"МУК 4.1.3948-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств пироксасульфона в воде, почве, семенах и масле сои методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 04.07.2023)

1. Разработаны ФГБОУ ВО "Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, Е.В. Довгилевич, Е.Н. Тестова).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 4 июля 2023 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) с масс-спектрометрическим детектированием для определения массовых концентраций пироксасульфона в воде в диапазоне (0,005 - 0,050) мг/дм³ и в почве в диапазоне (0,01 - 0,10) мг/кг, а также уровня его остаточных количеств в семенах и масле сои в диапазоне (0,01 - 0,10) мг/кг.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Физико-химические свойства пироксасульфона

Название действующего вещества по ИЮПАК: 3-[5-(дифторметокси)-1-метил-3-(трифторметил)пиразол-4-ил метилсульфонил]-4,5-дигидро-5,5-диметил-1,2-оксазол.

Эмпирическая формула: C₁₂H₁₄F₅N₃O₄S.

Молекулярная масса: 391,31.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: белый, без запаха.

Давление насыщенного пара при плюс 25 °C: 2,4 x 10^-6 Па.

Температура плавления: плюс 131 - 133 °C.

Коэффициент распределения в системе октанол/вода при плюс 25 °C: K_owlog P = 2,30 (pH 8,7).

Растворимость в воде (в г/дм³, при плюс 20 °C): 3,49.

Растворимость в органических растворителях (в г/дм³, при плюс 20 °C): ацетон - более 250; н-гексан - 0,0721; дихлорметан - 151; метанол - 11,4; толуол - 11,3; этилацетат - 97.

Пироксасульфон гидролитически стабилен при pH 5, 7, 9 в течение 15 дней.

В почве DT₅₀ составляет 16 - 26 дней.

2.2. Пироксасульфон относится к веществам малоопасным по острой оральной (ЛД₅₀ для крыс более 2000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД₅₀ для крыс более 2000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК₅₀ для крыс (4 часа) более 5800 мг/м³ воздуха).

2.3. Пироксасульфон - гербицид из класса пиразолов/оксазолинов, применяется как довсходовый и послевсходовый гербицид системного действия для борьбы с широколиственными сорняками.

3.1. Метод основан на определении пироксасульфона с помощью ВЭЖХ на обращенной фазе с использованием тандемного масс-спектрометрического детектора.

Определение пироксасульфона в пробах воды проводится после ее фильтрации через фильтр с размером пор 0,45 мкм и разбавления пробы метанолом и смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему).

Определение пироксасульфона в почве проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом и дальнейшей очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами.

Определение пироксасульфона в семенах сои проводится после его экстракции из образцов ацетоном, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на колонках с оксидом алюминия.

Определение пироксасульфона в масле сои проводится после его экстракции из растворенных в гексане образцов ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах с гидрофильным слабокислым сорбентом (С - силикагель).

Идентификация пироксасульфона проводится по времени удерживания, наличию характеристичных фрагментарных ионов и соотношению интенсивностей (площадей) пиков этих ионов. Количественное определение пироксасульфона проводится методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность метода достигается за счет использования масс-спектрометрического детектора.

4.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.

5.1. Средства измерений:

- весы аналитические класса точности по ГОСТ Р 53228 - специальный (I), с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г;

- весы лабораторные общего назначения класса точности по ГОСТ Р 53228 - средний (III) с наибольшим пределом взвешивания до 400 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,5 г;

- колбы мерные на 10, 100 и 1000 см³, ГОСТ 1770;

- пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 см³, ГОСТ 29227;

- цилиндры мерные на 10, 25, 50, 100, 500 и 1000 см³, ГОСТ 1770;

- система высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектором, включающая:

- модульный жидкостный хроматограф, состоящий из градиентного насоса на два растворителя, позволяющий регулировать поток элюента от 0,001 до 5,0 см³/мин и создавать давление от 0 до 600 бар; вакуумного дегазатора; термостата колонок с двумя независимо нагреваемыми зонами с диапазоном температур от плюс 10 до плюс 80 °C и с возможностью использования стандартного автосамплера с дозирующим объемом от 0,1 до 100 мм³ для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему. ВЭЖХ система соединена с тандемным масс-спектрометрическим детектором типа тройной квадруполь с двумя высокопроизводительными турбомолекулярными насосами, позволяющим регистрировать отдельные ионы с заданными массами от 5 до 3000 а.е.м.;

- система оснащена компьютерной системой обработки данных, контролирующей работу всего прибора, обеспечивающей сбор и хранение всех масс-хроматограмм в процессе проведения хромато-масс-спектрометрического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет масс-хроматограмм и количественный анализ.

