"МУК 4.1.3520-17. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств пропамокарба гидрохлорида в плодах арбуза методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 29.12.2017)

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств пропамокарба гидрохлорида в плодах арбуза в диапазоне 1,0 - 10,0 мг/кг. Методические указания носят рекомендательный характер.

Название по ИЮПАК: пропил-3-(диметиламин)пропилкарбамат гидрохлорид.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₉H₂₁ClN₂O₂.

Молекулярная масса: 224,7.

Агрегатное состояние: кристаллическое, чрезвычайно гигроскопическое вещество.

Цвет, запах: бесцветное вещество без запаха.

Давление паров (при 20 °C): 3,85 x 10^-2 МПа.

Температура плавления: 64,2 °C.

Коэффициент распределения октанол-вода (при pH 7): K_ow log P_ow = -1,21.

Растворимость в воде (г/дм³, при 20 °C): более 500.

Растворимость в органических растворителях (г/дм³, при 20 °C): метанол - 656; хлористый метилен - более 626; ацетон - 560; этилацетат - 4,34; толуол - 0,14; гексан - менее 0,01.

Пропамокарба гидрохлорид стабилен при нормальных условиях хранения, не гидролизуется в водном растворе при различных значениях pH и температуры.

Краткая токсикологическая характеристика. Пропамокарба гидрохлорид относится к малоопасным веществам по острой пероральной (ЛД₅₀ для крыс от 2 000 до 2 900 мг/кг) и дермальной (ЛД₅₀ для крыс и мышей более 3 000 мг/кг) токсичности, но к умеренно опасным - по ингаляционной токсичности (ЛД₅₀ (4 часа) для крыс более 5 540 мг/м³ воздуха).

Пропамокарба гидрохлорид нетоксичен для пчел, птиц и диких животных.

Область применения. Пропамокарба гидрохлорид - системный фунгицид с продолжительным защитным действием, рекомендуемый для борьбы с возбудителями пероноспороза, фитофтороза, черной ножки, корневых гнилей овощных, декоративных культур и табака путем внесения в почву, опрыскивания вегетирующих растений и обработки семян, корней рассады, клубней и клубнелуковиц перед посадкой.

В России применяется в качестве фунгицида для борьбы с возбудителями пероноспороза и корневых гнилей на огурцах, черной ножки рассады капусты, фитофтороза глоксинии и томатов защищенного грунта, корневых гнилей табака при норме расхода 1,5 - 5 дм³/га за обработку. Пропамокарба гидрохлорид входит в состав смесевых препаратов, применяемых на картофеле.

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ВДСД - 0,4 мг/кг массы человека; ОДК в почве - 0,2 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,1 мг/дм³; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,7 мг/м³; ОБУВ в атмосферном воздухе - 0,07 мг/м³; МДУ в продукции (мг/кг): картофель - 0,1; огурцы, томаты - 10,0; овощи со съедобными плодами тыквенными - 5,0; лук-репка - 2,0.

МДУ в импортируемой продукции (мг/кг): арбуз - 5,0.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении пропамокарба гидрохлорида методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем и очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами.

Идентификация проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность метода достигается за счет подбора колонки и условий программирования.

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-91.

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газожидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения вещества, установление градуировочной характеристики.

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.

Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм³. Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.

Хлористый метилен промывают равным объемом 5%-го раствора гидрокарбоната натрия, осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 12 - 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре 40,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 40,0 °C, отбрасывают.

7.2.1.1. Приготовление 10 н раствора гидроокиси натрия.

В мерную колбу на 500 см³ постепенно переносят 200 г гидроокиси натрия, куда предварительно наливают около 300 см³ дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.2. Приготовление 1 М раствора соляной кислоты.

Мерным цилиндром отбирают 82 см³ концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1 000 см³, куда предварительно наливают около 400 см³ дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.3. Приготовление 0,1 М раствора соляной кислоты.

Мерной пипеткой отбирают 8,2 см³ концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1 000 см³, куда предварительно наливают около 400 см³ дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.4. Приготовление 5%-го раствора гидрокарбоната натрия.

В мерную колбу на 1 000 см³ переносят 50 г гидрокарбоната натрия, добавляют 200 - 300 см³ дистиллированной воды, перемешивают содержимое до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.

Если чистота аналитического стандарта пропамокарба гидрохлорида ниже 95,0%, навеску аналитического стандарта корректируют с учетом процента содержания пропамокарба гидрохлорида в аналитическом стандарте по формуле:

H_факт - фактическая навеска аналитического стандарта пропамокарба гидрохлорида, г;

H - навеска аналитического стандарта пропамокарба гидрохлорида без учета процента содержания пропамокарба гидрохлорида в аналитическом стандарте, г;

P - содержание пропамокарба гидрохлорида в аналитическом стандарте, %.

7.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией пропамокарба гидрохлорида 1,0 мг/см³.

