообразное вещество светло-кремового цвета;

- температура плавления 140,3 - 141,8 °C;

- давление паров 6,4·10^-4 мПа (при 20 °C);

- растворимость в органических растворителях при 20 °C (в г/дм³): ацетонитрил - 125; ацетон - 274; н-гексан - 0,048; дихлорметан - 236; метанол - 10; этилацетат - 12;

- коэффициент распределения в системе н-октанол - вода K_owlogP = 4,65 (pH 7), 4,8 (pH 5), 5,55 (pH 9);

- растворимость в воде при 20 °C 52 г/дм³.

- стабилен в кислой среде, но гидролизуется в водных растворах при pH 7 (DT₅₀ 1 - 7 дней) и значительно быстрее в щелочной среде: при pH 9 DT₅₀ < 1 часа. В водных растворах нестабилен.

2.3. Краткая токсикологическая характеристика: острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс > 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс > 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC₅₀) для крыс > 5300 мг/дм³ (4 часа), не вызывает раздражения глаз и кожи.

2.4. Фунгицид контактного действия с глубинным эффектом, ингибирует митохондриальное дыхание, специфически связываясь с активным центром убихинол-цитохром C оксидоредуктазы. Высокоэффективен против возбудителей из класса Оомицетов, в том числе против возбудителей, устойчивых к фениламидам.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

4.1. Измерения концентраций фамоксадона выполняют методом ВЭЖХ на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

4.2. Концентрирование фамоксадона из воздуха осуществляют на пробоотборную систему, состоящую из бумажного фильтра высокой плотности и фильтра из пенополиуретана (ППУ), экстракцию с фильтров выполняют ацетоном.

4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 нг. Средняя полнота извлечения с фильтров 92,4%.

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Очистка ацетонитрила. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют. Непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

8.2. Приготовление растворов.

8.2.1. Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с массовой долей 0,1% (0,1%-й раствор). В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 500 см³ бидистиллированной или деионизованной воды, 1,0 см³ ортофосфорной кислоты, перемешивают, доводят до метки бидистиллированной или деионизованной водой и еще раз тщательно перемешивают.

8.2.2. Приготовление подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 700 см³ ацетонитрила и 300 см³ 0,1%-го раствора ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

Подвижную фазу хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

8.3. Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ.

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 8.2.2) при скорости подачи растворителя 1,0 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

8.4. Приготовление градуировочных растворов.

8.4.1. Исходный раствор фамоксадона для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г фамоксадона, добавляют 50 - 70 см³ ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранят в морозильной камере (при температуре не ниже -18 °C) не более месяца.

Растворы N 1 - 7 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

8.4.2. Раствор N 1 фамоксадона для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора фамоксадона с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 8.4.1), доводят ацетонитрилом до метки, перемешивают.

Градуировочный раствор N 1 хранят в морозильной камере (при температуре не ниже -18 °C) не более месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено - найдено", а также контроле качества результатов методом "добавок".

8.4.3. Рабочие растворы N 2 - 6 фамоксадона для градуировки (концентрация 0,05 - 1,0 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 см³ градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 8.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 8.2.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрациями фамоксадона 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/см³, соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике при температуре (+4 +/- 2) °C не более 5 дней.

8.5. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации фамоксадона в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки. В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора N 2 - 6 и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков фамоксадона, на основании которых строят градуировочную зависимость.

8.6. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание фамоксадона в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 1,0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика фамоксадона считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

X - концентрация фамоксадона в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора фамоксадона, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 10% при P = 0,95).

8.7. Подготовка фильтров для отбора проб воздуха. Диаметр бумажного фильтра должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя. Бумажные фильтры и картриджи, содержащие фильтры с пенополиуретаном, последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом, затем ацетонитрилом порциями 25 - 30 см³, сушат с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

9.1. Отбор проб осуществляют в соответствии методическими документами <2>. Воздух с объемным расходом 5 дм³/мин аспирируют через пробоотборные системы, состоящие из 3 бумажных фильтров высокой плотности и 3 фильтров из пенополиуретана (ППУ), установленных параллельно, помещенных в фильтродержатели. Для измерения концентрации фамоксадона на уровне предела обнаружения (0,00008 мг/м³) необходимо отобрать 315 дм³ воздуха (105 дм³ через каждую пробоотборную систему).