5.2. Реактивы:

- пироксасульфон, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 98,4%;

- азот, особой чистоты, ГОСТ 9293;

- алюминия окись для хроматографии, чистый, 1 степени активности;

- ацетон, химически чистый;

- ацетонитрил, особой чистоты, УФ-200 нм;

- вода дистиллированная по ГОСТ 6709 и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости);

- n-Гексан, химически чистый;

- калий марганцовокислый, чистый для анализа, ГОСТ 20490;

- кальций хлористый, чистый;

- кислота муравьиная, чистая для анализа, ГОСТ 5848;

- концентрирующие патроны для твердофазной экстракции с гидрофильным слабокислым сорбентом с постоянной активностью с размером частиц 63 - 200 мкм (С-силикагель) (объем - 1 см³, масса сорбента - 0,6 г) (патрон N 1);

- метилен хлористый, химически чистый;

- натрий сернокислый, безводный, химически чистый, ГОСТ 4166;

- натрий углекислый, кислый, химически чистый, ГОСТ 4201;

- натрий хлористый, химически чистый, ГОСТ 4233;

- спирт метиловый (метанол), химически чистый, ГОСТ 6995.

5.3. Вспомогательные устройства, материалы:

- аппарат для встряхивания проб с возвратно-поступательным направлением колебаний, с максимальной загрузкой 10 кг, с амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту;

- банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см³;

- вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная, ГОСТ 5556;

- ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 дм³;

- виалы объемом 2 см³, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, прокалываемой микрошприцем для автоматического дозатора проб;

- виалы с тефлоновыми прокладками, стеклянные, объемом не менее 20 см³;

- воронки делительные на 250 см³, ГОСТ 25336;

- воронки лабораторные, стеклянные, ГОСТ 25336;

- испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см³, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм³ и с диапазоном температур от плюс 20 до плюс 100 °C;

- колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 см³, ГОСТ 25336;

- колбы круглодонные со шлифом на 100, 250 см³ и 4000 см³ ТС;

- колонка хроматографическая стальная, длиной 100 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 3,5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18;

- колонки хроматографические, стеклянные или пластиковые, длиной 150 - 250 мм и диаметром 15 мм;

- миксер ручной погружной, мощностью 260 Ватт и с максимальной скоростью вращения от 2000 до 12500 об/мин;

- насос диафрагменный, химически стойкий на 100%, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс, с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм³/мин;

- предколонка хроматографическая стальная, длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18;

- стаканы стеклянные, термостойкие объемом 100 - 500 см³, ГОСТ 25336;

- установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 см³ и приемной конической колбой объемом 1000 см³;

- фильтры для фильтрации проб с помощью шприца с размером пор 0,45 мкм;

- фильтры для фильтрации органических растворителей и воды с размером пор 0,45 мкм;

- фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие, диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г;

- центрифуга лабораторная, настольная с максимальным рабочим числом оборотов 4000 об/мин, с рабочим объемом ротора 200 см³ x 4 ячейки, выбираемый временной диапазон работы от 0 до 100 минут и с набором полипропиленовых банок емкостью 200 см³;

- шарики из углеродистой стали для экстракции диаметром 8 мм.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

8.1. Отбор проб производится в соответствии с правилами <1>.

--------------------------------

<1> Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 10 суток.

Для длительного хранения проб почвы, почву подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Пробы семян сои подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света и хранят в бумажной или тканевой упаковке в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы соевого масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C не более 10 суток.

9.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

10.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик.

Подготовка органических растворителей.

10.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,5 °C, отбрасывают.

10.1.2. Очистка хлористого метилена

Хлористый метилен промывают равным объемом 5% раствора гидрокарбоната натрия, осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 12 - 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре плюс 40,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 40,0 °C, отбрасывают.

10.1.3. Очистка гексана.

Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ аппарата для перегонки растворителей.

Гексан перегоняют при температуре плюс 68,7 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,7 °C, отбрасывают.

10.1.4. Очистка ацетона

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,2 °C, отбрасывают.

10.1.5. Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³ и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 100,0 °C, отбрасывают.

