"МУК 4.1.3636-20. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций клоквинтосет кислоты в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 17.08.2020)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Роспотребнадзора (В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, Л.П. Мухина).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 17 августа 2020 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) для определения в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операторов массовой концентрации клоквинтосет кислоты в диапазонах 0,1 - 2,0 мг/м³, 0,0031 - 0,0625 мг/м³, 0,1 - 2,0 мкг/смыв соответственно.

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль загрязнения воздушной среды, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области загрязнения воздушной среды, а также безопасности труда работающих.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Клоквинтосет кислота - (5-хлорхинолин-8-илокси) - уксусная кислота <1>. Брутто формула: C₁₁H₈ClNO₃. Молекулярная масса: 237,64. Кристаллический порошок бежевого цвета. Температура плавления: 69,4 °C. Давление паров при 25 °C: 5,31 x 10^-3 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Кow log P = 3,89. Растворимость (г/дм³) при 25 °C: ацетон - 340; этанол - 190 г; н-гексан-0,14; н-октанол-11,0. Растворимость в воде при 20 °C: 0,54 г/дм³ (pH 4); 0,60 (pH 7); 0,47 (pH 9). В нейтральной и кислой средах отличается гидролитической стабильностью. Подвергается в щелочной среде гидролизу.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс > 2000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс > 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC₅₀) для крыс > 0,935 мг/дм³ при 4-часовой экспозиции.

2.3. Ускоряет процесс детоксикации некоторых гербицидов в хлебных злаках, повышает устойчивость к ним урожая. Используется в комбинации с этими гербицидами в качестве антидота.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1, для соответствующих диапазонов концентраций.

--------------------------------

<2> Соответствует расширенной неопределенности Uотн. (в относительных единицах) при коэффициенте охвата k = 2.

3.2. Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 3.2.

4.1. Измерения концентраций клоквинтосет кислоты выполняют методом ВЭЖХ на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

4.2. Концентрирование клоквинтосет кислоты из воздуха осуществляют на бумажный фильтр высокой плотности (воздух рабочей зоны), на пробоотборные трубки, заполненные пористым полимерным сорбентом (атмосферный воздух), экстракцию с фильтров и трубок выполняют метанолом. Смыв с кожных покровов проводят этиловым спиртом.

4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 нг. Средняя полнота извлечения с фильтров - 96,5%; с сорбционных трубок - 96,6%; с поверхности кожи - 99,5%.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности по ГОСТ 12.1.007 при работе с химическими реактивами, требования по электробезопасности по ГОСТ 12.1.019 при работе с электроустановками, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Очистка ацетонитрила. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

8.2. Приготовление растворов.

8.2.1. Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с массовой долей 0,1% (0,1%-й раствор). В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 500 см³ бидистиллированной или деионизованной воды, 1,0 см³ ортофосфорной кислоты, перемешивают, доводят до метки бидистиллированной или деионизованной водой и еще раз тщательно перемешивают.

8.2.2. Приготовление подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 200 см³ ацетонитрила и 800 см³ 0,1%-го раствора ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

Подвижную фазу хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

8.3. Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ.

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 8.2.2) при скорости подачи растворителя 0,8 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

8.4. Приготовление градуировочных растворов.

8.4.1. Исходный раствор клоквинтосет кислоты для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г клоквинтосет кислоты, добавляют 50 - 70 см³ метанола, перемешивают, доводят метанолом до метки, вновь перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере (при температуре не ниже -18 °C) в течение месяца.

Растворы N 1 - 7 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

8.4.2. Раствор N 1 клоквинтосет кислоты для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора клоквинтосет кислоты с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 8.4.1), доводят метанолом до метки, перемешивают.

Градуировочный раствор N 1 хранят в морозильной камере (при температуре не ниже -18 °C) в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов методом "добавок".

8.4.3. Рабочие растворы (N 2 - 6) клоквинтосет кислоты для градуировки (концентрация 0,05 - 1,0 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 см³ градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 8.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 8.2.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрацией клоквинтосет кислоты 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/см³ соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике при температуре 4 - 6 °C в течение 10 дней.

