"МУК 4.1.3930-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств С-метолахлора в картофеле методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 03.07.2023)

1. Разработаны ООО "Центр экопестицидных исследований" (Стрелецкий Р.А., Горбатов, В.С., Никитина М.А., Суетина С.В.).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защите прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой "03" июля 2023 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода газожидкостной хроматографии (далее - ГЖХ) для определения остаточных количеств С-метолахлора <1> в картофеле в диапазоне от 0,01 до 0,1 мг/кг.

--------------------------------

<1> С-метолахлор N CAS 87392-12-9 [Смесь изомеров (aRS, 1S)-2-хлор-6'-этил-N-(2-метокси-метил-этил)ацето-o-толуидид и (aRS, 1R)-2-хлор-6'-этил-N-(2-метокси-метил-этил)ацето-o-толуидид = 80 - 100%: 20 - 0%] - пестицид, гербицид.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Метод основан на определении С-метолахлора с помощью ГЖХ с использованием детектора соединений азота и фосфора (ГЖХ-ТИД).

Определение С-метолахлора в картофеле проводится после его экстракции смесью ацетона и воды, обработке экстрактов коагулирующим раствором и очистке экстрактов от коэкстрактивных компонентов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и дополнительном концентрировании.

Идентификация С-метолахлора проводится по времени удерживания. Концентрацию С-метолахлора определяют по площадям соответствующих хроматографических пиков на хроматограммах по методу абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором колонки и условий хроматографирования.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

4.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в таблицах 4.1 - 4.3.

5.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на комплекс газового хроматографа.

5.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать гигиенических нормативов <2>. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

--------------------------------

<2> СанПиН 1.2.3685-21 "Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания", утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 2 (зарегистрировано Минюстом России 29.01.2021 N 62296).

5.3. Работы с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), осуществляются в соответствии с законодательством Российской Федерации <3> и ГОСТ 12.2.085. Не допускается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

--------------------------------

<3> Приказ Ростехнадзора от 15.12.2020 N 536 "Об утверждении федеральных норм и правил в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением" (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

6.1. К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

7.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <4>. Пробы клубней картофеля хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре плюс (0 - 4) °C в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре минус 18 °C.

--------------------------------

<4> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.

8.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (15 - 30) °C, относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе с ТИД проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик.

Подготовка органических растворителей.

При необходимости производится дополнительная очистка растворителей общепринятыми способами. При использовании растворителей необходимой чистоты как правило не возникает необходимости в дополнительной очистке.

9.2. Приготовление растворов для проведения анализа.

9.2.1. Приготовление рабочих растворов.

9.2.1.1. Приготовление 90% раствора ацетона в воде.

В мерную колбу на 1000 см³ вносят 250 см³ ацетона, приливают 100 см³ дистиллированной воды, перемешивают и доводят до метки ацетоном.

9.2.1.2. Приготовление коагулирующего раствора.

Коагулирующий раствор готовят растворением в мерной колбе на 500 см³ 2,5 г хлористого аммония и 5 см³ ортофосфорной кислоты в дистиллированной воде.

9.2.2. Приготовление градуировочных растворов.

9.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией С-метолахлора 1,0 мг/см³.

Взвешивают 10 мг С-метолахлора в мерной колбе объемом 10 см³. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартного раствора N 2. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 14 суток.

9.2.2.2. Промежуточный раствор N 2 с концентрацией С-метолахлора 10,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 см³ и помещают в мерную колбу объемом 100 см³. Доводят объем до метки ацетоном при перемешивании. Промежуточный раствор N 2 используется для приготовления градуировочных растворов N 3 - 6. Промежуточный раствор N 2 хранят в холодильнике в течение 14 суток.

9.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией С-метолахлора 1,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 3 используется для установления градуировочной характеристики и готовится непосредственно перед использованием.

9.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией С-метолахлора 0,5 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 4 используется для установления градуировочной характеристики и готовится непосредственно перед использованием.

9.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией С-метолахлора 0,2 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 2 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью ацетоном. Стандартный раствор N 5 используется для установления градуировочной характеристики и готовится непосредственно перед использованием.

9.2.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией С-метолахлора 0,1 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 6 используется для установления градуировочной характеристики и готовится непосредственно перед использованием.

9.3. Установление градуировочной характеристики.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (пА x сек) от концентрации С-метолахлора в растворе (мкг/см³), устанавливают путем определения соотношения площади пиков, отвечающих идентифицируемому компоненту, и концентрации аналитического стандарта по 4-м растворам для установления градуировочной характеристики.

Градуировочную зависимость для определения С-метолахлора в картофеле устанавливают по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/см³, приготовленным согласно п.п. 9.2.2.3. - 9.2.2.6.

В инжектор хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.4. Осуществляют не менее 5-ти параллельных измерений.

9.4. Подготовка и кондиционирование колонки для газожидкостной хроматографии.

