"МУК 4.1.3713-21. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств ципродинила в гранатах методом капиллярной газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 10.11.2021)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, О.Е. Егорченкова, К.С. Курпединов)

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 10 ноября 2021 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее - ГЖХ) для определения в гранатах массовой концентрации ципродинила в диапазоне 0,01 - 0,10 мг/кг.

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими контроль качества и исследования пищевых продуктов и продовольственного сырья.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Ципродинил - 4-циклопропил-6-метил-N-фенилпиридин-2-амин <1>. Класс пиримидинамины. Брутто-формула C₁₄H₁₅N₃. Молекулярная масса 225,3.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Физические и химические свойства

Бежевый порошок со слабым запахом. T_пл. 75,9 °C. Давление паров 5,1 x 10^-1 мПа (25 °C; кристаллическая модификация A); 4,7 x 10^-1 мПа (25 °C; кристаллическая модификация B). Растворимость (мг/дм³) в воде при 25 °C: 20 (pH 5); 13 (pH 7); 15 (pH 9). Растворимость в органических растворителях при 25 °C (г/дм³): гексан - 30; ацетон - 610; этанол - 160; толуол - 460; октанол - 140. Стабильность в водных растворах: ДТ₅₀ при pH 4 - 9 и 25 °C - более года; плотность при 20 °C: 1,21 г/см³.

2.3. Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) крысы, мыши > 2000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) крысы > 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC₅₀, 4 ч) для крыс > 1200 мг/дм³.

2.4. Область применения препарата. Ципродинил - системный фунгицид, хорошо проникающий в растение через листья и передвигающийся преимущественно по ксилеме. Эффективно подавляет рост мицелия различных патогенов таких, как мучнистая роса, плодовая гниль и парша плодовых культур. Ингибирует рост мицелия в тканях растений, предотвращает спорообразование.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

4.1. Методика основана на определении ципродинила с использованием капиллярной ГЖХ с масс-селективным детектором (МСД).

4.2. Экстракцию вещества из анализируемых образцов выполняют ацетоном, вымораживают экстракт и проводят очистку перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

4.3. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.

Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Примечание: допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

6.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать нормы и правила <2>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

--------------------------------

<2> Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением, утвержденные Приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 N 116.

6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (15 - 30) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8.1. Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов, раствора внесения, приготовление раствора для очистки экстрактов, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

8.2. Очистка органических растворителей

8.2.1. Ацетон. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонке с числом теоретических тарелок не менее 30.

8.2.2. Хлористый метилен. Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

8.3. Приготовление 2%-го раствора хлорида натрия. В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 20 г безводного хлорида натрия, растворяют в 600 - 700 см³ деионизованной воды, доводят водой до метки, перемешивают до полного растворения соли.

8.4. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения

8.4.1. Исходный раствор ципродинила для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г ципродинила, растворяют в 50 - 60 см³ ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре (2 - 6) °C в течение 3 месяцев.

Растворы N 2 - 6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

8.4.2. Раствор N 1 ципродинила для градуировки и внесения (концентрация 1,0 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 1,0 см³ исходного раствора с концентрацией ципродинила 100 мкг/см³ (п. 8.4.1), разбавляют ацетоном до метки.

Раствор хранят в холодильнике при температуре (2 - 6) °C в течение 14 дней.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок.

8.4.3. Рабочие растворы N 2 - 6 ципродинила для градуировки (концентрации 0,01 - 0,10 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 1,0; 2,0; 5,0; 8,0 и 10,0 см³ градуировочного раствора N 1 с концентрацией 1,0 мкг/см³ (п. 8.4.2), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрацией ципродинила 0,01; 0,02; 0,05; 0,08 и 0,1 мкг/см³, соответственно.

Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре (2 - 6) °C в течение 10 дней.

8.5. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика от концентрации ципродинила в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пика ципродинила, на основании которых строят градуировочную зависимость.

8.6. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание ципродинила в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,01 до 0,10 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

где X - концентрация ципродинила в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора ципродинила, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, % (равен 20% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново.

9.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами <3>.

--------------------------------

<3> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов от 21.08.1979 N 2051-79, ГОСТ 27573 "Плоды граната свежие. Технические условия".

9.2. Пробы гранатов хранят в полиэтиленовой таре в холодильнике не более 5 дней, для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C. Перед анализом образцы измельчают.

10.1. Экстракция

10.1. Измельченный образец граната массой 10 г, помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, добавляют 50 см³ ацетона, интенсивно встряхивают (или гомогенизируют) в течение 1 мин, затем помещают на аппарат для встряхивания на 30 минут. Пробе дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разрежения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр низкой плотности "красная лента". Экстракцию повторяют дважды, используя 20 см³ ацетона, выдерживая каждый раз по 2 мин на ультразвуковой бане и 30 мин на аппарате для встряхивания. Осадок на фильтре промывают 10 см³ ацетона.

Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 см³ и вымораживают в течение 1 часа при температуре не выше -18 °C. Охлажденный экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности "красная лента", упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C до водного остатка (объем 5 - 10 см³) и подвергают очистке перераспределением в системе несмешивающихся растворителей по п. 10.2.

10.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. К водному экстракту, полученному по п. 10.1, добавляют 50 см³ 2% раствора хлорида натрия, 20 см³ деионизированной воды, перемешивают и помещают в делительную воронку вместимостью 250 см³. Колбу дополнительно обмывают 20 см³ 2% раствора хлорида натрия, которые также переносят в воронку, затем добавляют 50 см³ дихлорметана и интенсивно встряхивают в течение 5 мин. После полного разделения фаз нижний дихлорметановый слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия (толщиной около 1 см), помещенный на бумажном фильтре средней плотности "белая лента" в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 250 см³. Экстракцию ципродинила повторяют еще дважды порциями дихлорметана объемом 50 см³, встряхивая в течение 2 мин.

Безводный сульфат натрия, помещенный на фильтре, дополнительно промывают 10 см³ дихлорметана.

Для полного разделения фаз содержимое воронки должно отстояться 10 - 15 мин. Следы дихлорметана в водной фазе недопустимы, поскольку это снижает полноту извлечения вещества.

Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, помещенного на бумажном фильтре средней плотности в конусной воронке, упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 35 °C досуха, сухой остаток растворяют в 10 см³ ацетона, тщательно перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

Пробу вводят в испаритель хроматографов не менее двух раз. Устанавливают площадь пика ципродинила, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию вещества в хроматографируемом растворе.

10.3. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф, снабженный масс-селективным детектором, автоматическим пробоотборником, предназначенный для работы с капиллярной колонкой.

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент 5% фенил- и 95% диметилполисилоксана, толщина пленки сорбента 0,25 мкм.

Температура детектора: квадруполя - 150 °C, источника - 230 °C, переходной камеры - 280 °C.

Температура испарителя: 250 °C.

Температура термостата колонки в режиме программирования. Начальная температура - 120 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 230 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 20 градусов в минуту до температуры 260 °C, выдержка 5 мин.

Газ 1 (гелий):

- поток в колонке: 1,2 см³/мин;

- давление - 101,2 кПа;

- средняя линейная скорость - 41,195 см/сек.

Хроматографируемый объем: 1 мм³.

Режим сканирования - мониторинг выбранных ионов (SIM); отношение масса-заряд: 224 (количественный), 210, 77;

- линейный диапазон детектирования: 0,01 - 0,10 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор ципродинила с концентрацией 0,1 мкг/см³, разбавляют ацетоном не более чем в 50 раз.

Примечание: условия хроматографирования могут быть изменены в зависимости от используемого оборудования.

11.1. Содержание ципродинила в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

где A - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с усредненной величиной площади хроматографического пика ципродинила, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³ (10 см³);

m - масса анализируемого образца, г.

11.2. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

где X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом .

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Примечание: идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

12.1. Результат анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание ципродинила в пробе гранатов - менее 0,01 мг/кг <4>".

--------------------------------

<4> 0,01 мг/кг - предел обнаружения ципродинила в пробе грантов.

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений". Периодичность и формы контроля определяются Руководством по качеству.

1. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

2. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

3. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

4. ГОСТ 28498 "Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний".

5. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

6. ГОСТ OIML R 111-1 "Государственная система обеспечения единства измерений (ГСП). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

7. ГОСТ 2603 "Реактивы. Ацетон. Технические условия".

8. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

9. ГОСТ 20490 "Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия".

10. ГОСТ 4221 "Реактивы. Калий углекислый. Технические условия".

11. ГОСТ 4204 "Реактивы. Кислота серная. Технические условия".

12. ГОСТ 4166 "Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия".

13. ГОСТ 4233 "Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия".

14. ГОСТ 12794 "Метил хлористый технический. Технические условия".

15. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

16. ГОСТ 9147 "Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия".

17. ГОСТ ISO 7886-1 "Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования".

18. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

19. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

20. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования".

21. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

22. ГОСТ 12.0.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Организация обучения безопасности труда. Общие положения".

23. ГОСТ 27573 "Плоды гранатов свежие. Технические условия".

24. Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением, утвержденные Приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 N 116.

25. "Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" от 21.08.1979 N 2051-79.