10.2. Приготовление растворов для проведения анализа

10.2.1. Приготовление рабочих растворов

10.2.1.1. Приготовление 0,1% водного раствора муравьиной кислоты.

В мерную колбу объемом 1000 см³ помещают 500 см³ бидистиллированной воды, прибавляют 1,0 см³ муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки бидистиллированной водой. Раствор используется как компонент подвижной фазы.

10.2.1.2. Приготовление 0,1% раствора муравьиной кислоты в метаноле

В мерную колбу объемом 1000 см³ помещают 500 см³ метанола, прибавляют 1,0 см³ муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки метанолом. Раствор используется как компонент подвижной фазы.

10.2.1.3. Приготовление 5% раствора гидрокарбоната натрия

50 г гидрокарбоната натрия переносят в мерную колбу на 1000 см³, добавляют 200 - 300 см³ дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки. Раствор используют для очистки хлористого метилена.

10.2.1.4. Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия

400 г хлорида натрия переносят в стеклянную емкость объемом 1000 см³, доливают 800 см³ дистиллированной воды, помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли.

10.2.2. Приготовление градуировочных растворов

10.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией пироксасульфона 100,0 мкг/см³

Взвешивают 10 мг пироксасульфона в мерной колбе объемом 100 см³. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании. Полученный стандартный раствор N 1 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 1 хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение 2 месяцев.

10.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией пироксасульфона 10,0 мкг/см³

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки метанолом при перемешивании. Стандартный раствор N 2 используют для приготовления градуировочных растворов и стандартных растворов для хроматографического исследования и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение 2 месяцев.

10.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией пироксасульфона 1,0 мкг/см³

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 3 используют для приготовления градуировочных растворов и стандартных растворов для хроматографического исследования и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией пироксасульфона 0,1 мкг/см³

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 4 используют для приготовления градуировочных растворов и хранят в холодильнике при температуре (4 +/- 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией пироксасульфона 0,025 мкг/см³

Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 2,5 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 5 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией пироксасульфона 0,02 мкг/см³

Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 2,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 6 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.7. Стандартный раствор N 7 с концентрацией пироксасульфона 0,01 мкг/см³

Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 1,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 7 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.8. Стандартный раствор N 8 с концентрацией пироксасульфона 0,005 мкг/см³

Из стандартного раствора N 7 отбирают пипеткой 5,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 8 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.9. Стандартный раствор N 9 с концентрацией пироксасульфона 0,002 мкг/см³

Из стандартного раствора N 6 отбирают пипеткой 1,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 9 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.10. Стандартный раствор N 10 с концентрацией пироксасульфона 0,001 мкг/см³

Из стандартного раствора N 7 отбирают пипеткой 1,0 см³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см³. Доводят объем до метки смесью метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 10 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.11. Стандартные растворы пироксасульфона с концентрацией 5,00; 2,00; 1,00; 0,50; 0,25; 0,20; 0,10 и 0,05 мкг/см³ для внесения в контрольные образцы и для проверки хроматографического поведения пироксасульфона на концентрирующих патронах и колонке с оксидом алюминия.

Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора N 1 готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,0; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³ пироксасульфона и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы воды и почвы.

Методом последовательного разведения ацетоном стандартного раствора N 1 готовят растворы, содержащие по 1,00; 0,50; 0,25; 0,20; 0,10 и 0,05 мкг/см³ пироксасульфона и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы семян и масла сои.

Для проверки хроматографического поведения на концентрирующих патронах методом последовательного разведения ацетоном стандартного раствора N 1 готовят раствор, содержащий 0,1 мкг/см³ пироксасульфона.

Для проверки хроматографического поведения на колонке с окисью алюминия методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора N 1 готовят раствор, содержащий 0,1 мкг/см³ пироксасульфона.

10.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость отклика фрагментарного иона, используемого для количественного определения, от концентрации пироксасульфона в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 6-ти растворам для градуировки с концентрацией 0,001; 0,002; 0,005; 0,010; 0,020 и 0,025 мкг/см³.

В инжектор хроматографа вводят по 5 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 11.8. Осуществляют не менее 5-ти параллельных измерений.

Производят расчет параметров градуировочной характеристики (при помощи программного обеспечения): формулы зависимости отклика фрагментарного иона от концентрации пироксасульфона в растворе, коэффициента корреляции, который должен быть не менее 0,995 и регрессионных остатков, которые не должны превышать 20% для каждого уровня градуировочной характеристики.