--------------------------------

<2> ГОСТ 17.2.3.01-86 "Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов".

Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике (+4 +/- 2) °C - 7 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре (-18 +/- 2) °C.

10.1. Содержимое 3 пробоотборных систем (экспонированных бумажных фильтров и фильтров из пенополиуретана) переносят в химический стакан вместимостью 150 см³, заливают 50 см³ ацетона, помещают на встряхиватель на 10 минут.

Растворитель сливают, фильтры еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 20 см³, выдерживая на встряхивателе по 10 минут. Объединенный экстракт переносят (через воронку) в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 0,5 см³ подвижной фазы (подготовленной по п. 8.2.2), тщательно перемешивают и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.2.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).

10.2. Условия хроматографирования.

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

- жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны;

- хроматографическая колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернение 5 мкм;

- рабочая длина волны 228 нм;

- температура колонки комнатная;

- подвижная фаза ацетонитрил - 0,1% ортофосфорная кислота (70:30 по объему);

- скорость потока элюента 1,0 см³/мин;

- объем вводимой пробы 20 мм³;

- линейный диапазон детектирования 1 - 20 нг.

11.1. Воздушная среда. Концентрацию фамоксадона в пробе воздуха (X), мг/м³, рассчитывают по формуле:

C - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

V_t - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °C) или нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 0 °C), дм³:

T - температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), °C;

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин;

t - длительность отбора пробы, мин;

R - коэффициент, равный 0,357, для атмосферного воздуха.

Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

12.1. Результат количественного анализа представляют в виде:

результат анализа в мг/м³, характеристика погрешности , % (табл. 3.1), P = 0,95 или

- среднее арифметическое результатов определений, мг/м³;

- граница абсолютной погрешности, мг/м³;

- граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, табл. 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "Содержание фамоксадона в пробе атмосферного воздуха - менее 0,00008 мг/м³" <3>.

--------------------------------

<3> Нижний предел количественного определения фамоксадона в пробе атмосферного воздуха 0,00008 мг/м³.

13.1. Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок. Образцами для контроля являются реальные пробы воздушной среды. Объем отобранных для контроля процедуры выполнения анализа проб воздуха должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора проб экстракт с фильтров делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - X. Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (величина добавки C_д должна соответствовать 50 - 150% от содержания компонента в пробе, общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы с добавкой - X'. Результаты анализа исходной рабочей пробы (X) и рабочей пробы с добавкой (X') получают в условиях повторяемости (один аналитик, использование одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.).

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой), мг/м³.

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.

Контроль проводят путем сравнения результата контрольной процедуры К_к с нормативом контроля К.

Результат контрольной процедуры К_к рассчитывают по формуле:

, , C_д - среднее значение массовой концентрации анализируемого компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно (мг/м³).

Норматив оперативного контроля точности К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контрольной процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контрольной процедуры удовлетворяет условию

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

;

, где

X₁, X₂ - результаты измерений в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/м³;

R - предел воспроизводимости (табл. 3.1), указан наибольший предел воспроизводимости для фамоксадона), мг/м³.

Если выполняется условие (2), то воспроизводимость измерений считается удовлетворительной.

При превышении норматива контроля воспроизводимости эксперимент повторяют, при повторном превышении указанного норматива выясняют причины и по возможности их устраняют.

1. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

2. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

3. ГОСТ OIML R 111-1 "Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

4. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

5. ГОСТ 4221 "Калий углекислый. Технические условия".

6. ГОСТ 6552 "Кислота ортофосфорная. Технические условия".

7. ГОСТ 14657.6 Боксит. Метод определения оксида фосфора (V)".

8. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

9. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

10. ГОСТ 9737 "Посуда лабораторная стеклянная. Шлифы сферические взаимозаменяемые".

11. ГОСТ 21241 "Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний".

12. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

13. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

14. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования".

15. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

16. ГОСТ 12.0.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Организация обучения безопасности труда. Общие положения".

17. ГОСТ 17.2.3.01 "Охрана природы (ССОП). Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов".

18. ГОСТ Р ИСО "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".