"МУК 4.1.3523-17. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств фосмета в плодах яблони и яблочном соке методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 29.12.2017)

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств фосмета в плодах яблони и яблочном соке в диапазоне 0,2 - 2,0 мг/кг. Методические указания носят рекомендательный характер.

Название по ИЮПАК: O,O-диметил S-фталимидометил фосфородитиоат.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₁₁H₁₂NO₄PS₂.

Молекулярная масса: 317,3.

Агрегатное состояние: кристаллическое вещество.

Цвет, запах: бесцветное вещество с сильным неприятным запахом.

Давление паров (при 25 °C): 0,065 МПа.

Температура плавления: 72,0 - 72,7 °C.

Коэффициент распределения октанол-вода (при 20 °C): K_ow log P_ow ⁼ 2,95.

Растворимость в воде (при 25 °C): 25 мг/дм³.

Растворимость в органических растворителях (г/дм³, при 25 °C): ацетон - 650; бензол - 600; толуол - 300; ксилен - 250; метанол - 50; керосин - 5.

Фосмет быстро гидролизуется в щелочной среде, относительно стабилен в кислой; DT₅₀ (при 20 °C): 13 дней при pH 4,5; менее 12 часов при pH 7; менее 4 часов при pH 8,3.

Быстро разлагается при температуре выше 100 °C. Разлагается в водных растворах на солнечном свету или на стекле.

Краткая токсикологическая характеристика: Фосмет относится к веществам, опасным по острой пероральной токсичности (ЛД₅₀ для крыс - от 130 до 160 мг/кг), к малоопасным - по дермальной токсичности (ЛД₅₀ для крыс и мышей - более 5 000 мг/кг) и к чрезвычайно опасным веществам - по ингаляционной токсичности (ЛК₅₀ (4 часа) для крыс - более 1,6 мг/м³ воздуха).

Фосмет токсичен для пчел, рыб, птиц и диких животных.

Область применения. Фосмет - несистемный инсектицид и акарицид с преимущественно контактным действием со средней продолжительностью действия (10 - 15 дней). Рекомендуется для борьбы с личинками жесткокрылых, тлей, сосущими вредителями, плодовой мухой и паутинным клещом на семечковых, косточковых, с колорадским жуком на картофеле и т.д. Разрешен для борьбы со свекловичными долгоносиками, листовыми тлями, блошками, свекловичной минирующей мухой и другими вредителями на сахарной свекле при нормах расхода 0,9 - 1,0 кг/га, против колорадского жука и других вредителей на картофеле (0,8 кг/га).

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,02 мг/кг массы человека; ПДК в почве - 0,1 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,2 мг/дм³; ПДК в воздухе рабочей зоны - 0,3 мг/м³; ОБУВ в атмосферном воздухе - 0,004 мг/м³.

МДУ в продукции (мг/кг): свекла сахарная - 0,25; ягоды дикорастущие - 0,01; картофель - 0,05.

ВМДУ в импортируемой продукции (мг/кг): голубика, виноград, абрикос, нектарин, персик, плодовые семечковые - 10,0.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении фосмета методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем и очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами.

Идентификация проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность метода достигается за счет подбора колонки и условий хроматографирования.

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-91.

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газожидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения вещества, установление градуировочной характеристики.

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.

Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм³. Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.

Хлористый метилен промывают равным объемом 5%-го раствора гидрокарбоната натрия, осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 12 - 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре 40,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 40,0 °C, отбрасывают.

Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³ и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

7.2.1.1. Приготовление 2%-го раствора сульфата натрия

В мерную колбу на 1 000 см³, куда предварительно наливают около 300 см³ дистиллированной воды, переносят 20 г сульфата натрия. Затем раствор перемешивают и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.1.2. Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия

В стеклянную емкость объемом 1 000 см³ переносят 400 г хлорида натрия, доливают 800 см³ дистиллированной воды, ставят на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли.

7.2.1.3. Приготовление 5%-го раствора гидрокарбоната натрия

В мерную колбу на 1 000 см³ переносят 50 г гидрокарбоната натрия, добавляют 200 - 300 см³ дистиллированной воды, перемешивают содержимое до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией фосмета 1,0 мг/см³

Взвешивают 50 мг фосмета в мерной колбе объемом 50 см³. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор N 1 используют для приготовления градуировочных растворов и растворов для внесения. Раствор хранят в холодильнике не более 120 суток.

7.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией фосмета 100,0 мкг/см³

Из раствора аналитического стандарта N 1 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 2 используют для приготовления градуировочных растворов и растворов для внесения. Раствор хранят в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией фосмета 20,0 мкг/см³

Из раствора аналитического стандарта N 2 отбирают пипеткой 2 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 3 используют для приготовления градуировочных растворов, для установления градуировочной характеристики и внесения в контрольные образцы. Раствор хранят в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией фосмета 10,0 мкг/см³

Из раствора аналитического стандарта N 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 4 используют для приготовления градуировочных растворов, для установления градуировочной характеристики и внесения в контрольные образцы. Раствор хранят в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией фосмета 5,0 мкг/см³

Из раствора аналитического стандарта N 4 отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 5 используют для установления градуировочной характеристики и внесения в контрольные образцы. Раствор хранят в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией фосмета 2,0 мкг/см³

Из раствора аналитического стандарта N 3 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 6 используют для установления градуировочной характеристики и внесения в контрольные образцы. Раствор хранят в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.7. Стандартный раствор N 7 с концентрацией фосмета 1,0 мкг/см³

Из раствора аналитического стандарта N 4 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 7 используют для установления градуировочной характеристики. Раствор хранят в холодильнике не более 30 суток.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации фосмета в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 10,0; 5,0; 2,0 и 1,0 мкг/см³.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

Отбор проб проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 16270-70 "Яблоки свежие ранних сроков созревания. Технические условия", ГОСТ 27572-87 "Яблоки свежие для промышленной переработки", ГОСТ 32101-13 "Консервы. Продукция соковая. Соки фруктовые прямого отжима. Общие технические условия".

Пробы яблок хранят в холодильнике в полиэтиленовой таре при температуре 0 - 4 °C не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C.

Пробы яблочного сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 0 - 4 °C не более 10 суток.

Образец измельченных плодов яблони массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют туда 30 см³ ацетонитрила и помещают в ультразвуковую ванну на 5 минут, а затем на аппарат для встряхивания проб на 10 минут. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см³ через бумажный фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще два раза в тех же условиях, используя каждый раз по 30 см³ ацетонитрила. Экстракты фильтруют, объединяют в концентраторе объемом 250 см³ и выпаривают до водного остатка при температуре не выше 30 °C.

К водному остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, прибавляют 30 см³ 2%-го водного раствора сульфата натрия, тщательно обмывают стенки концентратора и переносят раствор в делительную воронку объемом 250 см³.

Фосмет экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 см³ каждая, встряхивая делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой хлористого метилена собирают в концентратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 см³ хлористого метилена, объединяют смыв с основным экстрактом и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

В случае затрудненного разделения водной и органической фаз, эмульсию хлористого метилена пропускают через ватный тампон, помещенный в стеклянную химическую воронку, и собирают в коническую колбу на 250 см³. Затем объединенные фракции хлористого метилена переносят в чистую делительную воронку, и после отделения водной фазы нижний слой хлористого метилена собирают в концентратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 см³ хлористого метилена, объединяют смыв с основным экстрактом и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетона и 1 мм³ пробы вводят в хроматограф.

К навеске сока массой 10 г прибавляют 20 см³ насыщенного раствора хлорида натрия и переносят в делительную воронку объемом 250 см³.

Фосмет экстрагируют тремя порциями ацетонитрила, используя первый раз порцию ацетонитрила 50 см³, второй и третий раз - по 30 см³ ацетонитрила, каждый раз встряхивая делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой ацетонитрила собирают в концентратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 см³ ацетонитрила, объединяют смыв с основным экстрактом и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Далее проводят очистку экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей по п. 9.1.2.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетона и 1 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Хроматографическая система, включающая:

- хроматограф газовый с термоионным детектором (ТИД) с пределом детектирования по фосфору в паратион-метиле 3 x 10^-14 г/см³ и снабженный приспособлениями для капиллярной колонки;

- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла с внутренним диаметром 0,25 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей: 5% дифенил- и 95% диметилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм.

Температура детектора - 300 °C, поток поддува в детектор постоянный (азот) - 10,0 см³/мин.

Расход водорода - 3,0 см³/мин, расход воздуха - 60 см³/мин.

Температура испарителя - 260 °C, газ-носитель - гелий, поток - 80,5 см³/мин, режим - сплит, деление потока - 30:1, расход сбросной - 75,0 см³/мин.

Температура колонки: градиентный нагрев колонки со 180 °C (выдержка 2 мин) по 20 град/мин до 260 °C (выдержка 7 мин), поток колонки - 2,5 см³/мин, средняя скорость - 34,5 см/с.

Объем вводимой пробы - 1 мм³.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 1,0 - 10,0 нг.

Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание фосмета в пробах рассчитывают по формуле без учета полноты извлечения вещества из проб:

X - содержание фосмета в пробе, мг/кг;

S_cm - высота (площадь) пика стандарта, Hz;

S_np - высота (площадь) пика образца, Hz;

A - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемого образца, г;

P - содержание фосмета в аналитическом стандарте, %.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 x _r.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

мг/кг при вероятности P = 0,95, где

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,2 мг/кг <*>".

--------------------------------

<*> 0,2 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание фосмета в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 1,0 до 10,0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

X - концентрация фосмета контрольного измерения, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора фосмета в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

2 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает 2%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов фосмета, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом "добавок".

Величина добавки должна удовлетворять условию:

+/- (+/- ) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

, , - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

X₁, X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.