Если линейность градуировочной характеристики была продемонстрирована, то при анализе серий образцов допускается устанавливать градуировочную характеристику методом абсолютной калибровки при однократном измерении по 5-ти и более уровням концентраций, охватывающим весь диапазон измерений. Данные для построения градуировочной зависимости набираются перед началом серии анализов и после ее окончания (рамочная калибровка; не менее 10 измерений не менее чем по пяти уровням концентраций). По полученным данным производят расчет параметров градуировочной характеристики. Рекомендуется в серию анализов образцов включать не более 12 инъекций.

10.4. Подготовка колонки с 3 г окиси алюминия для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения пироксасульфона на ней

Колонку с окисью алюминия используют для очистки экстрактов семян сои.

10.4.1. Подготовка колонки с 3 г окиси алюминия для очистки экстракта.

В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 3 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш. и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 см³ ацетонитрила.

10.4.2. Проверка хроматографического поведения пироксасульфона на колонке с 3 г окиси алюминия.

В химический стакан объемом 100 см³ вносят 1 см³ стандартного раствора пироксасульфона в ацетонитриле с концентрацией 0,1 мкг/см³, прибавляют туда же 9 см³ ацетонитрила, перемешивают и вносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см³ и упаривают досуха при температуре не выше плюс 40 °C.

Химический стакан обмывают тремя порциями ацетонитрила объемом 10 см³ каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают в отдельную отгонную колбу объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 5 см³ смеси метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему) и анализируют на содержание пироксасульфона в условиях хроматографирования по п. 11.5.

Определяют фракции, содержащие пироксасульфон, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюентов.

Изучение поведения пироксасульфона на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.

10.5. Подготовка концентрирующих патронов N 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения пироксасульфона на них

Концентрирующий патрон N 1 используют для очистки экстрактов масла сои.

10.5.1. Подготовка концентрирующих патронов N 1 для очистки экстракта.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см³/мин.

Патрон N 1 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 2 см³ гексана. Элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

10.5.2. Проверка хроматографического поведения пироксасульфона на концентрирующих патронах N 1.

В экстракт контрольного образца масла сои, приготовленного по п. 11.4.1, вносят 1 см³ стандартного раствора пироксасульфона в ацетоне с концентрацией 0,1 мкг/см³, элюат собирают и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Маслянистый остаток растворяют в 5,0 см³ гексана, отбирают аликвоту объемом 1,0 см³ и вносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Исходную колбу последовательно обмывают 10 см³ гексана и тремя порциями по 10 см³ каждая смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 и последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции растворителей собирают в отдельную отгонную колбу объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток после упаривания каждой фракции элюата растворяют в 5 см³ смеси метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему), фильтруют через бумажный фильтр в виалу объемом не менее 10 см³ и анализируют на содержание пироксасульфона в условиях хроматографирования по п. 11.5.

Определяют фракции, содержащие пироксасульфон, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюентов.

Изучение поведения пироксасульфона на концентрирующих патронах N 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

10.6. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии

Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре плюс 40 °C в течение 3 - 4 часов.

11.1. Вода

11.1.1. Подготовка образца воды.

Образец воды объемом 100 см³ фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Отбирают 5 см³ отфильтрованной воды, помещают в стеклянную виалу объемом 20 см³, прибавляют туда 5,0 см³ метанола и 2,5 см³ смеси метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему), тщательно перемешивают. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 5 мм³ вводят в хроматограф.

11.2. Почва

11.2.1. Экстракция.

При каждой экстракции в банку с пробой и растворителем помещают 3 стальных шарика, которые перед центрифугированием удаляют.

Образец почвы массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см³, прибавляют 5 см³ дистиллированной воды, 50 см³ ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Затем пробу центрифугируют 5 минут при скорости 4000 оборотов в минуту. Супернатант фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в отгонную колбу объемом 250 см³. Экстракцию повторяют еще раз, используя 50 см³ ацетонитрила в тех же условиях, пробу центрифугируют 5 минут при скорости 4000 оборотов в минуту. Экстракт фильтруют и объединяют с предыдущим в отгонной колбе объемом 250 см³. К экстракту в колбе прибавляют 5 см³ дистиллированной воды и упаривают его до водного остатка (~ 4 - 5 см³) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

