"МУК 4.1.3408-16. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств крезоксим-метила в ботве и клубнях картофеля методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 29.12.2016)

1. Разработаны сотрудниками ФГБНУ "Всероссийский НИИ защиты растений" (И.А. Цибульская, О.К. Остроухова).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22 декабря 2016 г. N 2).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 29 декабря 2016 г.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации от 14.12.2015 N 01.5.04.204/01.00043/2015.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации крезоксим-метила в ботве и клубнях картофеля в диапазоне концентраций 0,05 - 0,5 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Крезоксим-метил

(Е)-метил-2-метоксиимино-2-{2-(о-толилокси-метил)фенил}ацетат (IUPAC).

C₁₈H₁₉NO₄

Молекулярная масса: 313,4.

Химически чистое вещество представляет собой белое кристаллическое вещество со слабым запахом.

Температура плавления: 97,2 - 101,7 °C.

Давление пара при 20 °C: 2,3 x 10^-3 МПа.

Растворимость (в г/дм³ при 20 °C): вода - 0,002; гептан - 1,7; толуол - 111; дихлорметан - 939; метанол - 14,9; ацетон - 217; этилацетат - 123.

Стабильность к гидролизу при 20 °C: DT₅₀ = 34 дня (pH 7), 7 часов (pH 9). В биологически активных почвах в аэробных условиях крезоксим-метил быстро разрушается: DT₉₀ = менее 3 дней.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность LD₅₀ для крыс более 5 000 мг/кг, острая дермальная токсичность LD₅₀ для крыс превышает 2 000 мг/кг. Не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика, не обладает мутагенными и сенсибилизирующими свойствами. Не токсичен для пчел, дождевых червей, полезных насекомых и птиц.

Область применения препарата. Синтетический фунгицид из класса стробилуринов, являющихся продуцентами гриба Strobilurus tenacellus. Вещество эффективно против широкого круга грибных патогенов хлебных злаков, овощных, кормовых, технических и плодовых культур. Обладает защитным, лечебным и искореняющим действием.

В России для крезоксим-метила МДУ в зерне хлебных злаков 0,1 мг/кг, в сахарной свекле 0,05 мг/кг, для картофеля гигиенические нормативы не установлены.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Методика основана на определении крезоксим-метила методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после его извлечения из образцов картофеля водноорганическим экстрагентом, очистки экстракта в системе двух несмешивающихся растворителей.

Идентификация крезоксим-метила проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83 и необходимые средства для оказания первой (доврачебной) помощи. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать федеральные нормы и правила в области промышленной безопасности "Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением" (утв. Приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 N 116). Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

К выполнению измерений допускается специалист, прошедший обучение, освоивший данную методику, владеющий техникой, имеющий опыт работы в химической лаборатории и подтвердивший соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки гроб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед началом анализа капиллярную колонку кондиционируют в токе азота при температуре термостата колонок 250 °C до стабилизации нулевой линии.

Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют. Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 см³ растворителя испаряют при помощи вакуумного ротационного испарителя при температуре 40 °C до объема 1 см³ и хроматографируют. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.

7.3.1. Для экстракции крезоксим-метила из матрицы используется раствор ацетон: вода в соотношении 3:1 (по объему).

В плоскодонную колбу на 250 см³ вносят 60 см³ ацетона и 20 см² дистиллированной воды, раствор перемешивают.

7.3.2. Насыщенный раствор хлористого натрия в воде. 320 г хлористого натрия растворяют в 1 дм³ дистиллированной воды. Раствор можно хранить при комнатной температуре в течение недели.

7.4.1. Основной раствор с концентрацией 0,1 мг/см³: точную навеску крезоксим-метила (10 +/- 0,1) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в ацетоне и доводят объем до метки тем же растворителем.

Градуировочные растворы с концентрациями крезоксим-метила 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления по объему гексаном.

7.4.2. Раствор N 1 с концентрацией 10,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 10 см³ основного раствора и доводят до метки гексаном.

7.4.3. Раствор N 2 с концентрацией 5,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 5,0 см³ раствора N 1 и доводят объем до метки гексаном.

7.4.4. Раствор N 3 с концентрацией 2,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 2 см³ раствора N 1 и доводят объем до метки гексаном.

7.4.5. Раствор N 4 с концентрацией 1,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1 см³ раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение недели.

При изучении полноты определения крезоксим-метила в ботве и клубнях картофеля свеклы используют соответствующие ацетоновые растворы вещества, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетоном.

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация крезоксим-метила в растворе) в хроматограф вводят по 1 мм³ градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации крезоксим-метила в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии:

S - площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

C - аттестованное значение массовой концентрации крезоксим-метила в градуировочном растворе;

C_к - результат контрольного измерения массовой концентрации крезоксим-метила в градуировочном растворе;

- норматив контроля градуировочного коэффициента, % ( при P = 0,95).

Отбор проб проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ 7194-81 "Картофель свежий. Правила приемки и методы определения качества". Отобранные пробы хранят до анализа в герметичной п/э упаковке в морозильной камере при -18 °C. Пробы картофеля перед анализом, не размораживая, измельчают на терке или в гомогенизаторе.

Навеску измельченной пробы (20 +/- 0,1) г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, добавляют 70 см³ смеси ацетон/вода в соотношении 3:1 (по объему) и экстрагируют крезоксим-метил в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу. К остатку добавляют 50 см³ той же смеси и проводят повторную экстракцию. Объединенные экстракты упаривают до водного остатка на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Остаток фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку вместимостью 250 см³, добавляют 10 см³ насыщенного раствора хлористого натрия и экстрагируют крезоксим-метил тремя порциями по 30 см³ дихлорметана. Дихлорметановый раствор пропускают через слой безводного сернокислого натрия и упаривают на ротационном испарителе досуха при температуре не выше 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 1 см³ гексана и 1 мм³ вводят в испаритель хроматографа.

Газовый хроматограф с термоионным детектором и кварцевой капиллярной колонкой длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм с толщиной слоя неподвижной фазы (35% дифенилсилоксана + 65% диметилсилоксана) - 0,25 мкм.

Температура колонки программируется от 220 °C (1 мин) до 290 °C (5 мин) со скоростью 25 °C/мин, температура испарителя 300 °C, детектора 380 °C.

Расход газа-носителя (азот) через колонку 11,7 см³/мин (180 кПа), сброс 4,7 см³/мин, поддув в детектор 20 см³/мин, расход водорода 11 см³/мин, воздуха 200 см³/мин. Деление потока 1:3. Объем вводимой пробы 1 мм³.

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание крезоксим-метила в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

S_x - площадь пика крезоксим-метила на хроматограмме испытуемого образца, мв/с;

K - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;

V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см³;

P - навеска анализируемого образца, г;

f - полнота извлечения крезоксим-метила, приведенная в табл. 2, %.

Содержание остаточных количеств крезоксим-метила в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор крезоксим-метила 10 мкг/см³, разбавляют гексаном.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предел повторяемости:

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости .

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее нижней границы определения" (например: менее 0,05, где 0,05 мг/кг - предел определения крезоксим-метила в клубнях картофеля).

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки C_д должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

- граница абсолютной погрешности, мг/кг:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры K_к рассчитывают по формуле:

, , C_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K_к) с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предел воспроизводимости (R):

X₁ и X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.