"МУК 4.1.3927-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тербутилазина в картофеле методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 03.07.2023)

1. Разработаны ООО "Центр экопестицидных исследований" (Стрелецкий Р.А., Горбатов В.С., Никитина М.А., Суетина С.В.).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защите прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 3 июля 2023 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода газожидкостной хроматографии (далее - ГЖХ) для определения остаточных количеств тербутилазина <1> в картофеле в диапазоне от 0,02 до 0,2 мг/кг.

--------------------------------

<1> Тербутилазин, N CAS 5915-41-3 [N2-трет-бутил-6-хлоро-N4-этил-1,3,5-триазин-2,4-диамин] - пестицид, гербицид.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Метод основан на определении тербутилазина с помощью ГЖХ с использованием детектора соединений азота и фосфора (далее - ГЖХ-ТИД).

Определение тербутилазина в картофеле проводится после его экстракции ацетоном, очистки и концентрирования в системе несмешивающихся растворителей и на концентрирующих картриджах.

Идентификация тербутилазина проводится по времени удерживания. Концентрацию тербутилазина определяют по площадям соответствующих хроматографических пиков на хроматограммах по методу абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором колонки и условий хроматографирования.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

4.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в таблицах 4.1 - 4.3.

5.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на комплекс газового хроматографа.

5.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать гигиенических нормативов <2>. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

--------------------------------

<2> СанПиН 1.2.3685-21 "Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания", утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 2 (зарегистрировано Минюстом России 29.01.2021 N 62296).

5.3. Работы с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), осуществляются в соответствии с законодательством Российской Федерации <3> и ГОСТ 12.2.085. Не допускается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

--------------------------------

<3> Приказ Ростехнадзора от 15.12.2020 N 536 "Об утверждении федеральных норм и правил в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением" (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

6.1. К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

7.1. Отбор проб производится в соответствии с методическими документами <4>. Пробы клубней картофеля хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре плюс (0 - 4) °C в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре минус 18 °C.

--------------------------------

<4> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.

8.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (15 - 30) °C, относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе с ТИД проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик.

Подготовка органических растворителей.

При необходимости производится дополнительная очистка растворителей общепринятыми способами. При использовании растворителей необходимой чистоты, как правило, не возникает необходимости в дополнительной очистке.

9.2. Приготовление растворов для проведения анализа.

9.2.1. Приготовление рабочих растворов.

9.2.1.1. Приготовление 25% раствора этилацетата в гексане.

В мерную колбу на 1000 см³ вносят 500 см³ гексана, приливают 250 см³ этилацетата, перемешивают и доводят до метки гексаном.

9.2.1.2. Приготовление 5% раствора этилацетата в гексане.

В мерную колбу на 1000 см³ вносят 500 см³ гексана, приливают 50 см³ этилацетата, перемешивают и доводят до метки гексаном.

9.2.2. Приготовление градуировочных растворов.

9.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией тербутилазина 1,0 мг/см³

Взвешивают 10 мг тербутилазина в мерной колбе объемом 10 см³. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартного раствора N 2. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 14 суток.

9.2.2.2. Промежуточный раствор N 2 с концентрацией тербутилазина 10,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 см³ и помещают в мерную колбу объемом 100 см³. Доводят объем до метки ацетоном при перемешивании. Промежуточный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов. Промежуточный раствор N 2 хранят в холодильнике в течение 14 суток.

9.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией тербутилазина 2,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 2 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 3 используется для установления градуировочной характеристики и готовится непосредственно перед использованием.

9.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией тербутилазина 1,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 4 используется для установления градуировочной характеристики и готовится непосредственно перед использованием.

9.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией тербутилазина 0,5 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью ацетоном. Стандартный раствор N 5 используется для установления градуировочной характеристики и готовится непосредственно перед использованием.

9.2.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией тербутилазина 0,2 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 6 используется для установления градуировочной характеристики и готовится непосредственно перед использованием.

9.3. Установление градуировочной характеристики.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (пА x сек) от концентрации тербутилазина в растворе (мкг/см³), устанавливают путем определения соотношения площади пиков, отвечающих идентифицируемому компоненту, и концентрации аналитического стандарта по 4-м растворам для установления градуировочной характеристики.

Градуировочную зависимость для определения тербутилазина в картофеле устанавливают по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 0,2, 0,5, 1,0 и 2,0 мкг/см³, приготовленным согласно п.п. 9.2.2.3 - 9.2.2.6.

В инжектор хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.5. Осуществляют не менее 5-ти параллельных измерений.

9.4. Подготовка концентрирующих картриджей <5> для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения тербутилазина на них.

--------------------------------

<5> На примере картриджей Диапак С.

9.4.1. Подготовка концентрирующих картриджей для очистки экстракта.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через картридж не должна превышать 1 капля/сек.

Картридж устанавливают в манифолд.

Кондиционирование: концентрирующий картридж промывают 10 см³ гексана. Элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности картриджа.

9.4.2. Проверка хроматографического поведения тербутилазина на концентрирующих картриджах.

В концентратор объемом 50 см³ вносят 1 см³ стандартного раствора тербутилазина в ацетоне с концентрацией 1,0 мкг/см³ и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

В концентратор помещают 5 см³ гексана, обрабатывают концентратор 30 секунд в ультразвуковой ванне, обмывают стенки концентратора и вносят раствор на подготовленный картридж. Элюат собирают порциями по 1 см³ в отдельные концентраторы объемом 50 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C. Картридж нельзя обсушивать.