11.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

К водному остатку в колбе, полученному по п. 11.2.1, прибавляют 100 см³ дистиллированной воды, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см³, туда же прибавляют 5,0 см³ насыщенного раствора хлорида натрия. Колбу обмывают 30 см³ хлористого метилена, переносят смыв в делительную воронку и встряхивают ее 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке хлористый метилен (нижний слой) собирают через безводный сульфат натрия в чистую отгонную колбу объемом 250 см³. Процедуру повторяют еще двумя порциями хлористого метилена объемом по 30 см³ каждая, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 минуты. Хлористый метилен пропускают через безводный сульфат натрия и объединяют в колбе объемом 250 см³. Осушитель обмывают 10 см³ хлористого метилена, объединяют смыв с основным экстрактом и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 5 см³ смеси метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему), отбирают 1 см³ экстракта, переносят в виалу объемом 20 см³, прибавляют туда же 9 см³ смеси метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему), тщательно перемешивают. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 5 мм³ вводят в хроматограф.

11.3. Семена сои

11.3.1. Экстракция.

Образец измельченных семян сои массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют 50 см³ ацетона и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют в отгонную колбу объемом 250 см³ через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще раз в тех же условиях, используя 50 см³ ацетона. Экстракт фильтруют, объединяют с предыдущим в колбе объемом 250 см³ и упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

11.3.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

Маслянистый остаток, полученный по п. 11.3.1, растворяют в 30 см³ гексана, тщательно обмывают стенки колбы и переносят в сухую делительную воронку объемом 250 см³. Исходную колбу повторно обмывают 30 см³ гексана и объединяют смывы в делительной воронке объемом 250 см³.

Пироксасульфон экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 30, 20 и 20 см³, каждый раз интенсивно встряхивая воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке ацетонитрил (нижний слой) объединяют в отгонной колбе объемом 250 см³ и упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

11.3.3. Очистка экстракта на колонке с 3 г окиси алюминия.

Маслянистый остаток, полученный по п. 11.3.2, растворяют в 5 см³ ацетонитрила, отбирают аликвоту объемом 1 см³ (1/5 часть) и помещают в химический стакан объемом 100 см³, в который прибавляют 9 см³ ацетонитрила, перемешивают и вносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см³. Химический стакан обмывают последовательно двумя порциями по 10 см³ ацетонитрила, вносят на колонку, элюаты объединяют с предыдущим в колбе объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 10 см³ смеси метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему), пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 5 мм³ вводят в хроматограф.

11.4. Масло сои

11.4.1. Экстракция и очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

Образец масла сои массой 5 г помещают в химический стакан объемом 100 см³, прибавляют 25 см³ гексана, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см³. Химический стакан обмывают еще одной порцией гексана объемом 25 см³ и объединяют с предыдущим в делительной воронке объемом 250 см³.

Химический стакан обмывают 30 см³ ацетонитрила, переносят в делительную воронку с гексановым экстрактом и интенсивно встряхивают 2 минуты. После разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в чистый химический стакан объемом 100 см³. Пироксасульфон из гексанового слоя в делительной воронке экстрагируют еще двумя порциями ацетонитрила объемом по 30 см³ каждая, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 минуты. После разделения фаз нижний ацетонитрильный слой объединяют в чистый химический стакан объемом 100 см³.

Объединенный ацетонитрильный экстракт возвращают в делительную воронку, прибавляют туда 75 см³ гексана и интенсивно встряхивают 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный собирают в отгонную колбу объемом 250 см³, верхний слой (гексановый) отбрасывают.

Ацетонитрильный экстракт упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

11.4.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах N 1.

Маслянистый остаток, полученный по п. 11.4.1, растворяют в 5 см³ гексана, отбирают 1 см³ экстракта и вносят на подготовленный концентрирующий патрон N 1. Элюат отбрасывают. Исходную колбу обмывают 10 см³ гексана. Элюаты отбрасывают.

Пироксасульфон элюируют с патрона двумя порциями по 10 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1 (по объему). Элюаты объединяют в отгонной колбе объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 5 см³ смеси метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему), фильтруют полученный раствор через бумажный фильтр в виалу объемом не менее 10 см³. Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 5 мм³ вводят в хроматограф.

11.5. Хроматографические и масс-спектрометрические условия

11.5.1. Система высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектором.

11.5.2. Хроматографические условия.

Колонка хроматографическая стальная, длиной 100 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 3,5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18.

