"МУК 4.1.3217-14. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Метод определения фосфатов в пищевых продуктах и продовольственном сырье. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 22.08.2014)

1. Разработаны ФГБУН "НИИ питания" (В.А. Тутельян, Л.В. Шевякова), ФБУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора (В.Г. Сенникова, В.В. Мордвинова, Е.С. Шальнова, Гарбузова А.А., В.Н. Малхожева).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 22 августа 2014 г.

3. Аттестованы ФБУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора в соответствии с ГОСТ Р 8.563-2009, свидетельство об аттестации N POCC RU.0001.310430/0203.14.07.14 от 14.07.2014.

4. Введены впервые.

Настоящие методические указания распространяются на сырье и продукты пищевые и устанавливают метод определения фосфора с последующим пересчетом на фосфаты .

Методические указания носят рекомендательный характер.

Метод заключается в сухой минерализации пробы, растворении золы, проведении цветной реакции с молибден-ванадиевым реактивом и измерении интенсивности желтого окрашивания раствора на спектрофотометре в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 10 мм при длине волны или с помощью фотоэлектроколориметра в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 20 мм со светофильтром .

Присутствие макро- и микроэлементов не мешает определению.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ Р 53228-2008 второго класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

Колориметр фотоэлектрический с устройством для отсчитывания оптической плотности и светофильтром с или спектрофотометр для измерения в видимой области спектра.

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Кислота азотная по ГОСТ 4461, х.ч., концентрированная.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч., раствор (1:1) и раствор концентрации 25 г/дм3.

Кислота серная по ГОСТ 4204, х.ч., концентрированная раствор (1:9).

Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198, х.ч.

Аммоний ванадиевокислый мета по ГОСТ 9336, х.ч.

Аммоний молибденовокислый по ГОСТ 3765, ч.д.а.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Шкаф сушильный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима до 150 °C с погрешностью +/- 5 °C.

Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919.

Баня водяная.

Эксикатор по ГОСТ 25336 исполнения 2.

Колбы мерные по ГОСТ 1770 исполнения 1 вместимостью 50, 100, 1 000 см3 2 класса точности.

Пипетки по ГОСТ 29169 номинальной вместимостью 2, 5, 10 см3.

Стаканы по ГОСТ 25336 типа В или Н исполнения 1 или 2 номинальной вместимостью 50, 1 000 см3.

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

3.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф и масс-спектрометрический детектор.

3.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

К выполнению измерений допускают специалиста, прошедшего обучение, освоившего методику, владеющего техникой, имеющего опыт работы на фотоколориметре, спектрофотометре.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

6.1. Отбор проб проводят в соответствии с ГОСТ 26313.

6.2. Подготовка проб проводится способом сухой минерализации в соответствии с ГОСТ 26929-94.

Рекомендуемые величины массы навески указаны в таблице 1.

7.1. Приготовление раствора соляной кислоты массовой концентрации 25 г/дм3

В мерную колбу вместимостью 1 дм3 вносят 67,4 см3 концентрированной соляной кислоты и доводят объем до метки дистиллированной водой.

7.2. Приготовление основного стандартного раствора фосфора массовой концентрации 1 г/дм3

Раствор готовят из фосфорнокислого однозамещенного калия, предварительно высушенного до постоянной массы в сушильном шкафу при 104 °C или в эксикаторе над концентрированной серной кислотой. Навеску 4,3930 г KH2PO4, взвешенную с погрешностью не более 0,0001 г, растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды.

7.3. Приготовление раствора аммония ванадиевокислого массовой концентрации 2,5 г/дм3 (раствор А)

2,5 г ванадиевокислого аммония растворяют в 500 см3 кипящей воды. После охлаждения раствора в него вносят 20 см3 концентрированной азотной кислоты. Объем раствора доводят до 1 дм3 дистиллированной водой, перемешивают.

7.4. Приготовление раствора аммония молибденовокислого массовой концентрации 100 г/дм3 (раствор Б)

100 г молибденовокислого аммония растворяют в 500 см3 воды, подогретой до 50 °C. Раствор охлаждают до комнатной температуры, затем осторожно, при перемешивании стеклянной палочкой вносят 100 см3 концентрированной серной кислоты. Перемешивание продолжают до достижения раствором комнатной температуры, доводят его объем до 1 дм3 дистиллированной водой, перемешивают.

7.5. Приготовление молибден-ванадиевого раствора

Реактив готовят смешиванием равных объемов растворов А и Б. Полученный реактив годен в течение месяца.

7.6. Приготовление контрольного раствора и построение градуировочного графика

7.6.1. В мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят 5 см3 основного стандартного раствора фосфора массовой концентрации 1 г/дм3, доводят объем раствора до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают. Рабочий раствор готовят в день построения градуировочного графика.

7.6.2. При проведении испытаний на спектрофотометре в мерные колбы вместимостью 50 см3 вносят 1, 2, 3, 4, 5, 6 см3 рабочего стандартного раствора фосфора, приготовленного по 7.6.1, что соответствует 100, 200, 300, 400, 500, 600 мкг фосфора, добавляют воду до 10 см3. В каждую колбу вносят по 10 см3 молибден-ванадиевого раствора, доводят объем раствора до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают.

При проведении измерений на фотоэлектроколориметре в мерные колбы вместимостью 50 см3 вносят 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0 см3 рабочего стандартного раствора фосфора, приготовленного по 7.6.1, что соответствует 50, 100, 150, 200, 250, 300 мкг фосфора, и далее проводят испытания по 7.6.2.

Растворы выдерживают 30 мин при температуре 20 - 30 °C и измеряют оптическую плотность по отношению к контрольному раствору, который готовят по 7.6.2, но без добавления раствора фосфора.

Измерения проводят на спектрофотометре в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 10 мм при или на фотоэлектроколориметре в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 20 мм со светофильтром с .

7.6.3. Построение градуировочного графика

Градуировочный график строят, откладывая по оси абсцисс значения концентрации фосфора в мкг, по оси ординат - соответствующее им значение оптической плотности.

8.1. Золу, полученную по 6.2, растворяют в 5 см3 раствора соляной кислоты (1:1) при нагревании на кипящей водяной бане и раствор упаривают до влажных солей, к осадку в чашке добавляют 20 см3 раствора соляной кислоты массовой концентрации 25 г/дм3 и нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 - 10 мин. После охлаждения содержимое чашки количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3 и доводят до метки раствором соляной кислоты массовой концентрации 25 г/дм3.

Аналогично готовят контрольную пробу, используя те же объемы растворов и последовательность их добавления, что и при растворении золы.

Раствор перемешивают.

8.2. В мерную колбу вместимостью 50 см3 помещают точное количество (от 1 до 4 см3) раствора, приготовленного по 8.1, добавляют воду до 10 см3, 10 см3 молибден-ванадиевого реактива, доводят объем до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают.

Оптическую плотность раствора измеряют по 7.6.2 по сравнению с контрольным раствором.

8.3. По полученному значению оптической плотности по градуировочному графику находят массу фосфора в мкг.

9.1. Массовую долю фосфора C, мг/100 г продукта вычисляют по формуле, где:

m - масса фосфора, найденная по градуировочному графику, мкг;

V - общий объем минерализата, см3;

- аликвотный объем минерализата, взятый для испытания, см3;

10 - коэффициент пересчета в мг/100 г;

M - навеска образца, г.

9.2. Массовую долю фосфатов продукта вычисляют по формуле, где:

C - массовая доля фосфора, найденная 9.1;

2,29 - коэффициент пересчета фосфора на фосфаты .

Результаты количественного анализа в протоколах анализов представляют в виде:

где - значение показателя точности по таблице 2.

Окончательный результат округляют до первого десятичного знака.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать P = 0,95.

11.1. Настоящая методика обеспечивает получение результатов анализа с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в таблице 2.

12.1. Обеспечение достоверности измерений в пределах лаборатории организуют и проводят путем проведения проверки приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях повторяемости, внутрилабораторной прецизионности, воспроизводимости, оперативного контроля процедуры измерений и контроля стабильности результатов измерений в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6.

12.2. Проверка приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности.

Проверку приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности (в пределах одной лаборатории, разными операторами, в разное время), проводят по результатам измерений массовой концентрации определяемого элемента в образцах с одинаковым содержанием элемента.

Результаты измерений признают приемлемыми при выполнении условия:

и - результаты измерений массовой концентрации определяемого элемента, полученные в условиях внутрилабораторной прецизионности, т.е. в одной лаборатории в разное время, разными операторами, мг/100 г;

R - предел внутрилабораторной прецизионности, %.

Значения предела внутрилабораторной прецизионности приведены в таблице 3.

Если условие (3) не выполнено, процедуру повторяют. При повторном превышении предела внутрилабораторной прецизионности выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

12.3. Алгоритм оперативного контроля процедуры измерений с использованием метода добавок

Образцами для контроля процедуры измерений являются образцы для исследования с внесенными в них добавками раствора определяемого элемента, подготовленные в соответствии с п. 7.6.2.

Оперативный контроль процедуры измерений проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры с нормативом контроля K.

Результат контрольной процедуры рассчитывают по формуле:

- результат измерений массовой концентрации элемента в пробе с известной добавкой - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости мг/100 г;

- результат измерений массовой концентрации элемента в исходной пробе - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, мг/100 г;

- величина введенной добавки, мг/100 г.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

где , - значения характеристики погрешности результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации методики, соответствующие массовой концентрации элемента в пробе с известной добавкой и в исходной пробе, соответственно, рассчитанные по формулам:

Процедуру измерений признают удовлетворительной при выполнении условия:

При невыполнении условия (8) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (8) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.