"Методические указания по определению актеллика в растительном материале, в почве и в воде хроматографией в тонком слое и на газовом хроматографе"
(утв. Минздравом СССР 19.10.1979 N 2085-79)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1.1. Актеллик

1.2. 0,0-диметил-0-(диэтиламино-6-метилпиримидил-4)тиофосфат

1.3. Структурная формула:

Выпускается в форме 25-процентного концентрата эмульсии, 25-процентного препарата для ультрамалообъемного опрыскивания.

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

2.1.3. Избирательность метода

Другие фосфорорганические инсектициды определению не мешают.

2.2. Реактивы и растворы

Силикагель КСК или пластинки "Силуфол UV-254".

5% SE-30 на хроматоне N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм).

Азот, осч.

Водород.

Проявляющие реагенты:

0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане, после опрыскивания нагревание пластинки при 110° в течение 5 мин.

0,5-процентный раствор бриллиантового зеленого в ацетоне, затем экспозиция пластинки в парах брома 20 - 30 сек.

0,05-процентный раствор бромфенолового синего в 0,5-процентном растворе азотнокислого серебра, приготовленного на ацетоне. После проветривания хроматограммы и прогревания ее в термостате при 35 - 40° вновь опрыскивают 5-процентным раствором уксусной кислоты (лимонной кислоты).

2-процентный раствор 4-(P-нитробензил)пиридина в ацетоне после нагревания хроматограммы при 110° в течение 5 мин. вновь опрыскивают 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина в ацетоне.

Реактив Драгендорфа: раствор А - 0,85 г азотнокислого висмута растворяют в смеси 40 мл дистиллированной воды и 100 мл 40-процентной серной кислоты (серную кислоту можно заменить 10 г винной кислоты); раствор Б - 8 г йодистого калия растворяют в 20 мл воды. Растворы А и Б смешивают. Перед употреблением к 6 мл полученной смеси приливают 6 мл 20-процентной серной кислоты (или 12 г винной кислоты) и доводят объем до 25 мл водой.

Стандартный раствор актеллика в ацетоне или в гексане - 1,0 - 5,0 мкг/мл.

2.3. Приборы и посуда

Колбы конические со шлифами и пробками на 50 и 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы круглодонные со шлифами для отгонки растворителей, ГОСТ 10394-72.

Делительные воронки на 50 и 100 мл, ГОСТ 8613-75.

Воронки, ГОСТ 8613-75.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74.

Колонки для адсорбционной хроматографии (300 х 15 мм), МРТУ 42-2590-66.

Аппарат для встряхивания колб.

Ротационный вакуумный испаритель, МРТУ 42-2589-66.

Холодильник бытовой.

Термостат.

Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-63.

Микропипетки 0,1 - 0,2 мл, ГОСТ 20292-74.

Хроматоскоп (хемоскоп).

Камера для опрыскивания, ГОСТ 10565-63.

Опрыскиватель, ГОСТ 19391-68.

Микрошприцы на 10 мкл.

Газовый хроматограф с термоионным детектором (ДТИ).

2.4. Подготовка к определению

Растительную пробу (овощи, фрукты, зеленую массу) измельчают ножом на кусочки 0,5 х 0,5 х 0,5 куб. см и отбирают среднюю пробу 25 г.

Почву в естественном состоянии или воздушно-сухую просеивают через сито и для анализа отбирают 10 г.

Проба воды - 100 мл.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов

Анализируемые навески помещают в конические колбы емкостью 250 мл, пробы воды - в делительные воронки, куда добавляют по 10 г хлористого натрия.

