"Методические указания по определению ТМТД и продукта его превращения ТМТМ в воде, зерновых культурах и растительном материале методом тонкослойной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 21.06.1987 N 4334-87)

1. Краткая характеристика препаратов приведена в таблице 1.

2. Методика определения ТМТД и продуктов его превращения в различных средах животного и растительного происхождения.

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на хроматографировании исследуемых соединений в слое сорбента (силикагель, пластинки силуфол) после извлечения их органическим растворителем из анализируемой пробы.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций 0,01 - 0,5 мг/кг. Чувствительность метода (ТМТД): вода - 0,01 мг/л, доверительный интервал среднего 81,3 +/- 7,1%; зерновые, растения - 0,1 - 0,5 мг/кг, доверительный интервал среднего 74,8 +/- 7,9%.

2.1.3. Избирательность метода

Определению не мешают хлор и фосфорорганические пестициды, могут мешать азотсодержащие соединения.

2.2. Реактивы, растворы

Хлороформ, х.ч., ТУ 6-09-788-76.

Ацетон, ч., ГОСТ 2603-79.

Гидроокись натрия, ч.д.а., 0,5% водный раствор.

Сульфат натрия безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-76.

Бензол, х.ч., ГОСТ 5956-75.

Серная кислота, х.ч., ГОСТ 4204-77, 10% раствор.

Нитрат висмута основной, ч.д.а., ГОСТ 4110-75.

Иодид калия, х.ч., ГОСТ 4232-74.

Сульфат меди, ч., ГОСТ 4165-78.

Уксусная кислота ледяная, х.ч., ГОСТ 18290-72.

Пластинки "силуфол" (ЧССР).

Стандартный раствор препарата (готовят отдельно каждый раствор).

10 мг вещества растворяют в 100 мл хлороформа. Хранят в холодильнике. Срок хранения до 6 мес.

Проявляющие реактивы: N 1 - реактив Драгендорфа. Основной раствор:

А) - 3,85 г основного нитрата висмута растворяют в 55 мл дистиллированной воды и прибавляют 25 мл ледяной уксусной кислоты;

Б) - 8 г иодида калия растворяют в 20 мл дистиллированной воды.

Растворы А и Б сливают вместе. Срок хранения в темном месте до 6 месяцев.

Рабочий раствор (для обработки пластинок). К 7 мл основного раствора прибавляют 50 мл дистиллированной воды и 10 мл ледяной уксусной кислоты. Срок хранения в темном месте до 10 дней.

Проявляющий реактив N 2 - 1% водный раствор сульфата меди.

2.3. Приборы, посуда

Посуда мерная по ГОСТ 1770-74.

Колбы конические емкостью 100 мл, ГОСТ 10384-72.

Колбы грушевидные для отгонки растворителей, ГОСТ 23932-79.

Воронки делительные емкостью 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Воронки химические, ГОСТ 8613-75.

Испаритель ротационный для отгонки растворителей ИР-1М, ТУ 25-11-917-79.

Камера хроматографическая, ГОСТ 23932-79.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-79.

2.4. Подготовка проб к анализу

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб", утвержденными Зам. Главного государственного санитарного врача СССР N 2051-79.

Отобранные пробы хранят в холодильнике. Срок хранения 5 - 7 дней после отбора.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция

Вода. К 200 мл воды прибавляют 30 мл хлороформа, встряхивают 15 минут в делительной воронке. Экстракцию повторяют дважды. Объединяют хлороформные экстракты, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют до объема 0,2 - 0,3 мл и остаток количественно наносят на хроматографическую пластинку.

Зерновые, растительные культуры. К 25 г пробы прибавляют 2 мл серной кислоты (1:1), перемешивают. Пробу заливают 30 - 40 мл смеси хлороформ-ацетон (2:1), встряхивают 30 минут. Отделяют раствор, экстракцию повторяют дважды. Объединяют экстракт фильтрат, сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют до объема 0,2 - 0,3 мл.

При анализе проб с величиной pH клеточного сока ниже 4 (томаты, вишня и др.) пробу без прибавления серной кислоты экстрагируют смесью хлороформ-ацетон (2:1). Далее поступают так, как описано выше.

2.5.2. Определение методом ТСХ

Пробу, сконцентрированную до объема 0,2 - 0,3 мл, количественно наносят на пластинку "силуфол", смывая остаток в колбе смесью хлороформ-ацетон (2:1). Рядом наносят 2 - 10 мкг стандартного раствора препаратов. Пластинку хроматографируют в системе бензол-ацетон (49:0,5). После того, как фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают, высушивают на воздухе. Для обнаружения препаратов пластинку обрабатывают проявляющими реактивами либо N 1, либо N 2.

При обработке реактивом N 1 (реактив Драгендорфа) препараты обнаруживаются: ТМТД - пятно синего цвета, ТМТМ - пятно оранжевого цвета на светло-коричневом фоне. Окраска устойчива в течение 15 - 20 минут.

При обработке реактивом N 2 (раствор сульфата меди) препараты обнаруживаются: ТМТД - пятно ярко-зеленого цвета, ТМТМ - пятно красно-черного цвета (окраска быстро исчезает).

Величина Rf составляет: ТМТД - 0,7, ТМТМ - 0,8.

2.6. Количественное определение

Содержание препарата в пробе вычисляют по формуле:

где:

X - содержание препарата в пробе, мг/кг (мг/л);

A - количество препарата, найденное путем сравнения размера и интенсивности пятен пробы и стандартного раствора, мкг;

P - навеска анализируемой пробы, г (мл).

2.7. Требования безопасности

Выполняются в соответствии с "Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санэпидучреждений системы МЗ СССР", N 2455-81 от 20.10.81.

3. Разработчики

ВНИИГИНТОКС, Киев.