Картридж промывают 5 см³ 5% этилацетата в гексане (п. 9.2.1.2). Элюат собирают порциями по 1 см³ в отдельные концентраторы объемом 50 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C. Картридж нельзя обсушивать!

Тербутилазин смывают 5 см³ 25% этилацетата в гексане (п. 9.2.1.1), собирают элюат порциями по 1 см³ в отдельные концентраторы объемом 50 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см³ ацетона, обрабатывая колбы в ультразвуковой ванне в течение 30 секунд, и хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие тербутилазин, полноту смывания с картриджа и необходимый объем элюента.

Изучение поведения тербутилазина на концентрирующих картриджах Диапак С проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии картриджей.

9.5. Подготовка и кондиционирование колонки для газожидкостной хроматографии.

Капиллярную кварцевую колонку устанавливают в термостат хроматографа и, не присоединяя к детектору, кондиционируют при температуре плюс 290 °C и скорости газа носителя 1 см³/мин в течение 8 - 10 часов.

9.6. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Контроль стабильности градуировочной характеристики для тербутилазина проводят при смене основных градуировочных растворов N 1 и 2 каждые 14 суток.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание тербутилазина в которых должно охватывать весь диапазон концентраций градуировочных характеристик.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1):

где X - концентрация тербутилазина контрольного измерения, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора тербутилазина в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

10 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает указанные значения, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов тербутилазина, предусмотренных методикой измерения. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 9.3.

10.1. Экстракция.

Образец клубней картофеля массой 10 (+/- 0,01) г помещают в коническую плоскодонную колбу на 250 см³, добавляют 50 см³ ацетона и помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, после чего фильтруют при помощи воронки Бюхнера через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще раз, переливают экстракт вместе с пробой (не отстаивая) в воронку Бюхнера, и фильтруют, объединяя экстракты. Фильтр в воронке дополнительно промывают 15 см³ ацетона, также объединяя фильтрат с остальным экстрактом.

10.2 Подготовка экстракта для определения тербутилазина.

Полученный экстракт (п. 10.1) упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани плюс 40 °C досуха.

10.3 Очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

К экстракту (п. 10.2) добавляют 2 см³ ацетона, обрабатывают в ультразвуковой ванне в течение 30 сек, затем добавляют 50 см³ дистиллированной воды, снова обрабатывают в ультразвуковой ванне в течение 30 секунд, далее переносят в делительную воронку объемом 250 см³. Далее растворяют в экстракте 5 грамм хлорида натрия, приливают 30 см³ гексана и экстрагируют интенсивным встряхиванием в течение 2 минут. Жидкости в воронке дают расслоиться и отбирают верхний слой в колбу концентратор объемом 250 см³. Экстракцию повторяют еще дважды 30 см³ гексана, экстракты объединяют и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре водяной бани плюс 40 °C.

10.4. Очистка полученного экстракта при помощи твердофазной экстракции.

К экстракту в концентраторе (п. 10.3) добавляют 5 см³ гексана, обрабатывают концентратор 30 секунд в ультразвуковой ванне, обмывают стенки концентратора и вносят раствор на подготовленный картридж (п. 9.4.1). Элюат отбрасывают, картридж не обсушивают. Картридж промывают 5 см³ 5% этилацетата в гексане (п. 9.2.1.2). Элюат отбрасывают. Картридж не обсушивают.

Тербутилазин смывают 5 см³ 25% этилацетата в гексане (п. 9.2.1.1), собирают элюат в концентратор объемом 50 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетона, обрабатывают концентратор в ультразвуковой ванне в течение 30 секунд и переносят экстракт в хроматографическую виалу объемом 2 см³ для последующего хроматографирования.

10.5. Условия хроматографирования указаны в таблице 10.5.

11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему:

где X - содержание тербутилазина в пробе, мг/кг;

C - концентрация тербутилазина в экстракте, мкг/см³ (рассчитана при помощи программного обеспечения хроматографической системы);

m - масса анализируемого образца, г.

Результат округляют до четвертого знака после запятой.

11.2. Альтернативная обработка результатов.

Содержание тербутилазина в пробах рассчитывают по формуле:

где X - содержание тербутилазина в пробе, мг/кг;

S_ст - площадь пика стандарта, пА x сек;

S_пр - площадь пика образца, пА x сек;

A - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемого образца, г (см³).

Результат округляют до четвертого знака после запятой.

12.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (4):

где X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (таблица 3.1), при этом .

12.2. При невыполнении условия (4) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

13.1. Результат анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

14.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6). Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. СанПиН 1.2.3685-21 "Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания".

3. Приказ Ростехнадзора от 15.12.2020 N 536 "Об утверждении федеральных норм и правил в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением" (зарегистрирован Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

4. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.

5. ГОСТ Р 53228 "Национальный стандарт Российской Федерации. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

6. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

7. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

8. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

9. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

10. ГОСТ 12026 "Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия".

11. ГОСТ 8682 "Посуда лабораторная стеклянная. Шлифы конические взаимозаменяемые".

12. ГОСТ 9147 "Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия".

13. ГОСТ 34037 "Упаковка стеклянная для химических реактивов и особо чистых химических веществ. Общие технические условия".

14. ГОСТ Р 58144 "Вода дистиллированная. Технические условия".

15. ГОСТ 4233 "Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия".

16. ГОСТ 9293 "Азот газообразный и жидкий. Технические условия".

17. ГОСТ 17433 "Промышленная чистота. Сжатый воздух. Классы загрязненности".

18. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

19. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

20. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования".

21. ГОСТ 12.0.004 "Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения".