"МУК 4.1.3664-20. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флуопирама в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 27.10.2020)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, О.Е. Егорченкова).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 27 октября 2020 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии (далее - ГЖХ) для измерения концентраций флуопирама в ботве и корнеплодах сахарной свеклы в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг.

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области безопасности и качества пищевой продукции и продовольственного сырья.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Флуопирам. N-{2-[3-хлор-5(трифторметил)-2-пиридил]этил}--трифтор-о-толуамид <1>.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

Брутто-формула - C₁₆H₁₁ClF₆N₂O.

Молекулярная масса 396,72.

2.2. Физические и химические свойства:

- белое кристаллическое вещество без запаха;

- плотность 1,53 (при 20 °C);

- температура плавления 117,5 °C;

- давление паров 3,1·10^-3 мПа (при 25 °C);

- растворимость в органических растворителях при 20 °C (в г/дм³): ацетон > 250; диметилсульфоксид > 250; дихлорметан > 250; н-гептан - 0,66; метанол > 250; толуол - 62,2; этилацетат > 250. Растворимость в воде при 20 °C (в мг/дм³) - 16,0. Коэффициент распределения н-октанол/вода K_ow logP = 3,3 (40 °C). Стабилен в водной среде при pH 4 - 9, pK_a = 0,5 при 23 °C.

2.3. Флуопирам - фунгицид из класса пиридинил-этилбензамидов. Эффективен в борьбе с возбудителями мучнистой росы, серой гнили, склеротиниоза и монилиального ожога на виноградниках, посадках семечковых и косточковых плодовых, овощных и полевых культурах.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности p = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций (в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6).

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 3.2.

4.1. Метод основан на определении флуопирама с использованием ГЖХ с масс-селективным детектором после извлечения вещества из анализируемых образцов ацетонитрилом с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния и хлорида натрия). Очистку экстрактов проводят методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением смеси сорбентов на основе амина, октадецилсилана и графитизированной сажи.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующей дополнительной очистки растворителей.

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

6.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать нормы и правила <2>. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

--------------------------------

<2> Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением, утвержденные приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 N 116.

6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе с масс-селективным детектором и жидкостном хроматографе с тройным квадрупольным масс-детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом и жидкостном хроматографах проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на приборы.

8.1. Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

8.2. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют; непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

8.3. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения.

8.3.1. Исходный раствор флуопирама для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0004) г флуопирама, растворяют в 50 - 60 см³ ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре минус 18 °C не более 3 месяцев.

8.3.2. Приготовление рабочего раствора N 1 флуопирама для градуировки и внесения (концентрация 1,0 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 1,0 см³ исходного раствора с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 8.3.1), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают; получают рабочий раствор N 1 с концентрацией флуопирама 1,0 мкг/см³.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре -18 °C не более одного месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок.

8.3.3. Приготовление рабочих растворов N 2 - 7 флуопирама для градуировки (концентрация 0,005 - 0,1 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 см³ рабочего раствора N 1 с концентрацией 1,0 мкг/см³ (п. 8.3.2), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают; получают рабочие растворы NN 2 - 7 с концентрациями флуопирама 0,005; 0,01; 0,02, 0,05 и 0,1 мкг/см³.

Растворы хранят в морозильной камере при температуре -18 °C не более 14 дней.

8.4. Приготовление смеси солей для экстракции.

Для приготовления смеси солей для экстракции смешивают (4,00 +/- 0,01) г магния сернокислого и (1,00 +/- 0,01) г натрия хлористого, до использования хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев).

Примечание. Возможно использование наборов солей для экстракции проб фруктов и овощей массой 10 г.

8.5. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов.

Для приготовления смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 2 см³ помещают (50 +/- 4) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина. (50 +/- 4) мг графитизированной сажи, (150 +/- 4) мг магния сернокислого и (50 +/- 4) мг твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

Примечание. Возможно использование дисперсионных наборов для фруктов и овощей с маслом и пигментами, помещенных в полипропиленовые пробирки вместимостью 2 см³.

8.6. Установление градуировочной характеристики.

Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика от концентрации флуопирама в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-м растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пика флуопирама, на основании которых строят градуировочную зависимость.

8.9. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание флуопирама в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,005 до 0,1 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

X - концентрация флуопирама в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора флуопирама, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 20% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 20%, выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново.

9.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами <3> и ГОСТ 33884.

--------------------------------

<3> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов от 21.08.1979 N 2051-79, "Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности", Москва 2018. 64 с.

9.2. Пробы корнеплодов и ботвы сахарной свеклы хранят в полиэтиленовой таре в холодильнике не более 5 дней, для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре ниже -18 °C.

9.3. Перед анализом образцы измельчают.

10.1. Экстракция.

Измельченный образец сахарной свеклы (ботва, корнеплоды) массой 10 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³, вносят 10 см³ ацетонитрила, помещают в пробирку керамический гомогенизатор, закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную 30 с. В пробирку вносят смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 8.4), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 4000 об./мин и подвергают очистке с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 8.5.

10.2. Очистка экстракта.

Надосадочную жидкость (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 1,5 - 1,8 см³ с помощью пипетки переносят в пропиленовую центрифужную пробирку, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 8.5. Закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную в течение 30 с. Центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4000 об./мин, отбирают с помощью пипетки раствор, помещают в автосамплер хроматографа и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.3.

Пробу вводят в испаритель хроматографов не менее двух раз. Устанавливают площадь пика флуопирама, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию вещества в хроматографируемом растворе.

10.3. Условия хроматографирования:

- газовый хроматограф, снабженный масс-селективным детектором, автоматическим пробоотборником, предназначенный для работы с капиллярной колонкой;

- хроматографическая, капиллярная, кварцевая колонка, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент 5%-фенил 95%-диметилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм);

- температура детектора: квадруполя - +150 °C, источника - +230 °C, переходной камеры - +280 °C;

- температура испарителя: 270 °C;

- температура термостата колонки программированная. Начальная температура 150 °C, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 15 градусов в минуту до температуры 195 °C, выдержка 12 мин, нагрев колонки со скоростью 20 градусов в минуту до температуры 260 °C, выдержка 2 мин;

- газ 1 (гелий): поток в колонке 1,3 см³/мин;

- давление - 119,3 кПа;

- средняя линейная скорость - 43 см/с;

- хроматографируемый объем: 1 мм³;

- Режим сканирования - регистрации выбранных ионов (SIM).

: отношение масса-заряд: 173 (количественный), 359, 397;

- линейный диапазон детектирования: 0,005 - 0,1 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор флуопирама с концентрацией 0,1 мкг/см³, разбавляют ацетоном (не более чем в 50 раз).

11.1. Содержание флуопирама в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

X - содержание флуопирама в пробе, мг/кг;

A - концентрация вещества, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³ (10 см³);

m - масса анализируемого образца, г;

f - полнота извлечения вещества, выраженная в относительных единицах (величину полноты извлечения, приведенную в табл. 3.2, разделить на 100).

12.1. Результат анализа представляют в виде:

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1 и 3.2), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "Содержание флуопирама в пробе сахарной свеклы (ботва, корнеплоды) - менее 0,01 мг/кг" <4>.

--------------------------------

<4> 0,01 мг/кг - предел обнаружения в пробе сахарной свеклы (ботва, корнеплоды).

13.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом .

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

14.1. Организация контроля качества измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6.

14.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1 и 3.2), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

, , C_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг;

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

14.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости R:

X₁, X₂ - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, таблицы 3.1 и 3.2), %.

1. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

2. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

3. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

4. ГОСТ 28498 "Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний".

5. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

6. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

7. ГОСТ OIML R 111-1 "Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

8. ГОСТ 9293 (ИСО 2435) "Азот газообразный и жидкий. Технические условия".

9. ГОСТ 2603 "Реактивы. Ацетон. Технические условия".

10. ГОСТ 20490 "Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия".

11. ГОСТ 4221 "Калий углекислый. Технические условия. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

12. ГОСТ 4523 "Магний сернокислый 7-водный. Технические условия".

13. ГОСТ 4233 "Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия".

14. ГОСТ 33884 "Свекла сахарная. Технические условия"

15. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

16. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

17. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования".

18. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

19. ГОСТ 12.0.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Организация обучения безопасности труда. Общие положения".

20. Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением, утвержденные приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 N 116.

21. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов от 21.08.1979 N 2051-79.

22. Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности, Москва 2018. 64 с.