"МУК 4.1.3516-17. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств цигалофоп-бутила в воде и цигалофопа в воде, почве, зерне и соломе риса методом капиллярной газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 29.12.2017)

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, О.И. Рыбакова, П.В. Рязанцев, Е.Н. Тестова).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 24 ноября 2017 г. N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 29 декабря 2017 г.

4. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для определения массовых концентраций цигалофопа-бутила и цигалофопа в воде в диапазоне 0,005 - 0,05 мг/дм³ и цигалофопа в почве в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг, а также уровня остаточных количеств цигалофопа в зерне риса в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг и в соломе риса в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг. Методические указания носят рекомендательный характер.

Название по ИЮПАК: бутил (R)-2-[4-(4-циано-2-фторфенокси)фенокси]пропионовой кислоты.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₂₀H₂₀FNO₄.

Молекулярная масса: 357,4.

Агрегатное состояние: кристаллическое вещество.

Цвет, запах: белый, слабый миндальный запах.

Давление паров: 1,2 x 10^-3 МПа при 20 °C.

Коэффициент распределения в системе октанол/вода при pH 7, 20 °C: K_ow logP = 3,32.

Растворимость в воде (мг/дм³, 20 °C): 0,44 (небуферизованная); 0,46 (pH 5); 0,44 (pH 7).

Растворимость в органических растворителях (г/дм³, при 20 °C): в ацетонитриле, хлористом метилене, метаноле, ацетоне, этилацетате > 250.

Цигалофоп-бутил стабилен при pH 4, гидролизуется медленно при pH 7. При pH 1,2 и pH 9 разложение происходит быстро. Период полураспада при pH 7 и 9 (25 °C) 96 дней и 43 часа соответственно. Цигалофоп-бутил гидролизуется с получением цигалофоп кислоты в качестве единственного продукта гидролиза.

Водный фотолиз ДТ₅₀ 28 дней (при естественном солнечном свете в стерильной забуференной воде, pH 5).

В почве цигалофоп-бутил быстро метаболизируется, ДТ₅₀: 3,2 - 9,8 часа, ДТ₉₀: 16 - 62 часа. Основными метаболитами являются цигалофоп кислота, которая быстро разлагается до дикислоты через амид.

Краткая токсикологическая характеристика. Цигалофоп-бутил относится к мало опасным веществам по острой пероральной (ЛД₅₀ (мыши, крысы) более 5 000 мг/кг) и дермальной (ЛД₅₀ для крыс более 2 000 мг/кг) токсичностям, но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК₅₀ (4 часа) для крыс 5 630 мг/м³ воздуха). Не раздражает кожу, вызывает небольшое раздражение глаз у кроликов.

Область применения. Цигалофоп-бутил - гербицид из группы арилоксифеноксипропионаты системного действия. Высокоселективный послевсходовый гербицид для борьбы со злаковыми сорняками в рисе, в том числе резистентных популяциях куриного проса. Механизм действия - ингибирование ацетил коэнзима-А карбоксилазы, фермента, отвечающего за биосинтез жирных кислот. Толерантность риса обусловлена быстрой метаболистической трансформацией в культуре цигалофоп-бутила в гербицидно неактивную цигалофоп-двухосновную кислоту.

Предлагается для применения в России в посевах риса с нормой расхода 180 - 310 г д.в. на 1 га путем опрыскивания в фазе развития культуры от 1 листа до конца кущения, однократно.

В России гигиенические нормативы не установлены.

ВМДУ в импортируемой продукции (мг/кг): зерно риса - 0,01.

Цигалофоп - основной метаболит цигалофоп-бутила.

Название по ИЮПАК: (2R)-2-[4-(4-циано-2-фторфенокси)фенокси]пропионовая кислота.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₁₆H₁₂FNO₄.

Молекулярная масса: 301,3.

Агрегатное состояние: кристаллическое вещество.

Цвет, запах: белый, без запаха.

Давление насыщенного пара: 1,2 x 10^-3 МПа при 25 °C.

Коэффициент распределения в системе октанол/вода при pH 7, 20 °C: K_ow logP = 2,74.

Растворимость в воде (мг/дм³, 20 °C): 0,7.

В почве ДТ₅₀ меньше 1 дня.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении цигалофоп-бутила и цигалофопа с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием тандемного масс-спектрометрического детектора (ГХ-МС-МС).

Определение цигалофоп-бутила в воде проводится после его экстракции гексаном, а цигалофопа - после последующего подкисления образца, экстракции смесью этилацетата с гексаном и бутилирования.