8.5. Установление градуировочной характеристики.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации клоквинтосет кислоты в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки. В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора N 2 - 6 и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 10.4. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков клоквинтосет кислоты, на основании которых строят градуировочную зависимость.

Контроль стабильности градуировочных характеристик проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание клоквинтосет кислоты в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 1,0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика клоквинтосет кислоты считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение:

где X - концентрация клоквинтосет кислоты в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора клоквинтосет кислоты, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 10% при P = 0,95).

8.6. Подготовка фильтров для отбора проб воздуха. Диаметр фильтра высокой плотности должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя.

Фильтры последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом, затем ацетонитрилом порциями 25 - 30 см³, сушат с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

8.7. Подготовка салфеток для проведения смыва.

8.7.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5% (5%-й раствор). Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в деионизированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

8.7.2. Подготовка салфеток. Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10 x 10 см, затем их последовательно обрабатывают 5%-м раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, 2-кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

9.1. Воздух рабочей зоны. Отбор проб осуществляют в соответствии с ГОСТ 17.2.4.02. Воздух с объемным расходом 1 дм³/мин аспирируют через бумажный фильтр, помещенный в фильтродержатель. Для измерения концентрации клоквинтосет кислоты на уровне 0,1 мг/м³ необходимо отобрать 1 дм³ воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре (4 +/- 2) °C - 7 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре (-18 +/- 2) °C.

9.2. Атмосферный воздух. Отбор проб осуществляют в соответствии с ГОСТ 17.2.3.01. Воздух с объемным расходом 2 дм³/мин аспирируют через пробоотборные трубки, заполненные пористым полимерным сорбентом. Для измерения концентрации клоквинтосет кислоты на уровне предела обнаружения (0,0031 мг/м³) необходимо отобрать 32 дм³ воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре (4 +/- 2) °C - 7 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре (-18 +/- 2) °C.

9.3. Смывы с кожных покровов. Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой участков тела (лоб, лицо, шея, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межпальцевые промежутки). До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его для удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 см²). При необходимости отбирают фоновые смывы. Смыв выполняют способом обмыва фиксированного участка кожи этиловым спиртом, помещая 20 см³ в стеклянную емкость с металлической крышкой. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают этот участок сверху вниз. Операцию повторяют дважды.

Срок хранения экспонированных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в холодильнике при температуре (4 +/- 2) °C - 7 дней. Для длительного хранения пробы смывов помещают в морозильную камеру при температуре (-18 +/- 2) °C.

10.1. Воздух рабочей зоны. Экспонированный фильтр переносят в химический стакан вместимостью 150 см³, заливают 10 см³ метанола, помещают на встряхиватель на 10 минут. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями метанола объемом 10 см³, выдерживая на встряхивателе по 10 минут. Объединенный экстракт переносят (через воронку) в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха и остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы (подготовленной по п. 8.2.2), тщательно перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.4.

10.2. Атмосферный воздух.

Содержимое экспонированных сорбционных трубок (сорбент и стекловату) переносят в химический стакан вместимостью 150 см³, заливают по 5 - 6 см³ метанола, помещают на ультразвуковую баню на 2 минуты, затем помещают на встряхиватель на 15 минут. Растворитель сливают, содержимое трубок еще дважды обрабатывают новыми порциями метанола объемом 5 - 6 см³, выдерживая на встряхивателе по 10 минут. Объединенный экстракт переносят, фильтруя через тампон из стекловаты, помещенный в химическую воронку, в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.4. Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).

10.3. Смывы с кожных покровов. Пробу смыва сливают (через воронку) в колбу для упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную химическую воронку, установленную в муфту колбы для упаривания, тщательно отжимают и промывают этиловым спиртом дважды порциями по 10 см³, предварительно ополаскивая растворителем емкость, в которой находилась проба. Объединенный раствор упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы (подготовленной по п. 8.2.2) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.4. Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика клоквинтосет кислоты, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию клоквинтосет кислоты в хроматографируемом растворе. Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).

