"Методические указания по определению примицида в растительном материале и в почве с помощью тонкослойной и газожидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 21.11.1985 N 4028-85)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1.1. Примицид, пиримифос-этил, ПП 211

Контактный инсектицид. Предложен для борьбы с обитающими в почве вредителями, в том числе с проволочниками на картофеле и кукурузе; мухами на луке, моркови и капусте; долгоносиками на сахарной свекле.

1.2. Активное вещество: 0-(2-диэтиламино-6-метилпиримидил-4)-0,0-диэтилтиофосфат.

1.3. Структурная формула:

1.4. Технический продукт - бесцветная с желтым оттенком маслянистая жидкость. Растворимость в воде при 30 °С 1 мг/куб. м, смешивается со многими органическими растворителями. Устойчив в нейтральной среде, сравнительно быстро разрушается при нагревании с растворами щелочей и минеральных кислот. Выпускается в виде 30% с.п., 50-процентного э.к., 5 и 10-процентных гранул и 20-процентного порошка для обработки семян.

2.1.1. Принцип метода

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

2.1.3. Избирательность метода

Другие фосфорорганические инсектициды определению не мешают.

Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.

Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79.

Кальций хлористый, ч., ГОСТ 4161-77.

Натрий сернокислый, безводный, ч.д.а, ГОСТ 4166-76.

Уголь активированный марки Кад-молотый или ОУ-А.

Стекловата.

Хроматографические пластинки "Силуфол-UV-254", ЧССР.

Хроматон N-супер, пропитанный 5% SE-30 (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.

Хроматон N-супер, пропитанный 5% XE-60 (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.

Хроматон N-супер, пропитанный 5% OV-17 (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.

Хроматон N-супер, пропитанный 2% ПЭГС (полиэтиленгликольсукцинат) (0,125 - 0,160 мм), ЧССР.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Водород электролитический.

Сжатый воздух.

Проявляющие реагенты:

1. 0,5% раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане (ч., ТУ 6-09-05-63-74), после опрыскивания пластинки нагревают при 110 °С в течение 5 мин.

2. 2% раствор 4-(р-нитробензил)пиридина (ч., ТУ 6-09-15-93-74) в ацетоне, после нагревания хроматограммы при 110 °С в течение 5 мин. и вновь опрыскивают 10% раствором тетраэтиленпентамина (ч., ТУ 6-09-05-804-78) в ацетоне.

3. 0,05% раствор бромфенолового синего (ч.д.а., ТУ 6-09-3719-74) в 0,5% раствора азотнокислого серебра (х.ч., ГОСТ 1277-75), приготовленного на ацетоне. После проветривания хроматограммы и прогревания ее в термостате при 35 - 40 °С вновь опрыскивают 5% раствором уксусной кислоты (х.ч., ГОСТ 18290-72) или лимонной кислоты (х.ч., ГОСТ 3652-69).

Основной стандартный раствор примицида в ацетоне или в гексане - 100 мкг/куб. см.

Рабочие стандартные растворы готовят разбавлением основного раствора - 10 мкг/куб. см, 1 мкг/куб. см, 0,1 мкг/куб. см.

Газовый хроматограф "Цвет-106".

Хроматографические колонки стеклянные длиной 1 м и внутренним диаметром 3 мм.

Ротационный вакуумный испаритель, ТУ 25-11-917-74.

Аппарат для встряхивания колб, ТУ 64-1-1081-73.

Холодильник бытовой.

Термостат.

Хроматоскоп (хемоскоп).

Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-75.

Колбы конические со шлифами и пробирками на 100 и 250 куб. см, ГОСТ 10394-72.

Колбы круглодонные для отгонки растворителей, ГОСТ 1770-74.

Делительные воронки на 250 куб. см, ГОСТ 8613-75.

Воронки, ГОСТ 8613-75.

Колбы мерные на 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Микропипетки 0,1 - 0,2 куб. см, ГОСТ 20292-74.

Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.

Опрыскиватель стеклянный, ГОСТ 19391-74.

Микрошприц МШ-10, ТУ 2.833.106.

Пробирки с притертыми пробками на 10 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Растительную пробу измельчают на кусочки 0,5 х 0,5 х 0,5 куб. см и отбирают среднюю пробу 25 г.

Почву естественной влажности или воздушно-сухую просеивают через сито и для анализа отбирают 10 г.

Отбор проб растений и почвы проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб с/х продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР 21 августа 1979 г. N 2051-79.

2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов

Экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр в делительную воронку и экстрагируют трижды 20-ю куб. см гексана. Гексановый слой сливают в конические колбы на 100 куб. см с безводным сернокислым натрием (30 - 50 г) с добавлением незначительного количества активированного угля (20 - 50 мг) для очистки экстракта. Интенсивно помешивают содержимое колбы и отфильтровывают через бумажный фильтр в круглодонные колбы. Отгоняют растворитель до объема 1 куб. см под вакуумом на ротационном испарителе при температуре не более 40 °С.

2.5.2. Хроматография в тонком слое

Экстракт после определения ГЖХ доупаривают до 0,2 куб. см и наносят при помощи капиллярной пипетки на расстоянии 2 см от нижнего края хроматографической пластинки "Силуфол-UV-254". Если в пробе содержится много инсектицида, то рекомендуется брать часть пробы и наносить экстракт в 3 - 5 точек диаметром не более 0,5 см. Стенки колб тщательно смывают несколькими каплями гексана и также наносят в центр пятна. Справа и слева от пробы наносят стандартные растворы, содержащие 1, 5, 10, 20 мкг действующего вещества препарата в зависимости от количества препарата в пробе. Хроматографические пластинки ставят в камеру для хроматографирования со смесью растворителей гексан:ацетон в соотношении 4:1. Край пластинки должен быть погружен в смесь растворителей на 0,5 см. Когда фронт растворителя поднимается на высоту 10 см, пластинку вынимают, подсушивают на воздухе и обрабатывают одним из проявляющих реагентов (2.3). Необходимо отметить, что наиболее чувствительным проявителем является 2,6-дибром-N-хлорхинонимин, а также 4-(р-нитробензил)пиридин.

Пластинки "Силуфол-UV-254" можно смотреть под хроматоскопом без предварительной обработки проявителем.

2.5.3. Определение методом газожидкостной хроматографии

После отгонки растворителя к сухому остатку добавляют 1 - 2 куб. см гексана, колбу закрывают пробкой и тщательно обмывают ее внутреннюю поверхность. Аликвотную часть пробы (1 - 5 мкл) вводят в испаритель хроматографа.

Условия хроматографирования приведены в таблице.

--------------------------------

<*> Хроматограф "Цвет-106" с ТИД, скорость движения ленты самописца 0,2 см/мин.

Содержание примицида в исследуемом объекте в случае тонкослойной хроматографии вычисляют по формуле:

где:

Х - содержание препарата в пробе, мг/кг;

А - количество препарата, обнаруженное в пробе при сравнении со стандартом, мкг;

Р - навеска исследуемой пробы, г.

Содержание примицида в пробе в случае газожидкостной хроматографии определяют методом стандартов и рассчитывают по формуле:

Соблюдаются обычные требования по технике безопасности, необходимые при работе с органическими растворителями, кислотами и щелочами.

Петрова Т.М., Хамнаева Е.И. - Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, г. Ленинград.

5. Методические указания апробированы во ВНИИХСЗР (Новикова К.Ф.).