3.2. Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 3.2.
Таблица 3.2
доверительный интервал среднего результата
4.1. Измерения концентраций 6-бензиладенина выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.
4.2. Концентрирование 6-бензиладенина из воздуха осуществляют на пробоотборные трубки, заполненные пористым полимерным сорбентом, экстракцию с трубок выполняют метанолом. Смыв с кожных покровов проводят этиловым спиртом.
4.3. Нижний предел измерения 6-бензиладенина в анализируемом объеме пробы - 1 нг. Средняя полнота извлечения с сорбционных трубок - 90,3%, с поверхности кожи - 92,6%.
устройства и материалы
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.
Таблица 5.1
Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
Таблица 5.2
Реактивы
Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.
Таблица 5.3
Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостные хроматографы.
6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.
6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
8.1. Очистка ацетонитрила. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм3 ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют. Непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм3 ацетонитрила 10 г карбоната калия).
8.2. Приготовление растворов.
8.2.1. Приготовление подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 300 см3 ацетонитрила и 700 см3 бидистиллированной или деионизованной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
Подвижную фазу хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.
8.3. Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ.
Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 8.2.1) при скорости подачи растворителя 0,8 см3/мин до установления стабильной базовой линии.
8.4. Приготовление градуировочных растворов.
8.4.1. Исходный раствор 6-бензиладенина для градуировки (концентрация 100 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,0100 +/- 0,0005) г 6-бензиладенина, добавляют 50 - 70 см3 ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранят в морозильной камере (при температуре не ниже -18 °C) не более месяца.
Растворы N 1 - 7 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.
8.4.2. Раствор N 1 6-бензиладенина для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 см3 исходного раствора 6-бензиладенина с концентрацией 100 мкг/см3 (п. 8.2.1), доводят ацетонитрилом до метки, перемешивают.
Градуировочный раствор N 1 хранят в морозильной камере (при температуре не ниже -18 °C) не более месяца. Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов методом "добавок".
8.4.3. Рабочие растворы N 2 - 6 6-бензиладенина для градуировки (концентрация 0,05 - 1,0 мкг/см3). В 5 мерных колб вместимостью 1,00 см3 помещают по 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 см3 градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/см3 (п. 8.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрацией 6-бензиладенина 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/см3, соответственно.
Растворы хранятся в холодильнике при температуре 2 - 6 °C не более 7 дней.
8.5. Установление градуировочной характеристики.
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации 6-бензиладенина в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки. В инжектор хроматографа вводят по 20 мм3 каждого градуировочного раствора N 2 - 6 и анализируют в условиях хроматографирования, указанных ниже. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков 6-бензиладенина, на основании которых строят градуировочную зависимость.
8.6. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.
При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание 6-бензиладенина в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 1,0 мкг/см3.
Градуировочная характеристика 6-бензиладенина кислоты считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:
![]() где X - концентрация 6-бензиладенина в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;
C - известная концентрация градуировочного раствора 6-бензиладенина, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;
B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 10% при P = 0,95).
Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов 6-бензиладенина, предусмотренных методическими указаниями. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново.
8.7. Подготовка салфеток для проведения смыва.
8.7.1. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5% (5%-й раствор).
Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см3, растворяют в деионизированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.
8.7.2. Подготовка салфеток для проведения смыва.
Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10 x 10 см, затем их последовательно обрабатывают 5%-м раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, 2-кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.
9.1. Отбор проб осуществляется в соответствии с методическими документами <2>.
--------------------------------
<2> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов от 21.08.1979 N 2051-79; методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности.
9.2. Воздух рабочей зоны. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами <3>. Воздух с объемным расходом 1 - 2 дм3/мин аспирируют через пробоотборные трубки, заполненные пористым полимерным сорбентом. Для измерения концентрации 6-бензиладенина на уровне 0,1 мг/м3 необходимо отобрать 2 дм3 воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре 2 - 6 °C 7 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре (-18 +/- 2) °C.
--------------------------------
<3> Руководство Р 2.2.2006-05 "Руководство по гигиенической оценке факторов рабочей среды и трудового процесса. Критерии и классификация условий труда"; ГОСТ 17.2.4.02; ГОСТ 12.1.005.
9.3. Атмосферный воздух. Отбор проб осуществляют в соответствии методическими документами <4>. Воздух с объемным расходом 1 - 2 дм3/мин аспирируют через пробоотборные трубки, заполненные пористым полимерным сорбентом. Для измерения концентрации 6-бензиладенина на уровне предела обнаружения (0,016 мг/м3) необходимо отобрать 12,5 дм3 воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре 2 - 6 °C 7 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре (-18 +/- 2) °C.
--------------------------------
<4> ГОСТ 17.2.3.01.
9.4. Смывы с кожных покровов. Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой или другими СИЗ участков тела (лоб, лицо, шея, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межпальцевые промежутки). До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его для удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 см2). При необходимости отбирают фоновые смывы. Смыв выполняют способом обмыва фиксированного участка кожи этиловым спиртом, помещая 20 см3 в стеклянную емкость с металлической крышкой. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают этот участок сверху вниз. Операцию повторяют дважды. Срок хранения экспонированных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в холодильнике при температуре 2 - 6 °C 7 дней. Для длительного хранения пробы смывов помещают в морозильную камеру при температуре (-18 +/- 2) °C.
10.1. Воздушная среда. Содержимое экспонированных сорбционных трубок (сорбент и стекловату) переносят в химический стакан вместимостью 150 см3, заливают 5 - 6 см3 метанола, помещают на ультразвуковую баню на 2 минуты, затем помещают на встряхиватель на 15 минут. Растворитель сливают, содержимое трубок еще дважды обрабатывают новыми порциями метанола объемом 5 - 6 см3, выдерживая на встряхивателе по 10 минут. Объединенный экстракт переносят, фильтруя через тампон из стекловаты, помещенный в химическую воронку, в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 4 см3 подвижной фазы (воздух рабочей зоны и атмосферный воздух) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3. Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).
10.2. Смывы с кожных покровов. Пробу смыва сливают (через воронку) в колбу для упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную химическую воронку, установленную в муфту колбы для упаривания, тщательно отжимают и промывают этиловым спиртом дважды порциями по 10 см3, предварительно ополаскивая растворителем емкость, в которой находилась проба. Объединенный раствор упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы (подготовленной по п. 8.2.1) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3. Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика 6-бензиладенина с помощью градуировочного графика, определяют концентрацию 6-бензиладенина в хроматографируемом растворе. Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).
- жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны;
- хроматографическая колонка стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C18, зернение 5 мкм;
- рабочая длина волны: 270 нм;
- температура колонки: 24 °C;
- подвижная фаза: ацетонитрил-деонизованная вода (30:70, по объему);
- скорость потока элюента: 0,8 см3/мин;
- объем вводимой пробы: 20 мм3;
- линейный диапазон детектирования: 1 - 20 нг.
11.1. Воздушная среда. Концентрацию 6-бензиладенина в пробе воздуха (X), мг/м3, рассчитывают по формуле:
![]() где C - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;
W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;
Vt - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °C) или нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 0 °C), дм3.
![]() где T - температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), °C;
P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;
u - расход воздуха при отборе пробы, дм3/мин;
t - длительность отбора пробы, мин;
R - коэффициент, равный 0,386 для воздуха рабочей зоны и 0,357 для атмосферного воздуха.
11.2. Смывы с кожных покровов.
Концентрацию 6-бензиладенина в пробе смыва X, мкг/смыв, рассчитывают по формуле:
X = C·W,
где C - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;
W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3.
12.1. Результат анализа представляют в виде:
![]() где
![]() Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.
Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "Содержание 6-бензиладенина в пробе воздуха рабочей зоны - менее 0,1 мг/м3; в пробе атмосферного воздуха - менее 0,016 мг/м3; в пробе смыва - менее 0,1 мкг/смыв" <5>.
--------------------------------
<5> 0,1 мг/м3; 0,016 мг/м3, 0,1 мкг/смыв - пределы обнаружения 6-бензиладенина при отборе 2 дм3 воздуха рабочей зоны; при отборе 12,5 дм3 атмосферного воздуха, в пробе смыва (фиксированная площадь смыва, 200 см2), соответственно.
13.1. Организация контроля качества измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.
Образцами для контроля являются реальные пробы воздушной среды и смывов с кожных покровов. Объем отобранных для контроля процедуры выполнения анализа проб воздуха и смывов с кожи должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике, фиксированная площадь смыва должна быть увеличена в 2 раза. После отбора проб экстракт с трубок, а также пробу смыва делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат. Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (величина добавки Cд должна соответствовать 50 - 150% от содержания компонента в пробе, общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы с добавкой - X'. Результаты анализа исходной рабочей пробы (X) и рабочей пробы с добавкой (X') получают в условиях повторяемости (один аналитик, использование одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.).
Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:
![]() где
- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой), мг/м3, мкг/смыв.![]() Контроль проводят путем сравнения результата контрольной процедуры Кк с нормативом контроля К.
Результат контрольной процедуры Кк рассчитывают по формуле:
![]() где
Норматив оперативного контроля точности К рассчитывают по формуле:
![]() Проводят сопоставление результата контрольной процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).
Если результат контрольной процедуры удовлетворяет условию:
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):
где
(воздушная среда); (смывы с кожи).![]() где X1, X2 - результаты измерений в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/м3, мкг/смыв;
R - предел воспроизводимости (табл. 3.1, указан наибольший предел воспроизводимости для 6-бензиладенина), мг/м3, мкг/смыв.
Если выполняется условие (2), то воспроизводимость измерений считается удовлетворительной.
При превышении норматива контроля воспроизводимости эксперимент повторяют, при повторном превышении указанного норматива выясняют причины и по возможности их устраняют.
1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".
2. Руководство Р 2.2.2006-05 "Руководство по гигиенической оценке факторов рабочей среды и трудового процесса. Критерии и классификация условий труда".
3. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования".
4. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".
5. ГОСТ OIML R 111-1 "Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".
6. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".
7. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".
8. ГОСТ 20490 "Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия".
9. ГОСТ 4221 "Калий углекислый. Технические условия".
10. ГОСТ 6552 "Кислота ортофосфорная. Технические условия".
11. ГОСТ 5962 "Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия".
12. ГОСТ 14657.6 "Боксит. Метод определения оксида фосфора (V)".
13. ГОСТ 9147 "Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия".
14. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".
15. ГОСТ 21241 "Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний".
16. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности"
17. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".
18. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования".
19. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".
20. ГОСТ 12.0.004 "Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения".
21. ГОСТ 17.2.3.01 "Охрана природы (ССОП). Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов".
22. ГОСТ 17.2.4.02 "Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ".
23. ГОСТ 12.1.005 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".
24. Руководство Р 2.2.2006 "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны".
25. ГОСТ Р ИСО 5725 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
Вернуться в "Каталог нормативных документов"
Источник информации: https://internet-law.ru/documents/prod/metodicheskie-ukazaniya/1/muk_4_44822.html
На правах рекламы:
|