10.4. Условия хроматографирования:

- жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны;

- хроматографическая колонка стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернение 5 мкм;

- рабочая длина волны 255 нм;

- температура колонки 24 °C;

- подвижная фаза: ацетонитрил - 0,1%-я ортофосфорная кислота (20:80 по объему);

- скорость потока элюента 0,8 см³/мин;

- объем вводимой пробы 20 мм³;

- линейный диапазон детектирования: 1 - 20 нг.

11.1. Воздушная среда. Концентрацию вещества в пробе воздуха (X), мг/м³, рассчитывают по формуле:

где C - концентрация клоквинтосет кислоты в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

V_t - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура: 20 °C - воздух рабочей зоны и 0 °C - атмосферный воздух), дм³.

где T - температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), град. C;

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин;

t - длительность отбора пробы, мин;

R - коэффициент, равный 0,386 для воздуха рабочей зоны и 0,357 для атмосферного воздуха.

11.2. Смывы с кожных покровов. Концентрацию вещества в пробе смыва X, мкг/смыв, рассчитывают по формуле:

где C - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³.

12.1. Результат количественного анализа представляют в виде:

- результат анализа X в мг/м³, характеристика погрешности , % (таблица 3.1), P = 0,95, где X - результат определения, мг/м³;

- граница абсолютной погрешности, мг/м³;

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, табл. 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "Содержание клоквинтосет кислоты в пробе воздуха рабочей зоны - менее 0,1 мг/м³; в пробе атмосферного воздуха - менее 0,0031 мг/м³; в пробе смыва - менее 0,1 мкг/смыв" <3>.

--------------------------------

<3> 0,1 мг/м³; 0,0031 мг/м³, 0,1 мкг/смыв - пределы обнаружения клоквинтосет кислоты при отборе 1 дм³ воздуха рабочей зоны; при отборе 32 дм³ атмосферного воздуха, в пробе смыва (фиксированная площадь смыва, 200 см²).

13.1. Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздушной среды и смывов с кожных покровов. Объем отобранных для контроля процедуры выполнения анализа проб воздуха и смывов с кожи должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике, фиксированная площадь смыва должна быть увеличена в 2 раза. После отбора проб экстракт с трубок, а также пробу смыва делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат. Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (величина добавки C_д должна соответствовать 50 - 150% от содержания компонента в пробе, общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы с добавкой - X'. Результаты анализа исходной рабочей пробы (X) и рабочей пробы с добавкой (X') получают в условиях повторяемости (один аналитик, использование одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.).

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

где - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой), мг/м³, мкг/смыв:

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Контроль проводят путем сравнения результата контрольной процедуры K_к с нормативом контроля K.

Результат контрольной процедуры K_к рассчитывают по формуле:

где , , C_д - среднее значение массовой концентрации анализируемого компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно (мг/м³, мкг/смыв).

Норматив оперативного контроля точности K рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контрольной процедуры (K_к) с нормативом контроля (K).

Если результат контрольной процедуры удовлетворяет условию

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

1. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

2. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

3. ГОСТ OIML R 111-1 "Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

4. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

5. ГОСТ 20490 "Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия".

6. ГОСТ 4221 "Калий углекислый. Технические условия".

7. ГОСТ 6552 "Кислота ортофосфорная. Технические условия".

8. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

9. ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры.

10. ГОСТ 9737 "Посуда лабораторная стеклянная. Шлифы сферические взаимозаменяемые".

11. ГОСТ 21241 "Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний".

12. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

13. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

14. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования".

15. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

16. ГОСТ 17.2.3.01 "Охрана природы (ССОП). Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов".

17. ГОСТ 12.1.005 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

18. Р 2.2.2006-05 "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

19. ГОСТ Р ИСО 5725 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

20. ГОСТ 28498 "Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний".

21. ГОСТ 5962 "Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия".

22. ГОСТ 6995 "Реактивы. Метанол-яд. Технические условия".

23. Руководство Р 2.2.2006-05 "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны".