"МУК 4.1.3329-15. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флуоксастробина в семенах, масле и зеленой массе подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 28.12.2015)

1. Разработаны ФГБНУ "Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии" (Т.Н. Талалакина, А.М. Макеев).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 17 декабря 2015 г. N 2).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 28 декабря 2015 г.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации от 13.11.2015 N РОСС RU.0001.310430/0239.13.11.15.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации флуоксастробина в семенах, масле и зеленой массе подсолнечника в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название вещества по ИСО: флуоксастробин.

Название вещества по ИЮПАК: (1E)-{2-[6-(2-хлорфенокси)-5-фторпиримидин-4-илокси]фенил}(5,6-дигидро-1,4,2-диоксазин-3-ил)метанон O-метилоксим.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₂₁H₁₆ClFN₄O₅.

Молекулярная масса: 458,8.

Белое кристаллическое вещество со слабым запахом, состоит из двух оптических изомеров E и Z. Температура плавления: (103 - 108) °C. Давление паров при 20 °C: 6 x 10^-7 мПа. Коэффициент распределения в системе н-октанол/вода при 20 °C: K_ow log P = 2,86. Растворимость (г/дм³) при 20 °C: н-гептан - 0,04; 2-пропанол - 6,7; ксилол - 38,1; ацетон, ацетонитрил, дихлорметан, этилацетат - все > 250; вода - 0,0023.

Вещество стабильно при хранении на воздухе, а также в кислой и щелочной средах (DT₅₀ => 1 года).

В присутствии света в водных фотолитических условиях флуоксастробин достаточно быстро деградирует с периодом полураспада 4,1 дня.

В биологически активных почвах в аэробных условиях флуоксастробин разрушается достаточно медленно: показатель DT₅₀ варьирует от нескольких дней до нескольких недель.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс > 2 500 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс > 2 000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC₅₀) для крыс > 4 998 мг/м³ воздуха. Вещество не обладает раздражающим действием на слизистую оболочку глаз кролика и сенсибилизирующими свойствами. LC₅₀ для рыб - 0,97 мг/дм³ (96 ч). Фунгицид нетоксичен для птиц, пчел, дождевых червей, дафний и водорослей.

Область применения. Флуоксастробин - системный синтетический фунгицид из класса стробилуринов, являющихся продуцентами гриба Strobilurus tenacellus. Вещество обладает защитным и искореняющим действием. При обработке вегетирующих растений в дозах до 200 г/га оно эффективно подавляет развитие возбудителей ржавчины, септориоза, мучнистой росы, ломкости стеблей и пятнистости листьев на посевах ячменя, пшеницы и других культур, а при протравливании семян зерновых колосовых культур в дозах 50 - 100 г/т защищает последние от заражения твердой и пыльной головней и фузариозной корневой гнилью.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на экстракции флуоксастробина из зеленой массы подсолнечника водным раствором ацетона, из семян и масла ацетонитрилом, очистке экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем и твердофазной экстракцией, с последующим измерением содержания E- и Z-изомеров флуоксастробина в очищенных экстрактах на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым детектированием и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

К выполнению измерений допускают специалиста, прошедшего обучение, освоившего методику, владеющего техникой, имеющего опыт работы на жидкостном хроматографе, и подтвердившего соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов, раствора внесения и подвижной фазы для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), кондиционирование хроматографической колонки, градуировка хроматографа, подготовка колонки с силикагелем и концентрирующего патрона, проверка хроматографического поведения флуоксастробина на колонке и патроне.

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и калием углекислым (на 1 дм³ ацетона 10 г калия перманганата и 2 г калия углекислого).

Навеску (5,0 +/- 0,1) г натрия углекислого в конической колбе растворяют в (40 - 60) см³ деионизованной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят объем раствора до метки деионизованной водой. Срок хранения - 1 неделя.

Этилацетат промывают последовательно раствором натрия углекислого с массовой долей 5%, насыщенным раствором хлорида кальция, сушат над безводным углекислым калием и перегоняют.

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным калием углекислым.

