"МУК 4.1.033-95. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение селена в продуктах питания. Методические указания"
(утв. Госкомсанэпиднадзором России 24.07.1995)

1. Разработаны Институтом питания РАМН (Тутельян В.А., Хотимченко С.А., Голубкина Н.А.).

2. Утверждены и введены в действие Председателем Госкомсанэпиднадзора России - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Е.Н. Беляевым 24 июля 1995 г.

3. Введены впервые.

Необходимость контроля за содержанием селена в продуктах питания обусловлена узким интервалом допустимого и достаточного уровня потребления этого микроэлемента человеком, составляющим 50 - 200 мкг/день.

При длительном поступлении высоких доз селена могут наблюдаться токсикозы, при уровне ниже минимального предела отмечается увеличение риска возникновения и развития кардиологических и ряда онкологических заболеваний, ослабление антиоксидантной защиты организма.

Ранее в России не проводился контроль за содержанием селена в пищевых продуктах в связи с отсутствием утвержденных методов анализа.

С введением Методических указаний появляется возможность получения данных о содержании селена в различных продуктах питания как местного производства, так и импортируемых из-за рубежа.

Методические указания предназначены для учреждений госсанэпиднадзора и других ведомств, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов.

Нижний предел определения селена - 0,08 мкг/кг (мкг/куб. дм).

Отбор продуктов питания осуществляется в несколько этапов: отбор транспортных упаковок, отбор пробы и навесок для анализа.

Каждая из перечисленных операций должна проводиться в строгом соответствии с требованиями ГОСТов на исследуемые продукты: ГОСТ 5667-65 "Хлеб и хлебобулочные изделия", ГОСТ 27668-88 "Мука и отруби", ГОСТ 26312.1-84 "Крупа", ГОСТ 8756-70 "Продукты пищевые консервированные", ГОСТ 7269-79 "Мясо", ГОСТ 7202.0-74 "Мясо птицы", ГОСТ 9792-73 "Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц", ГОСТ 3622-68 "Молоко и молочные продукты", ГОСТ 7631-85 "Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки".

Отобранные образцы продуктов герметично упаковывают в полиэтиленовые мешки или стеклянные банки с притертыми крышками. Образцы доставляют в лабораторию для анализа сразу же после отбора проб или, в случае необходимости, хранят в сухом месте, а для скоропортящихся продуктов осуществляют замораживание - 4 - 10 °С, используя для этой цели холодильники или соответствующие приспособления.

К исследованию скоропортящихся образцов следует приступать в день их доставки в лабораторию. При отсутствии такой возможности образцы должны хранить при указанной выше температуре не более недели со времени отбора среднего образца.

Образцы продуктов (зерновые, мясо, рыба, грибы) перед проведением анализа сушат при температуре не выше 60 °С на воздухе или в эксикаторе над пятиокисью фосфора. Консервы, колбасные изделия и молочные продукты допускается анализировать без предварительного высушивания.

Высушенные образцы растирают в фарфоровой ступке, перемешивают и отбирают пробу на анализ. Консервированные продукты перед проведением анализа гомогенизируют.

Алюминиевый блок сжигания на 40 - 60 проб с глубиной отверстий 6,5 см и диаметром, на 0,01 см превышающим диаметр используемых пробирок для сжигания. Блок сжигания должен быть снабжен устройством регулировки температуры: реле, контактным термометром.

Электроплитка бытового назначения по ГОСТ 14919-83.

Контактный термометр, работающий в диапазоне температур 0 - 200 °С, по ГОСТу 9871-75.

Электрореле по ТУ 25111378-77.

Весы аналитические ВЛП-20 или другие лабораторные весы 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 20 г по ГОСТу 19491-74.

Баня водяная с терморегулятором.

Микроизмельчитель ткани РТ-2 по ТУ 64-1-1505-79.

Спектрофлуориметр Hitachi MPF-2A (Япония) или любой другой спектрофлуориметр, работающий в области длин волн: лямбда возбуждения 300 - 500 нм, лямбда эмиссии 300 - 700 нм.

Пробирки с притертыми пробками высотой 12 см.

Колбы конические на шлифах с притертыми пробками вместимостью 50, 100, 200 куб. см по ГОСТу 10394-72.

Цилиндры мерные вместимостью 50 и 100 куб. см по ГОСТу 1770-74.

Колбы мерные вместимостью 500 и 1000 куб. см по ГОСТу 1770-74.

Пипетки (бюретки) вместимостью 0,5; 1,0; 5 и 10 куб. см по ГОСТу 20292-74.

Воронки химические по ГОСТу 8613-75.

Воронка делительная вместимостью 100 куб. см по ГОСТу 25336-82.

Фильтры обеззоленные по ТУ 6-09-1678-77.

Бумага индикаторная универсальная рН 1 - 12 по ТУ 6-09-1181-76.

Аммиак водный плотностью 0,88 г/куб. см по ГОСТу 3760-79.

Вода дистиллированная по ГОСТу 6709-72.

Гексан, C6H14, по ТУ 6-29-3375-78.

2,3-диаминонафталин, чистота не менее 98%, C10H10N2, фирма "Флука".

Кислота азотная, HNO3, по ГОСТу 4461-67.

Кислота соляная, HCl, плотностью 1,19 г/куб. см, по ГОСТу 3118-77.

Кислота хлорная, HClO4, 42% или 57%, по ТУ 6-09-2878-73.

Натрий селенистокислый, Na2SeO3, ч., по ТУ 6-09-1316-76.

Образцы сравнения <*> с известным содержанием селена:

пшеничная мука, молоко сухое, ржаная мука, яичный порошок.

------------------------------------

<*> Образцы могут быть предоставлены по требованию заказчика лабораторией пищевой токсикологии Института питания РАМН, контактный телефон: 971-12-29, Голубкина Надежда Александровна.

Перекись водорода, Н2О2, 30%, по ГОСТу 10929-64.

Тетранатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, C10H12N2Na4О8, по ТУ 6-09-11-1298-79.

Все используемые реактивы должны быть квалификации "чда" или "хч".

Помещение, в котором проводится определение селена, должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции анализа необходимо проводить в вытяжном шкафу с использованием индивидуальных средств защиты.

Работу с 2,3-диаминонафталином следует осуществлять только в резиновых перчатках.

6.1. Приготовление растворов

6.1.1. Растворы соляной кислоты.

6.1.1.1. 0,1 М раствор: 1 куб. см 36%-ной соляной кислоты разбавляют в мерной колбе до 100 куб. см дистиллированной водой.

6.1.1.2. 6 М раствор: 51 куб. см 36%-ной соляной кислоты разбавляют в мерной колбе до 100 куб. см дистиллированной водой.

6.1.2. Раствор аммиака: 25%-ный раствор аммиака разбавляют дистиллированной водой 1:1.

6.1.3. Раствор тетранатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты: 1,25 г тетранатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты растворяют в 100 куб. см дистиллированной воды.

6.1.4. Раствор 2,3-диаминонафталина растворяют в 100 куб. см 0,1 М соляной кислоты при слабом нагревании (10 - 15 минут при температуре не выше 50 °С). Полученный раствор переносят в делительную воронку, трижды экстрагируют гексаном (3 x 15 куб. см), водный слой отделяют, фильтруют через фильтровальную бумагу, хранят под слоем гексана при 0 - +4 °С в темноте до момента флуориметрического определения. Раствор готовят в день проведения анализа.

Все операции проводятся в рассеянном свете! Не допускается использовать смазку шлифов колб и делительной воронки!

6.1.5. Стандартные растворы селенистокислого натрия.

6.1.5.1. Основной стандартный раствор, содержащий 1 мкмоль селена в 1 куб. см: растворяют 0,01729 г селенистокислого натрия в небольшом количестве 0,1 М соляной кислоты в мерной колбе на 100 куб. см и доводят до метки соляной кислотой указанной концентрации. Раствор хранят в темноте не более 1 месяца.

6.1.5.2. Рабочий стандартный раствор, содержащий 1 нмоль селена в 1 куб. см: пипеткой вносят 5 куб. см основного стандартного раствора (п. 6.1.5.1) в мерную колбу вместимостью 500 куб. см и доводят объем до метки 0,1 М соляной кислотой. Раствор хранят в темноте не более месяца.

7.1. Мокрое сжигание

Взвешивают и переносят в пробирки для сжигания от 50 до 100 мг (в зависимости от содержания селена), но не более 100 мг, исследуемых продуктов и соответствующий образец сравнения. Для построения калибровочной кривой в 6 пробирок вносят: 0 (контрольный раствор); 0,1; 0,2; 0,4; 0,5 и 0,6 куб. см стандартного рабочего раствора селенистокислого натрия (п. 6.1.5.2), что соответствует 0; 0,1; 0,2; 0,4; 0,5 и 0,6 нмоль селена в пробе. Во все пробирки добавляют по 1 куб. см азотной кислоты и 0,7 куб. см 52%-ной хлорной кислоты (1 куб. см 42%-ной кислоты) и оставляют при комнатной температуре на 12 - 18 часов. Затем пробирки помещают в блок сжигания и осуществляют минерализацию в температурном режиме: 120 °С - 1 час, 150 °С - 1 час, 180 - 185 °С - 1,5 часа. По окончании процесса растворы образцов должны быть бесцветными. При наличии обугливания сжигание следует повторить на новой навеске, увеличив количество хлорной кислоты до 1,0 куб. см 52% (1,4 куб. см 42%).

7.2. Удаление следов азотной кислоты

Для удаления следов азотной кислоты блок сжигания охлаждают до 150 °С, добавляют к пробам 1 - 2 капли перекиси водорода и выдерживают при указанной температуре в течение 10 минут. По окончании процесса пробы сразу же вынимают из блока сжигания.

К пробам добавляют по 1 куб. см 6 М соляной кислоты и выдерживают при 110 °С в течение 10 минут. По окончании процесса пробы сразу же вынимают из блока сжигания и добавляют по 1 куб. см дистиллированной воды.

7.4. Конденсация селенистой кислоты с 2,3-диаминонафталином

В каждую пробирку добавляют по 0,5 куб. см раствора тетранатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты и по 1 куб. см разбавленного аммиака (по п. 6.1.2). Быстро доводят рН проб до 1 - 1,5 по универсальному индикатору, добавляя в случае необходимости по каплям разбавленный аммиак или 0,1 М соляной кислоты. К полученным растворам приливают по 1,0 куб. см заранее приготовленного раствора 2,3-диаминонафталина (по п. 6.1.4) и выдерживают 30 минут при 50 °С, закрыв предварительно пробирки от попадания прямого света.

По окончании процесса пробы вынимают, охлаждают до комнатной температуры и каждую интенсивно экстрагируют 2,5 куб. см гексана в течение 50 - 60 секунд.

Определяют величину флуоресценции органического экстракта при лямбда возб. 376 нм и лямбда эмиссии 51 нм.

Дополнительный контроль за точностью анализа осуществляют, снимая спектры флуоресценции при указанной длине волны возбуждающего света в интервале длин волн 450 - 600 нм. Получаемые спектры должны иметь один максимум флуоресценции при 519 нм. Точность анализа определяют также сравнением результата определения селена в образце сравнения с регламентируемым значением.

8.1. Массовую долю селена (X) в мкг/кг (мкг/куб. дм) продукта вычисляют по формуле:

где:

С - количество нмолей селена в пробе, определенное по стандартной кривой, нМ;

79 - атомный вес селена;

а - масса навески образца, взятого на анализ, г, или для жидких продуктов объем образца, взятого на анализ, куб. см.

8.2. За окончательный результат принимают среднее арифметическое значение двух определений.

Относительное стандартное отклонение в интервале от 1 до 600 мкг/кг - 10%.