"Методические указания по хроматографическому измерению содержания метилтестостерона и метандростенолона на коже"
(утв. Минздравом СССР 28.09.1989 N 5122-89)

17альфа-Метиландростен-4-ол-17бета-он-3 (метилтестостерон)

17альфа-Метиландростадиен-1,4-ол-17бета-он-3 (метандростенолон)

Определение основано на хроматографическом выделении анализируемых веществ в тонком слое сорбента с последующим проявлением хроматограмм раствором фосфорномолибденовой кислоты и денситометрировании окрашенных зон.

В качестве смывающей жидкости используется этиловый спирт.

Диапазон измеряемого содержания в смыве МТ 0,00014 мг/кв. см - 0,0014 мг/кв. см; МАС от 0,006 до 0,06 мг/кв. см.

Определение избирательно на стадиях сушки, просеивания и фасовки.

Граница суммарной погрешности измерения не превышает +/- 25%.

ПДУ концентраций МТ на коже 0,0003 мг/кв. см; МАС - 0,002 мг/кв. см.

МТ - фармакопейный.

МАС - фармакопейный.

Этиловый спирт, ГОСТ 5963-67.

Углерод четыреххлористый, ГОСТ 20228-74, х.ч.

Ацетон, ГОСТ 2603-79, х.ч.

Фосфорномолибденовая кислота, ТУ 6-09-3540-78, ч.д.а., 10-процентный раствор.

Кислота серная, ГОСТ 4204-77, х.ч.

Система растворителей: смесь четыреххлористого углерода с ацетоном в соотношении 4:1 (по объему).

Проявляющий реактив: готовят перед употреблением, смешивая 10 мл 10-процентного раствора фосфорномолибденовой кислоты с 0,1 мл концентрированной серной кислоты.

Основные стандартные растворы МТ и МАС с концентрацией 1 мг/мл готовят растворением 0,1 г каждого вещества в этиловом спирте в мерной колбе вместимостью 100 мл. Растворы устойчивы в течение месяца.

Стандартные растворы с концентрациями МТ 10 - 20 - 40 - 60 - 80 - 100 мкг/мл, МАС - 50 - 100 - 200 - 300 - 400 - 500 мкг/мл готовят путем соответствующего разбавления 95% этанолом исходных стандартных растворов. Растворы устойчивы в течение 7 дней.

Марлевые тампоны.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 10565-75, размером 95 x 165 мм.

Пульверизатор стеклянный.

Хроматографические пластинки "Силуфол" UV-254, размером 75 x 150 мм.

Микропипетки, ГОСТ 1770-74, вместимостью 0,1 мл.

Пипетки, ГОСТ 1770-74, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл с делениями.

Стаканы лабораторные стеклянные, ГОСТ 10394-74, вместимостью 25 мл.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, вместимостью 25 и 100 мл.

Пробирки градуированные с пришлифованными пробками, ГОСТ 10515-75, вместимостью 15 мл.

Колбы грушевидные, ГОСТ 10394-72, вместимостью 25 мл.

Вакуумная установка.

Сушильный шкаф.

Пинцет медицинский.

Денситометр "БИАН-170".

Трафарет размером 36 кв. см накладывают на исследуемый участок кожного покрова работающего двумя марлевыми тампонами, смоченными в спирте, проводят смыв, затем сухим тампоном промокают смываемый участок кожи. Все тампоны складывают в пробирку или стакан. Одновременно проводят контрольный смыв с кожи у работающих, не контактирующих с МТ и МАС.

Тампоны тщательно промывают двумя порциями спирта по 5 мл каждая, сливают полученный раствор в грушевидную колбу и упаривают под вакуумом при температуре 60 - 70 °С. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл спирта и используют для анализа.

При хроматографировании смыва с чистой кожи на пластинке "Силуфол" образуется слабо окрашенная полоса. С целью исключения влияния "фона" на результаты анализа для приготовления шкалы стандартов используют спирт, полученный после смыва с чистой кожи.

Количественное измерение содержания МТ и МАС в анализируемом объеме проводят по отношению интегральных значений содержаний вещества в пробах и "свидетелях" с помощью денситометра "БИАН-170".

Содержание МТ и МАС в мг/кв. см (C) вычисляют по формуле:

где Q - количество вещества во всей пробе, мг;

S - площадь исследуемой части тела, кв. см.