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 250 - 300 см³ бидистиллированной воды, вносят 0,25 см³ ледяной уксусной кислоты, доводят водой до метки, перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 550 см³ ацетонитрила и 450 см³ раствора уксусной кислоты с массовой долей 0,025%, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр. Подвижную фазу хранят в емкости из темного стекла не более 15 дней.

Промывают хроматографическую колонку подвижной фазой для ВЭЖХ, приготовленной по п. 7.2.2, при скорости подачи растворителя 0,5 см³/мин не менее 2 ч до установления стабильной базовой линии.

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 +/- 0,0001) г E- или Z-изомера флуоксастробина, растворяют в 40 - 50 см³ ацетонитрила, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -12 °C в течение месяца.

7.4.2. Градуировочные растворы E- и Z-изомеров флуоксастробина с массовой концентрацией 10 мкг/см³ (раствор N 1).

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора E- или Z-изомера флуоксастробина с массовой концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.4.1), раствор разбавляют ацетонитрилом и доводят объем до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов N 2 - 5.

Для приготовления проб зеленой массы, семян и масла с внесением при оценке полноты извлечения флуоксастробина из исследуемых образцов используют ацетоновые растворы E- и Z-изомеров флуоксастробина с концентрацией 10 мкг/см³.

Градуировочный раствор N 1 и ацетоновые растворы изомеров флуоксастробина хранят в морозильной камере при температуре не выше -12 °C в течение месяца.

7.4.3. Градуировочные растворы E- и Z-изомеров флуоксастробина с массовой концентрацией 0,05 - 0,50 мкг/см³ (растворы N 2 - 5).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 0,5; 1,0; 2,5 и 5,0 см³ градуировочного раствора E- или Z-изомера флуоксастробина с массовой концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7.4.2), объем доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2.2, каждый раствор тщательно перемешивают, получают растворы N 2 - 5 с массовой концентрацией E- и Z-изомеров флуоксастробина 0,05; 0,10; 0,25 и 0,5 мкг/см³ соответственно. Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ·с) от массовой концентрации E- или Z-изомера флуоксастробина в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной градуировки по 4 градуировочным растворам (п. 7.4.3).

В инжектор хроматографа вводят по 5 мм³ каждого градуировочного раствора (п. 7.4.3) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3 параллельных определений. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предел повторяемости r.

По полученным данным строят градуировочную характеристику.

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 15 см³ этилацетата. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сернокислого натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 20 см³ этилацетата и 20 см³ смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 8 : 2 со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

Концентрирующий патрон N 1 промывают сначала с помощью медицинского шприца 5 см³ смеси гексан-ацетон (1 : 1, по объему), а затем 5 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2, по объему) со скоростью 5 см³/мин.

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,1 см³ градуировочных растворов E- и Z-изомеров флуоксастробина с массовой концентрацией 10 мкг/см³ в ацетонитриле (п. 7.4.2). Раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 3 см³ смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 8 : 2, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.6, элюат отбрасывают. Через колонку пропускают 80 см³ смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 6 : 4 со скоростью 2 - 3 капли в секунду, отбирая последовательно по 10 см³ элюата. Каждую фракцию упаривают, остатки растворяют в 1 см³ ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, вносят 2 см³ подвижной фазы, подготовленной по. п. 7.2.2, перемешивают, а затем хроматографируют в соответствии с п. 9.4.

По результатам обнаружения изомеров флуоксастробина в каждой из фракций определяют объем смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 6 : 4, необходимый для полного вымывания фунгицида из колонки.

Примечание. Проверку хроматографического поведения флуоксастробина следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания вещества может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,1 см³ градуировочных растворов E- и Z-изомеров флуоксастробина с концентрацией 10 мкг/см³ в ацетонитриле (п. 7.4.2). Растворитель упаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C, остаток растворяют в 2 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на патрон N 1, подготовленный по п. 7.6. Промывают патрон 2 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через патрон пропускают 10 см³ смеси гексан-ацетон (7 : 3, по объему), отбирая последовательно по 2 см³ элюата непосредственно в круглодонные колбы. Растворы в колбах упаривают досуха при температуре не выше 40 °C, остатки растворяют в 1 см³ подвижной фазы, подготовленной по п. 7.2.2, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, и растворы анализируют на содержание изомеров флуоксастробина по п. 9.4.

По результатам обнаружения изомеров флуоксастробина в каждой из фракций определяют объем смеси гексан-ацетон (7 : 3, по объему), необходимый для полного вымывания флуоксастробина из патрона.

Примечание. Профиль вымывания флуоксастробина может меняться при использовании новых партий концентрирующих патронов и растворителей.

Отбор проб производят в соответствии с ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ 22391-89 "Подсолнечник. Требования при заготовках и поставках", ГОСТ 1129-13 "Масло подсолнечное. Технические условия" и "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).

Образцы зеленой массы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °C не более суток; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре не выше -18 °C до анализа. Пробы семян высушивают до стандартной влажности (в соответствии с ГОСТ 10852-86) и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу. Пробы масла хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °C. В некоторых случаях масло получают из семян подсолнечника экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа. Перед проведением анализа зеленую массу измельчают, а семена размалывают на мельнице.

В мерную колбу вместимостью 500 см³ вносят 50 см³ бидистиллированной воды и доводят объем раствора до метки ацетоном. Срок хранения раствора - 1 неделя.

9.1.1. Зеленая масса подсолнечника. Навеску измельченного образца массой 20 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 см³, приливают 100 см³ водного раствора ацетона с объемной долей 90% и гомогенизируют 3 минуты при 10 000 об./мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см³. Осадок переносят в коническую колбу вместимостью 250 см³, приливают 50 см³ водного раствора ацетона с объемной долей 90%, перемешивают, и колбу помещают на аппарат для встряхивания на 20 мин. Суспензию фильтруют и остаток на фильтре промывают 10 см³ водного раствора ацетона. Экстракт и промывную жидкость переносят в мерный цилиндр с пришлифованной пробкой на 250 см³, доводят общий объем раствора в цилиндре до 200 см³ смесью ацетон-вода (9 : 1, по объему), перемешивают. Переносят 1/4 часть экстракта, эквивалентную 5 г образца, в круглодонную колбу вместимостью 100 см³ и упаривают на роторном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C до водного остатка (~ 2 - 3 см³). Водный остаток переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³, добавляют 30 см³ бидистиллированной воды и 30 см³ гексана, предварительно обмыв ими колбу, в которой находилась проба, интенсивно встряхивают в течение 1 мин. После разделения фаз верхний гексановый слой собирают, нижний водный слой возвращают в воронку и экстрагируют дважды гексаном порциями по 20 см³. Объединенный гексановый экстракт фильтруют через слой безводного сернокислого натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C и остаток подвергают дополнительной очистке на колонке с силикагелем по п. 9.2.

9.1.2. Семена подсолнечника. Образец размолотых семян массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³. Флуоксастробин экстрагируют 50 см³ ацетонитрила, помещая пробы на аппарат для встряхивания на 20 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через фильтр средней плотности. Экстракцию остатка повторяют еще раз, используя 30 см³ ацетонитрила и помещая пробы на аппарат для встряхивания на 20 мин. Суспензию фильтруют и остаток на фильтре промывают 10 см³ ацетонитрила. Экстракты и промывную жидкость переносят в мерный цилиндр на 100 см³, доводят общий объем раствора до 100 см³ ацетонитрилом, перемешивают. Помещают 1/2 часть экстракта, эквивалентную 5 г образца, в делительную воронку вместимостью 100 см³, приливают 20 см³ гексана и содержимое интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз гексановый слой отбрасывают, а ацетонитрильную фракцию повторно обрабатывают этим же объемом гексана, который также отбрасывают. Ацетонитрильную фракцию пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают до капель масла на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.1.3. Масло подсолнечника. Образец масла массой 5 г вносят в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, приливают 10 см³ гексана и перемешивают. К раствору добавляют 50 см³ ацетонитрила и колбу помещают на аппарат для встряхивания на 20 мин. Верхний ацетонитрильный слой декантируют в химический стакан вместимостью 250 см³ через слой ваты, помещенной в конусную воронку. Маслянистый остаток в колбе повторно обрабатывают 30 см³ ацетонитрила при встряхивании в течение 20 мин. После декантации ацетонитрильной фракции вату промывают 10 см³ ацетонитрила, которые объединяют с фильтратом. Объединенный ацетонитрильный фильтрат переносят в делительную воронку вместимостью 250 см³, добавляют 30 см³ гексана и воронку интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз нижний ацетонитрильный слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 см³, упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.

Остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.1.1, 9.1.2 и 9.1.3, растворяют в 2 см³ смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 8 : 2, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 7.6. Колбу обмывают 2 см³ смеси гексан-этилацетат в объемном соотношении 8 : 2, которые также наносят на колонку. Элюат отбрасывают. Промывают колонку 30 см³ смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 6 : 4 со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Флуоксастробин элюируют с колонки 50 см³ смеси гексан-этилацетат с объемным соотношением компонентов 6 : 4, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток экстрактов зеленой массы и масла растворяют в 5 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ, подготовленной по п. 7.2.2, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, и анализируют на содержание флуоксастробина по п. 9.4. Экстракт семян подсолнечника подвергают дополнительной очистке на патроне N 1 по п. 9.3.

Сухой остаток экстракта семян подсолнечника, полученный по п. 9.2, растворяют в 2 см³ смеси гексан-ацетон в объемном соотношении 8 : 2, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на подготовленный концентрирующий патрон N 1 (п. 7.6). Патрон промывают 2 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2, по объему) со скоростью 2 - 3 см³/мин, элюат отбрасывают. Флуоксастробин элюируют 4 см³ смеси гексан-ацетон (7 : 3, по объему) в круглодонную колбу вместимостью 50 см³ и раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C. Остаток экстракта растворяют в 5 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 7.2.2), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, и анализируют на содержание флуоксастробина по п. 9.4.

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах.

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны, снабженный дегазатором и термостатом колонки.

Длина волны: 250 нм.

Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами C 18, зернением 5 мкм.

Температура колонки: 27 °C.

Скорость потока элюента: 0,7 см³/мин.

Объем вводимой пробы: 5 мм³.

Подвижная фаза: ацетонитрил-0,025%-я уксусная кислота (55 : 45, по объему).

Линейный диапазон детектирования: 0,25 - 2,5 нг.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площади пиков E- и Z-изомеров флуоксастробина (в мкВ·с), находят среднее значение, с помощью градуировочной характеристики определяют концентрацию каждого из изомеров в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочные растворы изомеров флуоксастробина с концентрацией 0,5 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2.2.

Массовую долю E- и Z-изомеров флуоксастробина (X, мг/кг) в образцах зеленой массы, семян и масла подсолнечника рассчитывают по формуле:

C - значение массовой концентрации E- и Z-изомеров флуоксастробина в экстракте, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемой части образца, соответствующая доле экстракта, использованной для очистки на колонке с силикагелем (и патроне N 1) и последующего хроматографического определения, г;

Общее содержание флуоксастробина в каждой из матриц определяют как сумму массовой доли E- и Z-изомеров вещества.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание флуоксастробина в пробах зеленой массы, семян и масла подсолнечника - менее 0,05 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,05 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-02 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии опытов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание изомеров флуоксастробина в которых должно охватывать весь диапазон от 0,05 до 0,5 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого градуировочного раствора, используемого для контроля, сохраняется соотношение:

X - содержание E- или Z-изомера флуоксастробина в пробе при контрольном измерении, мкг;

C - известное содержание E- или Z-изомера флуоксастробина в градуировочном растворе, взятом для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг;

B - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 10% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов изомеров флуоксастробина, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 7.5.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг.

Допустимо характеристику погрешности результатов анализа при внедрении методики в лаборатории устанавливать с последующим уточнением по мере накопления информации на основе выражения:

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Контроль проводят путем сравнения результата контрольной процедуры К_к с нормативом контроля К.

Результат контрольной процедуры К_к рассчитывают по формуле:

, , C_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контрольной процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (3) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (3) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предел воспроизводимости (R):

X₁, X₂ - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.