Взвешивают 71 мг пропамокарба гидрохлорида в мерной колбе объемом 50 см³. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор N 1 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и для установления градуировочной характеристики. Раствор хранят в холодильнике не более 120 суток.

7.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией пропамокарба гидрохлорида 100,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 2 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Раствор хранят в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией пропамокарба гидрохлорида 20,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 2 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 3 используют для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Раствор хранят в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией пропамокарба гидрохлорида 10,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 4 используют для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Раствор хранят в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией пропамокарба гидрохлорида 5,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 5 используют для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Раствор хранят в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией пропамокарба гидрохлорида 2,0 мкг/см³.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 6 используют для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Раствор хранят в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.7. Стандартные растворы пропамокарба гидрохлорида с концентрацией 100,0; 50,0; 20,0 и 10,0 мкг/см³ для внесения в контрольные образцы.

Из стандартного раствора N 1 методом последовательного разведения ацетоном готовят растворы, содержащие по 100,0; 50,0; 20,0 и 10,0 мкг/см³ пропамокарба гидрохлорида и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы плодов арбуза. Стандартные растворы для внесения хранят в холодильнике не более месяца.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации пропамокарба гидрохлорида в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 20,0; 10,0; 5,0 и 2,0 мкг/см³.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

Отбор проб проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 7177-80 "Арбузы продовольственные свежие. Технические условия".

Пробы плодов арбуза хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °C не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре - 18 °C до 2 лет.

Образец измельченного растительного материала массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют туда 50 см³ смеси ацетонитрила с 0,1 М водным раствором соляной кислоты в соотношении 8:2 и помещают на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в концентратор объемом 250 см³. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 40 см³ смеси ацетонитрила с 0,1 М водным раствором соляной кислоты и помещая каждый раз на 15 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракты фильтруют, объединяют в концентраторе объемом 250 см³ и упаривают до водного остатка при температуре не выше 30 °C.

К водному остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, прибавляют 30 см³ дистиллированной воды, 7 см³ 10 н водного раствора гидроокиси натрия, тщательно обмывают стенки концентратора и переносят смыв в делительную воронку объемом 250 см³. В делительную воронку добавляют 3 г хлорида натрия и встряхивают воронку до полного его растворения.

Пропамокарба гидрохлорид экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 см³ каждая, встряхивая делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой хлористого метилена собирают в концентратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 см³ хлористого метилена, объединяют смыв с основным экстрактом и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

В случае затрудненного разделения водной и органической фаз эмульсию хлористого метилена пропускают через ватный тампон, помещенный в стеклянную химическую воронку, и собирают в коническую колбу на 250 см³. Затем объединенные фракции хлористого метилена переносят в чистую делительную воронку, и после отделения водной фазы нижний слой хлористого метилена собирают в концентратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 см³ хлористого метилена, объединяют смыв с основным экстрактом и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток растворяют в 5 см³ ацетона и 1 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Хроматографическая система, включающая:

- хроматограф газовый с термоионным детектором (ТИД), снабженный приспособлениями для капиллярной колонки;

- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла с внутренним диаметром 0,53 мм длиной 10 м, с неподвижной фазой, содержащей 5% дифенила и 95% диметилполисилоксана и толщиной пленки 2,65 мкм.

Температура детектора - 300 °C, поток поддува в детектор (азот) - 35,0 см³/мин.

Расход водорода - 15 см³/мин, расход воздуха - 200 см³/мин.

Температура испарителя - 200 °C, газ-носитель гелий, режим сплит, деление потока 3:1, сплит поток - 8,8 см³/мин.

Температура колонки: градиентный нагрев колонки со 100 °C (выдержка 1 мин) по 25 град/мин до 210 °C, поток колонки 2,93 см³/мин, давление 7 кПа, средняя скорость 26,8 см³/с.

Объем вводимой пробы: 1 мм³.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2,0 - 20,0 нг.

Для обработки результатов хроматографического анализа используют компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание пропамокарба гидрохлорида в пробах рассчитывают по формуле без учета полноты извлечения вещества из проб:

X - содержание пропамокарба гидрохлорида в пробе, мг/кг;

S_ст - высота (площадь) пика стандарта, Hz;

S_пр - высота (площадь) пика образца, Hz;

A - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемого образца, г;

P - содержание пропамокарба гидрохлорида в аналитическом стандарте, %.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

мг/кг при вероятности P = 0,95, где

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

--------------------------------

<*> 1,0 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляют в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание пропамокарба гидрохлорида в которых должно охватывать весь диапазон концентраций - от 2,0 до 20,0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

X - концентрация пропамокарба гидрохлорида контрольного измерения, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора пропамокарба гидрохлорида в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

4 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает 4%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов пропамокарба гидрохлорида, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом "добавок".

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры K_к рассчитывают по формуле:

, , C_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K_к) с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

Х₁, Х₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.