Определение цигалофопа в почве проводится после его экстракции смесью ацетонитрила с водой и соляной кислотой, из зерна и соломы риса - подкисленным ацетоном, очистки экстрактов перераспределением между двумя несмешивающимися фазами с последующим бутилированием и очисткой проб на колонках с флоризилом.

Идентификация бутилового эфира цигалофопа основывается на масс-спектрах характеристичных ионов, соотношении их интенсивностей и времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность метода достигается за счет использования тандемного масс-спектрометрического детектора, регистрирующего одновременно несколько специфичных ионов, характеризующих вещество.

Примечание. Допускается использование других средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание: Допускается использование других реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф и масс-спектрометр.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-90 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газожидкостном хроматографе с масс-спектрометром, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на газовом хроматографе с масс-спектрометром проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с флоризилом для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с флоризилом, установление градуировочной характеристики.

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³. Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.

Метил-трет-бутиловый эфир, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем МТБЭ сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей.

МТБЭ перегоняют при температуре 55,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 55,2 °C, отбрасывают.

Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей.

Гексан перегоняют при температуре 68,7 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 68,7 °C, отбрасывают.

Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³ и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

7.2.1.1. Приготовление раствора 1,2 М соляной кислоты

Мерным цилиндром отбирают 100 см³ концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1 000 см³, куда предварительно наливают около 400 см³ дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.2. Приготовление подкисленного ацетона

Ацетон подкисляется 1,2 М соляной кислотой в соотношении 80/20 (об./об.) соответственно.

7.2.1.3. Приготовление смеси для экстракции ацетонитрил - вода - соляная кислота

Смесь ацетонитрил - вода - соляная кислота готовят в соотношении 80/20/1 (об./об./об.) соответственно.

7.2.1.4. Приготовление смеси для экстракции этилацетат - гексан

Смесь этилацетат - гексан готовят в соотношении 50/50 (об./об.) соответственно.

7.2.1.5. Приготовление раствора 4 н серной кислоты

Мерным цилиндром отбирают 112 см³ концентрированной серной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу объемом 1 000 см³, куда предварительно наливают около 300 см³ дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки. Раствор готовят под тягой, строго соблюдая технику безопасности.

7.2.1.6. Приготовление 4%-го раствора серной кислоты в бутаноле (бутилирующая смесь)

Мерной пипеткой отбирают 4 см³ концентрированной серной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу объемом 100 см³, куда предварительно наливают около 60 см³ бутанола. Затем раствор перемешивают и доводят бутанолом объем в колбе до метки. Раствор готовят под тягой, строго соблюдая технику безопасности.

7.2.1.7. Приготовление 5%-го раствора гидрокарбоната натрия

Переносят 50 г гидрокарбоната натрия в мерную колбу на 1 000 см³, добавляют 200 - 300 см³ дистиллированной воды, перемешивают содержимое до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией цигалофопа 1,0 мг/см³

Взвешивают 50 мг цигалофопа в мерной колбе объемом 50 см³. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 4 месяцев.

7.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией цигалофопа 10,0 мкг/см³

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 100 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 2 хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.3. Стандартные растворы с концентрацией цигалофопа 2,5; 1,0; 0,5; 0,25; 0,2 и 0,1 мкг/см³ для внесения в контрольные образцы

Методом последовательного разведения стандартного раствора N 2 ацетоном готовят растворы, содержащие 2,5; 1,0; 0,5; 0,25; 0,2 и 0,1 мкг/см³ цигалофопа, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы матриц. Стандартные растворы для внесения в контрольные образцы хранятся в холодильнике не более 1 месяца.

7.2.2.4. Приготовление стандартных растворов бутилового эфира цигалофопа для установления градуировочной характеристики

7.2.2.4.1. Стандартный раствор N 3 бутилового эфира цигалофопа с концентрацией 1,0 мкг/см³

Из стандартного раствора N 2 с концентрацией цигалофопа 10,0 мкг/см³ отбирают пипеткой 1 см³, помещают в виалу объемом 40 см³, удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят бутилирование, как указано в п. 7.4. После бутилирования получают стандартный раствор N 3 бутилового эфира цигалофопа с концентрацией по цигалофопу 1,0 мкг/см³. Стандартный раствор бутилового эфира N 3 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.4.2. Стандартный раствор N 4 бутилового эфира цигалофопа с концентрацией 0,5 мкг/см³

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки гексаном. Получают стандартный раствор N 4 бутилового эфира цигалофопа с концентрацией по цигалофопу 0,5 мкг/см³. Стандартный раствор бутилового эфира N 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.4.3. Стандартный раствор N 5 бутилового эфира цигалофопа с концентрацией 0,2 мкг/см³

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 2 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки гексаном. Получают стандартный раствор N 5 бутилового эфира цигалофопа с концентрацией по цигалофопу 0,2 мкг/см³. Стандартный раствор бутилового эфира N 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.4.4. Стандартный раствор N 6 бутилового эфира цигалофопа с концентрацией 0,1 мкг/см³

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки гексаном. Получают стандартный раствор N 6 бутилового эфира цигалофопа с концентрацией по цигалофопу 0,1 мкг/см³. Стандартный раствор бутилового эфира N 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.4.5. Стандартный раствор N 7 бутилового эфира цигалофопа с концентрацией 0,05 мкг/см³

Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки гексаном. Получают стандартный раствор N 7 бутилового эфира цигалофопа с концентрацией по цигалофопу 0,05 мкг/см³. Стандартный раствор бутилового эфира N 7 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.3.1. Стандартный раствор N 1А с концентрацией цигалофоп-бутила 1,0 мг/см³

Взвешивают 50 мг цигалофоп-бутила в мерной колбе объемом 50 см³. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор N 1А используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 1А хранится в холодильнике в течение 4 месяцев.

7.2.3.2. Стандартный раствор N 2А с концентрацией цигалофоп-бутила 10,0 мкг/см³

Из стандартного раствора N 1А отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 100 см³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 2А используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.3.3. Стандартный раствор N 3А с концентрацией цигалофоп-бутила 1,0 мкг/см³

Из стандартного раствора N 2А отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор N 3А используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.3.4. Стандартный раствор N 4А с концентрацией цигалофоп-бутила 0,5 мкг/см³

Из стандартного раствора N 3А отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор N 4А используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.3.5. Стандартный раствор N 5А с концентрацией цигалофоп-бутила 0,2 мкг/см³

Из стандартного раствора N 3А отбирают пипеткой 2 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор N 5А используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.3.6. Стандартный раствор N 6А с концентрацией цигалофоп-бутила 0,1 мкг/см³

Из стандартного раствора N 3А отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор N 6А используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.3.7. Стандартный раствор N 7А с концентрацией цигалофоп-бутила 0,05 мкг/см³

Из стандартного раствора N 4А отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор N 7А используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.3.8. Стандартные растворы с концентрацией цигалофоп-бутила 5,0; 2,0; 1,0 и 0,5 мкг/см³ для внесения в контрольные образцы

Методом последовательного разведения стандартного раствора N 2А ацетоном готовят растворы, содержащие 5,0; 2,0; 1,0 и 0,5 мкг/см³ цигалофоп-бутила, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы воды. Стандартные растворы для внесения в контрольные образцы хранятся в холодильнике не более 1 месяца.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика квалифицирующих ионов от концентрации цигалофопа в виде бутилового эфира или цигалофоп-бутила в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки бутилового эфира цигалофопа или цигалофоп-бутила с концентрацией 0,5; 0,2; 0,1 и 0,05 мкг/см³.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади пика квалифицирующих ионов (Responce) от концентрации цигалофопа в виде бутилового эфира или цигалофоп-бутила в растворе в мкг/см³.

К сухому остатку в виале прибавляют 1 см³ 4%-го раствора концентрированной серной кислоты в бутаноле (бутилирующей смеси). Виалу плотно закрывают крышкой, помещают в нагревательный блок для виал и оставляют на 5 минут при температуре 100 °C. По истечении времени виалу вынимают из блока, охлаждают до комнатной температуры, добавляют 10 см³ гексана и 20 - 25 см³ бидистиллированной воды. Смесь интенсивно встряхивают и выдерживают до полного разделения фаз в виале. Верхний гексановый слой содержит бутиловый эфир цигалофопа.

В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 4 г флоризила с зернением 60/100 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. На слой флоризила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см.

В день использования колонку промывают 10 см³ ацетона, высушивают и вновь промывают 10 см³ гексана, смывы отбрасывают.

В стакан объемом 100 см³ вносят 1 см³ стандартного раствора бутилового эфира цигалофопа в гексане с концентрацией по цигалофопу 0,5 мкг/см³, добавляют 4 см³ гексана, перемешивают и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха при температуре не выше 35 °C. Исходный стакан обмывают 10 см³ гексана и наносят на колонку. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха при температуре не выше 35 °C. Затем колонку последовательно промывают двумя порциями по 5 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 10:1 и тремя порциями по 5 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 см³ гексана и 1 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие бутиловый эфир цигалофопа, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюата.