Предколонка хроматографическая стальная, длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18.

Температура колонки: плюс 40 °C.

Подвижная фаза: A - 0,1% водный раствор муравьиной кислоты, B - 0,1% раствор муравьиной кислоты в метаноле (% по объему) в градиентном режиме со скоростью потока 0,3 см³/мин.

Режим переключения шестипортового крана, кран с электроприводом: с 0 по 12 минуту - в слив; с 12 по 17 минуту - в источник масс-детектора; с 17 по 22 минуту - в слив.

Объем вводимой пробы: 5 мм³.

11.5.3. Масс-спектрометрические условия.

Источник ионов - электроспрей.

Время подачи элюента в источник масс-детектора: с 12 по 17 минуту.

Газ-осушитель - азот с температурой плюс 320 °C, расход 10 м³/мин.

Расход газа периферийного слоя 11 м³/мин.

Температура газа периферийного слоя плюс 250 °C.

Давление в распылителе 30 psi.

Напряжение на входе в капилляр 3500 В.

Напряжение умножителя: с 0 по 12 минуту - 0 В, с 12 по 18 - +200 В, с 18 по 22 мин - 0 В.

Режим ионизации - положительный.

Режим сканирования - мониторинг множественных реакций (MRM).

Детектируемые переходы:

Пироксасульфон: - количественный переход, энергия соударения - 13 В; - качественный переход, энергия соударения - 29 В. Энергия фрагментации 145 В, время сканирования 200 мс, напряжение на ускорителе ячейки 7 В.

Образцы, дающие пики больше, чем стандартные растворы пироксасульфона с концентрацией 0,025 мкг/см³, разбавляют.

12.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание пироксасульфона в пробах рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб:

где X - содержание пироксасульфона в пробе, мг/дм³ или мг/кг;

S_ст - высота (площадь) пика стандарта, мм;

S_пр - высота (площадь) пика образца, мм;

A - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемого образца, г (см³);

P - содержание пироксасульфона в аналитическом стандарте, %.

13.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (2):

где X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг или мг/дм³;

r - значение предела повторяемости (таблица 1), при этом .

При невыполнении условия (2) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

14.1. Результат анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"- при определении остаточного количества пироксасульфона в воде - содержание вещества в пробе менее 0,005 мг/дм³;

- при определении остаточного количества пироксасульфона в почве, семенах и масле сои - содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг".

15.1. Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6.

Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание пироксасульфона в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,001 до 0,025 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение:

где X - концентрация пироксасульфона контрольного измерения, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора пироксасульфона в смеси метанола с водой в соотношении 1:1 (по объему), взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

20 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает 20%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов пироксасульфона, предусмотренных методикой выполнения измерения. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 10.3.

15.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

где - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

где - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

где , , C_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 13.1), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (4) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (4) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

15.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

где X₁, X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, N 2051-79 от 21.08.79 г.

3. ГОСТ Р 8.563 "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений".

4. ГОСТ ISO/IEC 17025 "Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий".

5. ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Части 1 - 6".

6. РМГ 76 "Государственная система обеспечения единства измерений. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

7. РМГ 61 "Государственная система обеспечения единства измерений. Показатели точности, правильности, прецизионности методик количественного химического анализа. Методы оценки".

8. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

9. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

10. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования".

11. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

12. ГОСТ 12.0.004 "Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения".

13. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

14. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

15. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

16. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

17. ГОСТ 6709 "Вода дистиллированная. Технические условия".

18. ГОСТ 5556 "Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия".

19. ГОСТ 9293 "Азот газообразный и жидкий. Технические условия".

20. ГОСТ 6995 "Реактивы. Метанол-яд. Технические условия".

21. ГОСТ 20490 "Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия".

22. ГОСТ 5848 "Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия".

23. ГОСТ 4166 "Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия".

24. ГОСТ 4233 "Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия".

25. ГОСТ 4201 "Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия"

26. ГОСТ 31861 "Вода. Общие требования к отбору проб".

27. ГОСТ 17.4.3.01 "Охрана природы. Почвы. Общие требования к отбору проб".

28. ГОСТ 28168 "Почвы. Отбор проб".

29. ГОСТ 10852 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб".

30. ГОСТ 17109 "Соя. Требования при заготовках и поставках".

31. ГОСТ 31760 "Масло соевое. Технические условия".

32. ГОСТ 32190 "Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб".