"МУК 4.1.3758-22. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций флуазинама в атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 24.05.2022)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, А.А. Ивченкова).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 24 мая 2022 г.

3. Введены впервые.

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) для определения в атмосферном воздухе населенных мест массовой концентрации флуазинама в диапазоне 0,0008 - 0,0080 мг/м³.

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль загрязнения воздушной среды, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими контроль качества и безопасности объектов окружающей среды, а также условий безопасности труда работающих.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

2.1. Флуазинам - 3-хлор-N-(3-хлор-5-трифторметил-2-пиридил)-, ,-трифторо-2,6-динитро-р-толуидин <1>. Брутто-формула C₁₃H₄C₁₂F₆N₄O₄. Молекулярная масса 465,1.

--------------------------------

<1> В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

2.2. Физические и химические свойства: желтое кристаллическое вещество. Температура плавления плюс 117 °C. Давление паров при плюс 20 °C 7,5 МПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода K_owlogP = 4,03. Растворимость (г/дм³) при плюс 20 - 25 °C: ацетон - 853, этилацетат - 722, дихлорметан - 675, н-гексан - 8, метанол - 192, толуол - 451. Растворимость в воде - 135 мг/дм³ (pH 7). Вещество устойчиво к кислотам, щелочам и нагреванию. DT₅₀ 42 дня (pH 7), 6 дней (pH 9), стабилен при pH 5. Фотолиз в водной среде DT₅₀ 2,5 дня (pH 5).

2.3. Краткая токсикологическая характеристика: острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс - 4500 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс - более 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LD₅₀) для крыс - 0,463 - 0,476 мг/м³ воздуха. Флуазинам не оказывает раздражающего действия на кожу и раздражает слизистую оболочку глаз.

2.4. Область применения препарата: флуазинам - фунгицид защитного действия, обладает слабой системной активностью, используется в качестве средства борьбы с возбудителями фитофтороза и альтернариоза картофеля, эффективен против возбудителей серой гнили на винограде, парши на яблоне, килы на крестоцветных.

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

4.1. Метод основан на определении флуазинама методом ВЭЖХ на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

4.2. Концентрирование вещества из воздуха осуществляют на сорбционные трубки, заполненные пористым сорбентом, экстракцию с трубок проводят ацетоном.

4.3. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 2 - 4.

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостные хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на приборы.

8.1. Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, смеси растворителей для растворения проб, подвижной фазы, установление градуировочных характеристик, отбор проб.

8.2. Очистка органических растворителей.

8.2.1. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Хранят в емкости из темного стекла не более 3 месяцев.

8.2.2. Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

8.3. Приготовление раствора уксусной кислоты в воде с объемной долей 2%. Для приготовления 2%-го раствора уксусной кислоты в мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 20 см³ ледяной уксусной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

8.4. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ. В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 200 см³ 2% уксусной кислоты, добавляют 800 см³ ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

8.5. Кондиционирование хроматографической колонки. Промывают колонку подвижной фазой (п. 8.4) не менее 30 минут при скорости подачи растворителя 1,0 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

8.6. Приготовление градуировочных растворов.

8.6.1. Исходный раствор флуазинама для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0005) г флуазинама, растворяют в 50 - 60 см³ метанола, доводят до метки, перемешивают. Раствор хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C в течение 3 месяцев.

Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

8.6.2. Раствор N 1 флуазинама для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора флуазинама с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 8.6.1), разбавляют метанолом до метки. Градуировочный раствор N 1 хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C в течение месяца.

8.6.3. Рабочие растворы N 2 - 5 флуазинама для градуировки (концентрация 0,05 - 0,5 мкг/см³). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 0,5; 1,0; 2,0 и 5,0 см³ раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 8.6.2), доводят до метки подвижной фазой (подготовленной по п. 8.4), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией флуазинама 0,05; 0,1; 0,2 и 0,5 мкг/см³ соответственно. Растворы хранятся в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C в течение недели.

8.7. Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации флуазинама устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки N 2 - 5.

В инжектор хроматографа вводят по 50 мм³ каждого градуировочного раствора, приготовленного по п. 8.6.3, и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.2. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площадь пика флуазинама.

8.8. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание флуазинама в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 0,5 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

где: A - величина расхождения, %;

X - концентрация вещества в растворе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (B = 10% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов флуазинама, предусмотренных методикой измерения. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 8.7.

9.1. Отбор проб осуществляется в соответствии с методическими документами <2>.

--------------------------------

<2> ГОСТ 17.2.3.01 "Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов".

9.2. Воздух с объемным расходом 2 дм³/мин аспирируют через сорбционные трубки.

Для измерения концентрации флуазинама на уровне предела обнаружения (0,0008 мг/м³) необходимо отобрать 62,5 дм³ воздуха.

Срок хранения отобранных проб в холодильнике при температуре плюс (4 +/- 2) °C - 10 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре минус (18 +/- 2) °C.

10.1. Вещество с трубок экстрагируют следующим образом: содержимое сорбционной трубки (сорбент и стекловату) переносят в мерную пробирку вместимостью 10 см³, заливают 5 см³ ацетона, помещают на ультразвуковую ванну на 5 минут. Растворитель декантируют в круглодонную колбу вместимостью 50 см³, сорбент еще дважды промывают новыми порциями ацетона объемом 5 см³, выдерживая на ультразвуковой ванне по 5 мин.

Объединенный экстракт переносят (через воронку) в круглодонную колбу вместимостью 50 см³, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше плюс 30 °C досуха.

Сухой остаток растворяют в 1 см³ подвижной фазы (подготовленной по п. 8.4), тщательно перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 10.2.

10.2. Условия хроматографирования:

- жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором;

- колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая сорбент C18, зернением 5 мкм;

- температура колонки: комнатная;

- подвижная фаза: 2%-я уксусная кислота - ацетонитрил (20:80, по объему);

- скорость потока элюента: 1,0 см³/мин;

- рабочая длина волны: 258 нм;

- объем вводимой пробы: 50 мм³;

- ориентировочное время выхода флуазинама: 6,6 - 6,8 мин.

Линейный диапазон детектирования: 2,5 - 25 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор флуазинама с концентрацией 0,5 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (подготовленной по п. 8.4).

11.1. Концентрацию флуазинама в пробе воздуха (X), мг/м³, рассчитывают по формуле:

где A - концентрация флуазинама в хроматографируемом растворе, найденные по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

W - объем раствора, подготовленного для хроматографирования, см³;

Кр - кратность разбавления (если экстракт подвергался разбавлению);

Vt - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 0 °C), дм³.

где T - температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), °C;

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин;

t - длительность отбора пробы, мин;

R - коэффициент, равный 0,357 для атмосферного воздуха.

12.1. Результат количественного анализа представляют в виде:

где X - результат определения в мг/м³;

- граница абсолютной погрешности, мг/м³.

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, табл. 1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание флуазинама в пробе атмосферного воздуха менее 0,0008 мг/м³" <3>.

--------------------------------

<3> 0,0008 мг/м³ - предел обнаружения при отборе 62,5 дм³ атмосферного воздуха.

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6). Периодичность и формы контроля определяется руководством по качеству.

13.2. Показатели повторяемости и воспроизводимости, пределы повторяемости и воспроизводимости при P = 0,95 приведены в табл. 5.

13.3. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздушной среды. Объем отобранных для контроля процедуры выполнения анализа проб воздуха должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора проб экстракт делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики, и получают результат анализа исходной рабочей пробы - X. Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (C_д) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы с добавкой - X'. Результаты анализа исходной рабочей пробы (X) и рабочей пробы с добавкой (X') получают в условиях повторяемости (один аналитик, использование одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.).

Величина добавки должна удовлетворять условию:

где - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой), мг/м³.

Допустимо характеристику погрешности результатов анализа при внедрении методики в лаборатории устанавливать на основе выражения , с последующим уточнением по мере накопления информации.

Контроль проводят путем сравнения результата контрольной процедуры К_к с нормативом контроля К.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

где , , C_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.4. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости R:

где X₁, X₂ - результаты измерений в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/м³;

, согласно табл. 5.

Если выполняется условие (2), то воспроизводимость измерений считается удовлетворительной.

При превышении норматива контроля воспроизводимости эксперимент повторяют, при повторном превышении указанного норматива выясняют причины и по возможности их устраняют.

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

3. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

4. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

5. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

6. ГОСТ OIML R 111-1 "Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов E(1), E(2), F(1), F(2), M(1), M(1-2), M(2), M(2-3) и M(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

7. ГОСТ 2603 "Реактивы. Ацетон. Технические условия".

8. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

9. ГОСТ 20490 "Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия".

10. ГОСТ 4221 "Реактивы. Калий углекислый. Технические условия".

11. ГОСТ 6995 "Реактивы. Метанол-яд. Технические условия".

12. ГОСТ 61 "Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия".

13. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

14. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

15. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

16. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования".

17. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

18. ГОСТ 17.2.3.01 "Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов".