"МУК 4.1.3518-17. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изоксафлютола по основному метаболиту RPA 202248 в зерне нута методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 29.12.2017)

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России (А.В. Довгилевич, Е.В. Довгилевич, Ю.Н. Савушкин, Е.Н. Тестова).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 24 ноября 2017 г. N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 29 декабря 2017 г.

4. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств изоксафлютола в виде RPA 202248 в зерне нута в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг. Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИЮПАК:

Изоксафлютол: 5-циклопропил-1,2-оксазол-4-ил-,,-трифтор-2-мезил--толилкетон.

Структурная формула:

Молекулярная масса: 359.

Эмпирическая формула: C₁₅H₁₂F₃NO₄S.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: белый, без запаха.

Давление паров: 1 x 10^-3 МПа (при 25 °C).

Коэффициент распределения октанол-вода: logP K_ow = 2,32.

Температура плавления: 140 °C.

Растворимость в воде, мг/дм³ (при 20 °C и pH 5,5): 6,2.

Растворимость в органических растворителях (г/дм³, при 20 °C): ацетон - 293; гексан - 0,1; дихлорметан - 346; метанол - 13,8; толуол - 31,2; этилацетат - 142.

Быстро разрушается в щелочной среде.

Подвергается гидролизу, T₅₀ составляет при pH 5 - 11,1 суток, при pH 7 - 20,1 дней, при pH 9 - 3,2 дня.

Основной метаболит изоксафлютола - RPA 202248.

Название по ИЮПАК:

RPA 202248: 2-циано-3-циклопропил-1-(2-метилсульфонил-4-три-фторметилфенил)-пропан-1,3-дион.

Структурная формула:

Молекулярная масса: 359.

Эмпирическая формула: C₁₅H₁₂F₃NO₄S.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: белый, без запаха.

Температура плавления: 137,3 °C.

Растворимость в воде, мг/дм³ (25 °C): 326.

рКа: 1,64.

Краткая токсикологическая характеристика. Изоксафлютол относится к малоопасным веществам по острой оральной (ЛД₅₀ для крыс более 5 000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД₅₀ для кроликов более 2 000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК₅₀ для крыс (4 часа) более 5 230 мг/м³). Кумулятивные свойства изоксафлютола выражены слабо; не раздражает кожу и слабо раздражает слизистую оболочку глаз. Аллергенное действие изоксафлютола не выявлено.

Изоксафлютол - гербицид системного действия, проникающий через корни и листья растений и ингибирующий биосинтез каротиноидов. Хорошо подавляет развитие широколистных и злаковых сорняков в посевах кукурузы при довсходовой обработке или допосевном внесении с нормой расхода 75 - 140 г д.в./га. В России применяется против однолетних злаковых и двудольных сорных растений в посевах кукурузы с нормой расхода по препарату 0,1 - 0,16 кг/га.

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,002 мг/кг массы человека; ПДК в воде водоемов - 0,02 мг/дм³; ОДК в почве - 0,1 мг/кг; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 1,0 мг/м³; в атмосферном воздухе - 0,001 мг/м³; МДУ в продукции (мг/кг): зерно кукурузы - 0,05, кукурузное масло - 0,01; ВМДУ в импортируемой продукции (мг/кг): горох - 0,02.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении RPA 202248 с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием диодно-матричного детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, перевода изоксафлютола в его метаболит RPA 202248 в щелочной среде, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах N 1.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

Примечание. Допускается использование других средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование других реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах, установление градуировочной зависимости.

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.

Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм³. Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.

Этилацетат промывают равным объемом 5%-го раствора натрия углекислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 12 - 24 часов. Затем этилацетат сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей. Этилацетат перегоняют при температуре 77,1 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 77,1 °C, отбрасывают.

Хлористый метилен промывают равным объемом 5%-го раствора натрия углекислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 12 - 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре 40,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 40,0 °C, отбрасывают.

Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей.

Гексан перегоняют при температуре 68,7 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 68,7 °C, отбрасывают.

Хлороформ, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем хлороформ сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей.

Хлороформ перегоняют при температуре 61,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 61,2 °C, отбрасывают.

Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³ и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

7.2.1.1. Приготовление 0,2%-го (по объему) раствора трифторуксусной кислоты

В мерную колбу объемом 1 000 см³ помещают 500 см³ бидистиллированной воды и 2 см³ 99%-й трифторуксусной кислоты, перемешивают, доводят объем в колбе до метки бидистиллированной водой, еще раз тщательно перемешивают. Раствор хранится в течение недели при комнатной температуре.

7.2.1.2. Приготовление раствора для разведения проб

Мерным цилиндром объемом 100 см³ отмеряют 80 см³ ацетонитрила и помещают в коническую колбу на 100 см³. Туда же помещают 20 см³ 0,2%-го раствора трифторуксусной кислоты. Смесь тщательно перемешивают и используют для растворения проб перед хроматографированием.

7.2.1.3. Приготовление 1 М раствора гидроокиси натрия

В мерную колбу на 500 см³ переносят 20 г гидроокиси натрия, добавляют 200 - 300 см³ дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой!).

Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил и 0,2%-й раствор трифторуксусной кислоты.

В плоскодонную колбу объемом 1 000 см³ помещают 500 см³ ацетонитрила и 500 см³ 0,2%-го раствора трифторуксусной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 см³/мин в течение 5 минут, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 минуту.

7.2.3.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией RPA 202248 1,0 мг/см³

Взвешивают 50 мг RPA 202248 в мерной колбе объемом 50 см³. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.3.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией RPA 202248 10,0 мкг/см³

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 100 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.2.3.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией RPA 202248 1,0 мкг/см³

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 3 используется для установления градуировочной зависимости и хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.2.3.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией RPA 202248 0,5 мкг/см³

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 4 используется для установления градуировочной зависимости и хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.2.3.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией RPA 202248 0,2 мкг/см³

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 50 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 5 используется для установления градуировочной зависимости и хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.2.3.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией RPA 202248 0,1 мкг/см³

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 100 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 6 используется для установления градуировочной зависимости и хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.2.3.7. Стандартные растворы RPA 202248 с концентрацией 2,0; 1,0; 0,5 и 0,2 мкг/см³ для внесения в контрольные образцы

Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора N 2 готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,5 и 0,2 мкг/см³ и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы зерна нута.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации RPA 202248 в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³.

В инжектор хроматографа вводят по 10 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см³/мин (1 - 2 кап./с).

Патрон N 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см³ метанола и 5 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:1. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

Из стандартного раствора RPA 202248 в ацетонитриле концентрацией 1 мкг/см³ отбирают 1 см³, помещают в концентратор объемом 100 см³ и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 1 см³ гексана, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 см³ раствора для разведения проб (п. 7.2.1.2) и хроматографируют.

Исходный концентратор обмывают 2 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:1 и 10 см³ гексана и последовательно вносят на патрон. Элюаты собирают в концентратор объемом 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C и хроматографируют.

Исходный концентратор последовательно обмывают 10 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:1 и 10 см³ метанола и последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой фракции собирают в концентратор объемом 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ раствора для разведения проб (п. 7.2.1.2) и 10 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие RPA 202248, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения RPA 202248 на концентрирующих патронах N 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30 °C и скорости потока подвижной фазы 1 см³/мин в течение 3 - 4 часов.

Отбор проб проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 8758-76 "Нут. Требования при заготовках и поставках".

Отобранные пробы зерна нута подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Образец измельченного зерна нута массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют 50 см³ ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну. Ацетонитрильный экстракт фильтруют через фильтр низкой плотности в делительную воронку объемом 250 см³. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см³ ацетонитрила и помещая на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракты объединяют в делительной воронке объемом 250 см³.

К ацетонитрильному экстракту прибавляют 50 см³ гексана и встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний слой (ацетонитрил) возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру еще раз, используя 50 см³ гексана. Нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см³, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.

К сухому остатку в концентраторе, полученному в п. 9.1.1, прибавляют 3 см³ ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора, 30 см³ воды, 5 г хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см³. Водную фракцию промывают тремя порциями гексана объемом по 20 см³ каждая, встряхивая делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а водную фракцию собирают в коническую колбу объемом 250 см³. Затем содержимое колбы подщелачивают 1 М раствором гидроокиси натрия до pH 9, перемешивают. Водную фракцию возвращают в делительную воронку и промывают одной порцией хлороформа объемом 30 см³, встряхивая делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке хлороформ отбрасывают.

RPA 202248 экстрагируют тремя порциями этилацетата объемом по 30 см³, каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (этилацетат) объединяют в концентраторе объемом 250 см³, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Далее экстракт подвергают очистке на концентрирующих патронах N 1.

Сухой остаток, полученный по п. 9.1.2, растворяют в 1 см³ ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 1 см³ гексана, перемешивают и вносят на заранее подготовленный патрон. Исходный концентратор последовательно обмывают 2 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:1, 10 см³ гексана и 10 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:1 и вносят полученные растворы на патрон. Элюаты отбрасывают. RPA 202248 элюируют с патрона 10 см³ метанола, собирают в концентратор объемом 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ раствора для разведения проб (п. 7.2.1.2) и 10 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Хроматографическая система, включающая:

- хроматограф жидкостный с диодно-матричным детектором, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °C и с возможностью использования стандартного автосамплера с дозирующим объемом от 0,1 до 100 мм³ для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему;

- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая стальная длиной 150 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18.

Предколонка хроматографическая стальная длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами C18.

Температура колонки: 30 °C.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,2%-й раствор трифторуксусной кислоты в соотношении 80:20.

Длина волны: 300 нм.

Чувствительность: не менее 10 mAU (миллиединиц абсорбции) на шкалу.

Объем вводимой пробы: 10 мм³.

Линейный диапазон детектирования: сохраняется в пределах 2 - 20 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор RPA 202248 с концентрацией 1,0 мкг/см³, соответственно разбавляют.

Поскольку молекулярные массы изоксафлютола и RPA 202248 одинаковы, никаких дополнительных пересчетов не требуется.

Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание RPA 202248 в пробах рассчитывают по формуле без учета полноты извлечения вещества из проб:

X - содержание RPA 202248 в пробе, мг/кг;

S_ст - высота (площадь) пика стандарта, мм;

S_пр - высота (площадь) пика образца, мм;

A - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемого образца, г (см³);

P - содержание RPA 202248 в аналитическом стандарте, %.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

где X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

--------------------------------

<*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений и контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляются в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание RPA 202248 в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,1 до 1,0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

где X - концентрация RPA 202248 контрольного измерения, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора RPA 202248 в ацетонитриле, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

8 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (A) превышает 8%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов RPA 202248, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом "добавок".

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

где - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

где - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры K_к рассчитывают по формуле:

где , , C_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K_к) с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

где X₁, X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.