Капиллярную кварцевую колонку устанавливают в термостат хроматографа и, не присоединяя к детектору, кондиционируют при температуре плюс 290 °C и скорости газа носителя 2 см³/мин в течение 8 - 10 часов.

9.5. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Контроль стабильности градуировочной характеристики для С-метолахлора проводят при смене основных градуировочных растворов N 1 и 2 каждые 14 суток.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание С-метолахлора в которых должно охватывать весь диапазон концентраций градуировочных характеристик.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

9.5.1. Градуировочная характеристика для определения С-метолахлора (1):

где X - концентрация С-метолахлора контрольного измерения, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора С-метолахлора в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

10 - погрешность градуировочной характеристики, %.

10.1. Экстракция.

Образец клубней картофеля массой 10 (+/- 0,01) г помещают в коническую плоскодонную колбу на 250 см³, добавляют 50 см³ 90% ацетона в воде (п. 9.2.1.1) и помещают на 10 минут в ультразвуковую ванну, после чего фильтруют при помощи воронки Бюхнера через фильтр красная лента. Экстракцию повторяют еще раз, переливают экстракт вместе с пробой (не отстаивая) в воронку Бюхнера, и фильтруют, объединяя экстракты. Фильтр в воронке дополнительно промывают 15 см³ ацетона, также объединяя фильтрат с остальным экстрактом.

10.2. Подготовка экстракта для определения с-метолахлора.

Полученный экстракт (п. 10.1) упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани 40 °C до полного улетучивания ацетона. В колбу-концентратор с водным остатком добавляют 10 см³ воды и помещают на 30 секунд в ультразвуковую ванну. Затем в колбу-концентратор добавляют 10 см³ коагулирующего раствора (п. 9.2.1.2), помещают на 30 секунд в ультразвуковую ванну и оставляют в морозильной камере на 15 минут. После этого раствор фильтруют через лабораторную коническую воронку (бумажный фильтр "красная лента") в делительную воронку емкостью 250 см³, колбу-концентратор обмывают дважды по 10 см³ дистиллированной воды и переносят в ту же делительную воронку.

10.3. Очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

К экстракту (п. 10.2) приливают 20 см³ гексана и экстрагируют интенсивным встряхиванием в течение 2 минут. Жидкости в воронке дают расслоиться и отбирают верхний слой в колбу концентратор объемом 250 см³. Экстракцию повторяют еще дважды 20 см³ гексана, экстракты объединяют и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре водяной бани плюс 40 °C. К сухому остатку в колбе концентраторе добавляют 1 см³ ацетона и обрабатывают на ультразвуковой бане в течение 30 сек. Количественное определение С-метолахлора проводят в соответствии с п. 10.4.

10.4. Условия хроматографирования указаны в таблице 10.4.

11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему:

где X - содержание С-метолахлора в пробе, мг/кг;

C - концентрация С-метолахлора в экстракте, мкг/см³ (рассчитана при помощи программного обеспечения хроматографической системы);

m - масса анализируемого образца, г;

Результат округляют до четвертого знака после запятой.

11.2. Альтернативная обработка результатов.

Содержание С-метолахлора в пробах рассчитывают по формуле:

где X - содержание С-метолахлора в пробе, мг/кг;

S_ст - площадь пика стандарта, пА x сек;

S_пр - площадь пика образца, пА x сек;

A - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемого образца, г (см³).

Результат округляют до четвертого знака после запятой.

12.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (4):

где X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (таблица 3.1), при этом .

12.2. При невыполнении условия (4) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

13.1. Результат анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "< 0,01 мг/кг".

14.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6). Периодичность и формы контроля определяется руководством по качеству.

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. СанПиН 1.2.3685-21 "Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания".

3. Приказ Ростехнадзора от 15.12.2020 N 536 "Об утверждении федеральных норм и правил в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением" (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

4. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.

5. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6) "Государственный стандарт Российской Федерации. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений.

6. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

7. ГОСТ OIML R 111-1 "Межгосударственный стандарт. Государственная система обеспечения единства измерений".

8. ГОСТ 29227 "Межгосударственный стандарт. Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования.

9. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

10. ГОСТ 6552 "Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия".

11. ГОСТ Р 58144 "Вода дистиллированная. Технические условия".

12. ГОСТ 9293 "Азот газообразный и жидкий. Технические условия"

13. ГОСТ 25336 "Межгосударственный стандарт. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

14. ГОСТ 1770 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) "Межгосударственный стандарт. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

15. ГОСТ 9147 "Межгосударственный стандарт. Посуда и оборудование лабораторный фарфоровые. Технические условия".

16. ГОСТ 9737 "Межгосударственный стандарт. Посуда лабораторная стеклянная. Шлифы сферические взаимозаменяемые".

17. ГОСТ 23932 "Межгосударственный стандарт. Посуда и оборудование лабораторный стеклянные. Общие технические условия".

18. ГОСТ 12.1.004 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования".

19. ГОСТ 12.1.007 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

20. ГОСТ 12.1.019 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

21. ГОСТ 12.4.009 "Межгосударственный стандарт. Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".