Изучение поведения бутилового эфира цигалофопа на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии флоризила.

Отбор проб проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 31861-12 "Вода. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 17.4.3.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 28168-89 "Почвы. Отбор проб", ГОСТ 13586.3-83 "Зерно. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ Р ИСО 6497-11 "Корма для животных. Отбор проб".

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C не более 10 суток.

Для длительного хранения проб почвы, почву подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробу воды объемом 100 см³ помещают в делительную воронку объемом 250 см³.

Цигалофоп-бутил экстрагируют тремя порциями гексана объемом по 20 см³, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний гексановый слой в концентраторе объемом 250 см³ собирают через слой безводного сульфата натрия, а нижний водный слой сливают в стакан объемом 250 см³.

После третьей экстракции водную фазу, содержащую цигалофоп, возвращают в делительную воронку, а объединенный гексановый экстракт, содержащий цигалофоп-бутил, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C. Сухой остаток в концентраторе растворяют в 10 см³ гексана и вводят в хроматограф 1 мм³ раствора.

К оставшейся водной фазе в делительной воронке в п. 9.1.1 добавляют 15 г хлорида натрия и растворяют его путем встряхивания. Подкисляют водную фазу 1 см³ концентрированной серной кислотой.

Цигалофоп экстрагируют тремя порциями по 20 см³ каждая смеси этилацетата с гексаном в соотношении 50:50, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз нижний водный слой сливают в стакан объемом 250 см³, а верхний слой объединяют в концентраторе объемом 250 см³, собирая его через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре водяной бани не выше 35 °C.

Сухой остаток, полученный по п. 9.1.2, последовательно переносят тремя порциями МТБЭ по 3 см³ каждая в виалу объемом 40 см³ и высушивают током теплого воздуха. Проводят бутилирование, как указано в п. 7.4.

После бутилирования из верхнего гексанового слоя 1 мм³ раствора вводят в хроматограф.

Образец почвы массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см³, добавляют 50 см³ смеси для экстракции ацетонитрил - вода - соляная кислота в соотношении 80:20:1 и помещают на аппарат для встряхивания проб на 60 мин. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин при скорости 4 000 оборотов в минуту. Супернатант фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в концентратор объемом 250 см³ и выпаривают до водного остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C.

К водному остатку, полученному по п. 9.2.1, добавляют 100 см³ дистиллированной воды, обмывают стенки концентратора и переносят в делительную воронку объемом 250 см³. Добавляют в делительную воронку 15 г хлорида натрия, растворяя его путем встряхивания.

Цигалофоп экстрагируют тремя порциями МТБЭ по 20 см³ каждая, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз нижний водный слой отбрасывают, а верхний эфирный слой объединяют в плоскодонной колбе объемом 250 см³.

Переэкстрагируют цигалофоп из объединенного эфирного экстракта двумя порциями 5%-го раствора гидрокарбоната натрия по 20 см³ каждая, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз нижний водный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 см³. После второй экстракции эфир отбрасывают, а объединенную содовую фракцию переносят в чистую делительную воронку и подкисляют 4 н раствором серной кислоты до значения pH = 1 (~ 7 см³). Смесь дегазируют. (Осторожно! Возможно разбрызгивание раствора!). Добавляют в воронку 15 см³ смеси этилацетата с гексаном в соотношении 50:50 и встряхивают смесь в течение 1 - 2 мин. После полного разделения фаз нижний водный слой сливают в стакан объемом 250 см³, а верхний слой - в концентратор объемом 250 см³, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Водную фазу возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру еще два раза с тем же объемом смеси этилацетата с гексаном. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 см³ и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре водяной бани не выше 35 °C.

Сухой остаток, полученный по п. 9.2.2, последовательно переносят тремя порциями МТБЭ по 3 см³ каждая в виалу объемом 40 см³ и высушивают током теплого воздуха. Проводят бутилирование, как указано в п. 7.4. После охлаждения виалы до комнатной температуры добавляют 2 см³ гексана и 20 - 25 см³ бидистиллированной воды. Смесь интенсивно встряхивают и выдерживают до полного разделения фаз в виале. Из верхнего гексанового слоя 1 мм³ раствора вводят в хроматограф.

Образец измельченного зерна риса массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см³, добавляют 100 см³ подкисленного ацетона и помещают на аппарат для встряхивания проб на 60 мин. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин при скорости 4 000 оборотов в минуту. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см³ через бумажный фильтр низкой плотности и выпаривают до водного остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C.

К водному остатку, полученному по п. 9.3.1, добавляют 100 см³ воды и проводят очистку экстракта по схеме, указанной в п. 9.2.2.

Сухой остаток, полученный по п. 9.3.2 последовательно переносят тремя порциями МТБЭ по 3 см³ каждая в виалу объемом 40 см³ и высушивают током теплого воздуха. Проводят бутилирование, как указано в п. 7.4.

Из верхнего (гексанового) слоя в виале, полученного в п. 9.3.3, отбирают 5 см³ и наносят на заранее подготовленную колонку с флоризилом.

Промывают колонку 10 см³ гексана, смыв отбрасывают. Наносят на колонку 10 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 10:1, смыв отбрасывают. Пропускают через колонку 10 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1, элюат собирают в концентратор объемом 100 см³ и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C досуха.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 1 см³ гексана и вводят в хроматограф 1 мм³ раствора.

Образец измельченной соломы риса массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, добавляют 100 см³ подкисленного ацетона и помещают на аппарат для встряхивания проб на 60 мин. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см³ через бумажный фильтр низкой плотности и выпаривают до водного остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °C.

Далее проводят очистку полученного экстракта по схеме, указанной в п. 9.3.2 - 9.3.4.

Сухой остаток растворяют в 2,5 см³ гексана и 1 мм³ раствора вводят в хроматограф.

Хромато-масс-спектрометрическая система, включающая:

- газовый хроматограф с испарителем для ввода проб с делением/без деления потока и капиллярной колонкой, соединенный с тандемным масс-спектрометрическим детектором типа тройная квадруполь с диапазоном масс (m/z) 1,2 - 1 050 а.е.м., разрешением 0,7 - 2,5 а.е.м., скоростью сканирования до 6 250 а.е.м./с, чувствительностью при ионизации электронным ударом в режиме полного сканирования не ниже 300:1 (1 фг октафторнафталина по массе 272 ион);

- компьютер с программным обеспечением, которое осуществляет управление и контроль всеми физическими параметрами, требуемыми для согласованной работы всех систем прибора, обработку данных, включая калибровку, визуализацию спектров, автоматические количественные расчеты, архивирование данных, создание и использование библиотек масс-спектров.

Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла с внутренним диаметром 0,25 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой (5% - фенил- и 95% - метилсилоксана) и толщиной пленки 0,25 мкм.

Температура испарителя - 260 °C, тип газа гелий, давление 13,6 psi, режим ввода без деления потока (сплитлесс), выдержка 1,0 мин, поток продувки 50 см³/мин.

Программированный нагрев колонки с 110 °C (выдержка 1 мин) по 20 град/мин до 270 °C (выдержка 2,5 мин) и по 15 град/мин до 295 °C (выдержка 3 мин), режим постоянный поток, поток через колонку 1,2 см³/мин, средняя скорость 41,0 см/с.

Температура устройства сопряжения хроматографа с масс-спектрометрическим детектором 280 °C.

Температура ионного источника 230 °C, температура квадруполей 150 °C.

Режим ионизации - электронный удар, энергия ионизирующих электронов 70 эВ.

Ток эмиссии: 35 мкА.

Режим сканирования - мониторинг множественных реакций (MRM). Количественный переход , время сканирования 10 мс, энергия соударения 10 В, подтверждающий переход , время сканирования 10 мс, энергия соударения 15 В.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор бутилового эфира цигалофопа с концентрацией 0,5 мкг/см³, соответственно разбавляют.

Линейность детектирования сохраняется в пределах - 0,05 - 0,5 нг.

Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание цигалофоп-бутила и цигалофопа в пробах рассчитывают по формуле без учета полноты извлечения вещества из проб:

X - содержание цигалофоп-бутила или цигалофопа в пробе, мг/кг или мг/дм³;

S_ст - высота (площадь) пика стандарта, мВ;

S_пр - высота (площадь) пика образца, мВ;

A - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемого образца, г (см³);

P - содержание цигалофоп-бутила или цигалофопа в аналитическом стандарте, %.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг <*>".

--------------------------------

<*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочных характеристик проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочных характеристик проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание цигалофоп-бутила или цигалофопа в виде бутилового эфира в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 0,5 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

X - концентрация цигалофоп-бутила или цигалофопа в виде бутилового эфира контрольного измерения, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора цигалофоп-бутила или цигалофопа в виде бутилового эфира в гексане, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

7 (4) - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает 7 - для цигалофопа и 4 - для цигалофоп-бутила, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов цигалофоп-бутила или цигалофопа в виде бутилового эфира, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом "добавок".

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

, , C_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

X₁, X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.