Из растений актеллик экстрагируют трижды по 50 мл 20-процентного ацетона в гексане либо 50-процентным водным ацетоном, либо 50 мл хлороформа; из почвы - 50 мл смеси ацетона с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (1:1); из воды - хлороформом порциями: 120, 100, 75 мл. Экстрагируют при встряхивании в течение 1 часа. Экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр. Объединенные экстракты помещают на 1 час в холодильник. При выпадении осадка пробы следует отфильтровать вторично. Экстракты подвергаются очистке:

а) очистка после экстракции 20-процентным ацетоном в гексане. Экстракт помещают в делительную воронку и отделяют водно-ацетоновую фракцию от гексановой. Водно-ацетоновую фракцию промывают гексаном еще два раза. Объединенные гексановые экстракты фильтруют через слой безводного сернокислого натрия, концентрируют под вакуумом при 40 - 50° до 5 мл. После охлаждения добавляют к ним 5 мл холодного ацетонитрила. Ацетонитрил можно заменить диметилформамидом, однако с первым растворителем очистка происходит значительно лучше. Пробу встряхивают 1 - 2 мин. Гексановый слой отделяют в делительной воронке и вторично дважды чистят пробу ацетонитрилом (диметилформамидом), если это необходимо. Ацетонитрильные (диметилформамидные) экстракты объединяют, переносят в делительную воронку, добавляют к ним 30 мл воды и 20 мл гексана, встряхивают 1 - 2 мин. и после разделения слоев гексановый отделяют, а водно-ацетонитрильный еще раз промывают гексаном и отбрасывают. Объединенные гексановые экстракты сушат безводным сернокислым натрием путем фильтрования и концентрируют под вакуумом до 5 мл. Если проба очищена недостаточно, то ее следует пропустить через колонку (30 см х 1,5 см), заполненную слоем сернокислого натрия (2 - 3 см), окиси алюминия для хроматографии (3 см), активированного угля КАД - молотый или ОУ-А (3 см) и безводного сернокислого натрия (1 см). Предварительно через колонку пропускают 40 - 50 мл хлороформа для уменьшения сорбционной емкости угля. Из колонки актеллик элюируют 120 мл хлороформа при отсасывании с помощью водоструйного насоса. Хлороформ концентрируют до объема 0,3 - 0,5 мл и количество инсектицида определяют хроматографическими методами;

в) очистка после экстракции водным ацетоном. Объединенные экстракты переносят в делительную воронку, добавляют 30 мл гексана для извлечения токсиканта. Далее поступают так, как описано в способе очистки "б".

Экстракты из почвы очищают путем переэкстракции в н-гексане (смотри способ "б").

2.5.2. Хроматография в тонком слое

На расстоянии 2 см от нижнего края хроматографической пластинки с тонким слоем силикагеля, в который внесен флуоресцеин, или на "Силуфол UV-254" наносят сконцентрированные экстракты проб и стандартный раствор актеллика в виде пятен диаметром не более 0,5 см. Если в пробе содержится много инсектицида, то рекомендуется брать часть пробы или наносить экстракт в 4 - 5 точек. Стенки колб тщательно смывают несколькими каплями растворителя, который также наносят в центр пятна. Хроматографические пластинки ставят в камеру для хроматографирования и ожидают, пока фронт растворителя поднимется на высоту 10 см. Хроматографируют в системе гексан - ацетон (5:1) или гексан - этилацетат (7:3). Далее пластинку подсушивают на воздухе и проявляют одним из проявляющих реагентов. Следует указать, что наибольшей чувствительностью обладает проявитель с 2,6-дибром-N-хлорхинонимином и 4-(P-нитробензил)пиридином.

Пластинки со слоем силикагеля, в который внесен флуоресцирующий краситель, или пластинки "Силуфол UV-254" можно просматривать в хроматоскопе, не проявляя их. Инсектицид определяют по тушению флуоресценции.

где:

X - содержание препарата в пробе, мг/кг;

A - количество препарата, найденное в пробе при сравнении со стандартом, мкг;

P - навеска исследуемой пробы, г.

2.5.3. Газохроматографическое определение

После отгонки растворителя к сухому остатку добавляют 1 или <...> мл гексана, колбу закрывают пробкой, тщательно обмывая ее внутреннюю поверхность. Аликвотную часть пробы (2 - 5 мкл) вводят в испаритель хроматографа.

2.6. Обработка результатов анализа приведена в 2.5.2 и 2.5.3.

2.7. Авторы

Настоящая методика включает разработки авторских коллективов:

1. Петрова Т.М., Андреев Ю.Б., Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, г. Ленинград.

2. Красных А.А., Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, пос. Рамонь Воронежской области.